不同种类凝胶颗粒的网孔大小取决于制 备时所添加的交联剂比例。
色谱柱中常用的是琼脂糖凝胶、葡聚 糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶，均适用于水相 洗脱剂。
葡聚糖的商品型号按交联度大小分类， 以每克干凝胶吸水量10倍的数值来表示。
葡聚糖凝胶（Sephadex G－25） 羧丙基葡聚糖凝胶（Sephadex LH－20）
密度接近液体－－萃取能力强 粘度接近气体－－传质性能好
常用的超临界流体有二氧化碳、氧化 亚氮、乙烷、乙烯、甲醇、乙醇和水等
超临界流体的性质 （1）溶解度高，选择性好 （2）临界压力不能太高 （3）临界温度在室温附近 （4）价格便宜，容易获得 （5）化学稳定，无毒，不腐蚀设备
超临界流体萃取操作 （1）在超临界状态下，溶剂气体与原料接 触进行萃取获得萃取相；
3、溶剂提取的方法
浸渍法 将药材用适当的溶剂在常温或温热
（60～80℃）条件下浸泡一定时间，溶出有 效成分。
渗漉法
将药材粗粉装入渗漉筒中，不断添加浸 出溶剂使其渗过药粉，从渗漉筒下口流出浸 出液的一种浸提方法。
煎煮法
将药材粗粉加水煮沸，是一种传统提取 方法。一般需煎煮2～3次，煎煮的时间可根 据药材的量及质地而定。
操作流程：
总提取物的水混悬液 石油醚萃取
石油醚萃取液
水层 氯仿萃取
氯仿萃取液
水层 正丁醇萃取
正丁醇萃取液 水层
二、色谱分离方法 色谱法是利用混合物中各种成分对固
定相和流动相亲和作用的差异而使之相互 分离的方法。
色谱法是分离天然药物化学成分最重 要、应用最广范、使用最多的方法。
按移动相种 类分：
具有相同骨架化合物 的 UV光 谱 基 本 相 同 ， 但也会因取代的助色 团不同，而产生差异。
不同基本骨架化合物 由于具有相同的生色 团 ， 其 UV 光 谱 有 可 能相同。
二、红外光谱 是记录有机化合物分子吸收红外光后产生化
学键振动而形成的吸收光谱，测定波数在400～ 4000cm-1之间。
光照射化合物分子，分子中的电子可因光线照射从 基态跃迁到激发态，从而使透过化合物的光强减弱， 在不同波长下测定化合物的吸收度，得到紫外-可 见吸收光谱。
应用：可提供化合物的基本骨架信息 样品用量少（5-10μg）
生色团：产生紫外吸收的不饱和基团，如C=C, C=O, O=N=O
助色团：其本身是饱和基团（常含有杂原子）， 它连到生色团上时，能使后者吸收波长 变长或吸收强度增加，如-OH,-NH2,-Cl
物，利用其酰胺键与酚类、酸类、醌类等化 合物形成氢键强度及数量不同，而产生不同 强度的吸附力，从而达到分离目的。
吸附规律：
（1）形成氢键的数目 越多，吸附力越强。
（2）分子内氢键 被分离物质形成分子内氢键的吸附力
减弱。 （3）芳香程度
分子中芳香程度化高者，吸附力强。
OH
OH
OH
HO
OH
OH
OH
OH
树脂（Ⅲ）
N CH3 O
O CO CH
Ⅱ
Ph CH2OH
N+OH-
洗脱液（Ⅲ）
Na2CO3 洗脱 树脂
Ⅲ
OCH3
OCH3
（五）大孔吸附树脂法
大孔吸附树脂是一类不含交换基团且 有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好 的大孔网状结构和较大的比表面积，可以 通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有 机物。
大孔吸附树脂分离原理为吸附作用和 分子筛作用相结合。
气相色谱 液相色谱
柱色谱
按操作形式分：
薄层色谱 纸色谱
按分离基本原理分：
分配色谱 吸附色谱 离子交换色谱 空间排阻色谱 电泳色谱
（一）硅胶色谱法 色谱硅胶是一种弱酸性吸附剂，用于
分离中性和酸性成分。 分子中具有硅烷氧（-Si-O-Si-）交联
结构，其表面有很多硅醇基（-SiOH）。
原理：利用硅醇基对不同化合物吸附能 力不同，以及不同洗脱剂对不同化合物洗脱 能力不同来分离混合物中不同组分。
色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的 曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间。
基线 ↓
← 色谱峰 峰宽
保留时间（分）
峰高
第三节 结构鉴定方法
从天然物中分离到化合物单体后,需进行结构 鉴定,一般步骤： (1) 确定单体化合物的纯度 (2) 通过文献调研，理化常数和化学定性分析等初
稀氢氧化钠洗脱 洗脱液
树脂
强碱性阴离子交换树脂
（中性成分）
（酸性成分）
稀氢氧化钠洗脱
流出液
树脂
（碱性成分）
（两性成分）
碱性不同的生物碱的分离
水提液 弱酸性阳离子交换树脂
流出液
树脂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ） 水洗脱
