均用接种针穿至管底，其中五支 加入灭菌的液体石蜡约1厘米厚。 35，培养48小时观察结果。培养 基颜色变黄即为产酸。
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14
结果
代谢类型 发酵型 氧化型 产碱型
加蜡封口管 开放管
产酸
产酸
不变色
产酸
不变色
不变色
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15
糖醇发酵试验
原理：各种细菌因含有发酵不同 糖、醇类的酶，所以分解糖、醇 类的能力各不相同。分解糖、醇 类后产生的代谢产物可因菌种不 同而异，有的产酸、产气，有的 仅产酸，故用于鉴别细菌。
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29
胆汁七叶苷试验
原理：在10-14%胆汁存 在下，测定细菌水解葡 萄糖苷七叶苷为七叶亭 和葡萄糖的能力。
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30
胆汁七叶苷培养基成分
蛋白胨 5g
牛肉浸膏 3g
牛胆汁（胆汁）40g
七叶苷 1g
柠檬酸铁 0.5g
琼脂
15g
蒸馏水 1000ml
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31
结果：培养基变为黑色或 深褐色为阳性。有生长物 时，并不表示七叶苷裂解， 仅表示胆汁浓度不能抑制D 群链球菌外的细菌生长。
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10
碳水化合物的代谢试验
氧化-发酵试验（OF试验）
糖醇发酵试验
B—半乳糖苷酶试验（ONPG试验）
甲基红试验
VP试验
胆汁七叶苷试验
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11
氧化-发酵试验（OF试验）
原理：细菌在分解葡萄糖的过
程中，必须有分子氧参加的称
为氧化型；在无氧条件下降解
葡萄糖的称为发酵型；不分解
葡萄糖的细菌称为产碱型。利
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16

糖、醇类试验培养基成分
蛋白胨水或肉膏汤 100ml 所需的糖、醇或苷类 0.5或1g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 0.1ml
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17
结果
接种的细菌，若能耐分解培 养基中的糖类产酸时，则使 培养基中的指示剂呈酸性反 应。若产气可使半固体培养 基内或液体培养基中的倒管 内出现气泡。若不分解则无 变化。
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22
葡萄糖蛋白胨水培养基成分
多价蛋白胨 7g
葡萄糖
5g
磷酸氢二钾 5g
蒸馏水
1000ml
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23
方法：被检菌接种于上 述培养基内，于35℃培 养48小时，于2ml培养液 内加甲基红指示剂2滴， 立即观察结果。
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24
结果：红色为阳性；桔 红色为弱阳性；黄色为 阴性。
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25
微生物基本试验原理及操作
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1
微生物基本试验
碳源和氮源利用试验 碳水化合物的代谢试验 各种酶类试验 氨基酸和蛋白质代谢试验
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2
碳源和氮源利用试验
柠檬酸盐试验 葡萄糖酸盐试验
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3
柠檬酸盐试验
原理：有些细菌能利用柠檬酸盐 作为唯一碳源，分解柠檬酸钠生 成碳酸钠，使培养基呈碱性。能 利用柠檬酸盐作唯一碳源的细菌， 也能利用铵盐作为唯一氮源，铵 盐被分解为氨而产生碱性。
VP试验
原理：有些细菌在葡萄糖的代谢过
程中生成丙酮酸，丙酮酸进一步脱
羧后可产生乙酰甲基甲醇。乙酰甲
基甲醇在碱性溶液中被空气的氧氧
化为二乙酰（丁二酮），进而与培
养基内蛋白胨中的精氨酸所含的胍
基发生反应，生成红色化合物，即
VP反应阳性。培养基中的胍基太少
时，加入少量含胍基的化合物，如
肌酸或肌酸酐等，可加速此反应。
用此试验可以区别细菌的代谢
类型。
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12
Hugh-Leifson二氏培养基（O-
F培养基）成分
蛋白胨 2g
磷酸氢2钾0.3克
氯化钠 5g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香酚蓝溶液 12ml
琼脂
2.5g
蒸馏水 1000ml
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13
方 法 ： 将 待 检 菌 接 种 于 二 支 Hugh-Leifson 培 养 基 的 试 管 中 ，
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7
方 法 ： 接 种 大 量 待 检 菌 于 培养基内，35，24-48小时， 0.5ml培养基加班氏试剂3滴
左右，加热煮沸后观察结 果。
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8
葡萄糖酸盐蛋白胨肉汤成分
蛋白胨 0.15g 酵母浸膏 0.1g 磷酸二氢钾 0.1g 葡萄糖酸钾（或钠）4g 蒸馏水 100ml
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9
结果：出现黄色到橙 红色沉淀为阳性，无 颜色变化为阴性。
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18
B—半乳糖苷酶试验（ONPG 试验）
原理：有的细菌可产生B-半乳糖 苷酶，此酶可分解邻-硝基酚-BD- 半 乳 糖 苷 （ ONPG）。ONPG 为无色，经B-半乳糖苷酶水解后， 可产生黄色的邻硝基酚，即使浓 度很低也能检出。
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19
结果
呈 现 黄 色 为 阳 性 反 应 。 迅 速 及迟缓分解乳糖的细菌ONPG 试验为阳性，本试验可作为 迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴 定方法。
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32
各种酶类试验
过氧化氢酶（触酶）试验
氧化酶试验
血浆凝固酶试验
硝酸盐还原试验
胆汁溶解试验
环腺苷酸（cAMP）试验
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33
过氧化氢酶（触酶）试验
原理：有些细菌具有过 氧化氢酶，能将过氧化 氢酶分解为水。
试剂：3%过氧化氢溶液。
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34
方法：①玻片法：用牙签挑取 18～24小时培养的菌苔，置于 洁净的玻片上，滴加3%过氧化 氢溶液1～2滴。②试管法：取 不含血液的18～24小时培养物 一接种环于试管内，加入1ml 3%过氧化氢溶液。3%过氧化氢 溶液应置于棕色瓶内冷藏。
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20
甲基红试验
原理：某些细菌在糖代谢过程中，
分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸 可进一步被分解为甲酸、乙酸、 乳酸等，而使培养基的pH下降至 4.5以下，加入甲基红指示剂出现 红色（阳性）。
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21
甲基红试验
原理：有些细菌分解葡萄糖产酸 量少，或产生的酸进一步转化为 其它物质（如醇、酮、醛、气体 和水），则培养基的酸碱度仍在 6.2以上，故加入甲基红指示剂呈 黄色（阴性）。
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26
试剂：甲液：6%a-萘酚乙醇溶液
乙液：40%氢氧化钾溶液
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27
方法：将被检菌接种葡萄糖 蛋白胨水培养基后，于35培 养48小时，于2ml培养基内 加入甲液1ml和乙液0.4ml， 振摇后观察结果。
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28
结果：于数分钟内呈红
色为阳性；如无红色出 现，而且于35℃中4小时
后仍如故者即为阴性。 本试验较为敏感。
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4
西蒙氏柠檬酸盐培养基成分
MgSO4-7H2O 0.2g
NH4H2PO4 1g
K2HPO4
1g
柠檬酸钠
5g
氯化钠
5g
琼脂
20g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40ml
蒸馏水
1000ml
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5
结果：阳性者表面上 长有菌落，培养基 变为蓝色。
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6
葡萄糖酸盐试验
原 理 ： 检 查 细 菌 是 否 具 有 氧化葡萄糖作为唯一碳源， 并具有还原2-酮基葡萄糖酸 盐与班氏试剂混合加热生 成黄红色酮类的能力。