Ph
洗脱液 （Ⅰ）
树脂（Ⅱ、Ⅲ）
O N CH3 O CO CH
NH4Cl 洗脱
Ⅰ
CⅡH2OH
Ⅰ
洗脱液（Ⅱ）
声波产生的强烈振动也能加速细胞内物质的
扩散、释放和溶解，提高提取效率。
4、影响溶剂提取效率的因素
溶 剂 方 法 粉碎度 温 度 时 间
二、水蒸气蒸馏法 将提取液加热沸腾，使溶剂气化并冷凝
为液体而回收，达到提取液浓缩的目的。
适用于能随水蒸气蒸馏而不被破坏的化 学成分的提取，如挥发油。
三、升华法 固体物质受热直接气化，遇冷后又凝固
（六）高效液相色谱法 高效液相色谱法是对经典色谱法进行改
进，技术上，流动相改为高压输送；色谱柱 是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成， 从而使柱效大大高于经典液相色谱；同时柱 后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行 连续检测。
高效液相色谱法的特点 (1)高压 一般可达150～3.5万KPa (2)高速 一般可达1～10ml/min (3)高效 各种新型固定相，提高了分离效率
步判断结构类型 (3) 由波谱法等确定分子式，分子量，结构官能团
→推出结构片断或骨架→推出平面结构→确定 其立体结构
结构鉴定的特点 难于合成品 结构研究的总原则
尽可能不消耗或少消耗试样 与文献数据比较 波谱综合分析 必要时辅以化学手段
一、紫外光谱 是用一定波长（200～700nm）的紫外及可见
洗脱时，溶剂极性由小到大改变，且 常为混合溶剂。
被分离化合物的极性
化合物极性基团极性越大、数量越多， 在硅胶上的吸附力越强。
HO
O
OH
O
化合物1
OH OH
OH
HO
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
O
OH
O
化合物2
OH OH
结构中官能团的种类和极性： R-COOH﹥Ar-OH﹥R-OH﹥R-NH-﹥ R-CO-NH-﹥ R-CHO﹥R-CO-R﹥ R-COO-R﹥R-O-R﹥R-X﹥R-H
(4)高灵敏度 如荧光检测器，灵敏度可达 10-11g；用样量少（几微升）
（5）适应范围宽 只要求试样能制成溶液，相对分子量大
于400的有机物原则上都可应用此方法来进行 分离、分析。
液相色谱流程图 PUMP
Detector
W
Data station (Recorder)
or Collection
-OH -C-O-
三、核磁共振波谱 是利用能量很低的电磁波照射暴露在磁场中
的分子，电磁波能与分子中的磁性核（1H、13C） 相互作用，引起磁性核发生共振跃迁而产生吸收信 号，记录吸收信号的而强度，对应其吸收频率所得 的波谱。
一维核磁共振波谱 1H-NMR、 13C-NMR、
阳离子交换树脂： RSO3ˉH＋+ Na＋Clˉ
RSO3ˉNa＋+ H＋Clˉ
阴离子交换树脂： RN＋OHˉ+ Na＋Clˉ
RN＋Clˉ+ Na＋OHˉ
水提液中酸性、碱性、两性化合物的分离
水提液 强酸性阳离子交换树脂
流出液
树脂
（酸性、中性成分）
（碱性、两性成分）
强碱性阴离子交换树脂
稀盐酸洗脱
流出液
升华法
原理：遇热挥发，遇冷凝固 范围：游离蒽醌
压榨法
原理：机械挤压 范围：新鲜药材、种籽植物油
超临界流体萃取法
原理：利用超临界流体提取 范围：亲脂性强的成分
一、溶剂提取法 在渗透、扩散作用下，根据天然药物
中各类成分的溶解性，选择对活性成分溶 解度大而对无效成分溶解度效的溶剂，将 需要的活性成分从植物组织中溶解出来。
回流提取法
使用低沸点有机溶剂加热 提取天然药物有效成分时，为 减少溶剂的挥发损失，而需采 用得提取法。
连续回流提取法 在回流提取法基础上
的改进，能用少量溶剂进 行连续循环回流提取，充 分将有效成分浸出完全的 一种方法。
超声波提取法
是一种利用超声波浸提化学成分的方法。
是利用超声波的
，破坏植物药
材的细胞，使溶剂易于空渗化入作细用胞内；同时超
（2）将萃取相进行分离，脱除溶质，再生 溶剂。
改变压力超临界萃取流程
第二节 分离方法
一、溶剂分离法 （一）固 — 液溶剂分离法
根据“相似相溶”的规律，采用不同极 性溶剂对总提取物的化学成分进行分离。
这是一种初步的分离方法。
操作时，用不同极性的溶剂对总提取物 的干燥粉末进行依次抽提，溶剂的极性由低 到高，使其中的化学成分按照在不同极性溶 剂中溶解度的差异而分离。
（KA KB） β100 1次萃取，基本分离 10β100 1012次 β2 100次以上 β1 无法分离
上层 下层
例如：
某混合物含有A、B两种成分，现有氯 仿-水系统（甲）和正丁醇-水系统（乙）； 其中
KA甲 = 10， KA乙 = 5 KB甲 = 0.1，KB乙 = 10
请问该混合物用哪个溶剂系统进行分 离效果比较好？