ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ＨＬＡ—ＤＲＢｌ＊０１．￥１４０１ ａｎｄ ４１６ ａｌｌｅｌｅｓ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ＡＳＳＴ ａｎｄ ｔｈｅ
ｃｏｎｔｒｏｌｓ（矿＝１０．９２，Ｐｃ＝０．０３２；酽＝３５．３４，Ｐｃ＜０．０１；ｒ＝１２．６９，Ｐｃ＝０．０３２）．Ｐａｉｒｅｄ
ｉｎ
ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ
ｒｅ—
ｖｅａｌｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ
ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ＨＬＡ—ＤＲＢｌ４１４０１ ａｌｌｅｌｅ ｂｅｔｗｅｅｎ
ａｓ
ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ＡＳＳＴ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌｓ（ＲＲ＝１７．０９．Ｐｃ＜０．０１）ａｓ ｗｅｌｌ （ＲＲ＝７．２０．Ｐｃ＜０．０ １）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
感性的关系。方法对１４４例广西地区慢性荨麻疹患者进行自体血清皮肤试验，按试验结果分为阳性 组６２例，阴性组８２例。采用聚合酶链反应一序列特异性引物方法，对患者组和１９９例正常人对照组进 行ＨＬＡ—ＤＲＢｌ等位基因的分型，并分析ＤＲＢｌ基因在３个组中的分布。使用ＳＰＳＳｌ３．０统计软件分析。结 果ＤＲＢｌ＊０１、。１４０１、＊１６等位基因频率在阳性组、阴性组和正常人对照组问比较，差异均有统计学意义（ｘ２ ＝１０．９２，Ｐｃ＝Ｏ．０３；Ｘ２＝３５．３４，只＜０．０１；ｘ２＝１２．６９，只＝０．０３）。进一步在各组问进行两两比较，仅 ＤＲＢｌ。１４０１等位基因频率在自体血清皮肤试验阳性组与对照组问（ＲＲ＝１７．０９，Ｐ＜０．０１）及自体血清皮 肤试验阳性组与阴性组问（ＲＲ＝７．２０，Ｐ＜０．０１），差异均有统计学意义。结论ＤＲＢｌ。１４０１等位基因可能 是广西地区自体血清皮肤试验阳性慢性荨麻疹的易感基因或与其连锁。 【关键词】荨麻疹；等位基因；基因，ＭＨＣⅡ类；皮肤试验
１３０２、ＤＲＢＩ。１３０５、ＤＲＢｌ＋１４０２、ＤＲＢｌ＋１５等位基因频率的分布３组问比较，差异均无统计学意义。
万方数据
８０
生堡廛瓞型象蠢２Ｑ！！生！旦箍笪鲞第！翅—暨亟Ｊ
Ｄｅｒｍａｔｏｌ，Ｆｅｂｒｕａｇ
２０１２。Ｖ…ｏｌ
４５，Ｎｏ．２
表２慢性荨麻疹自体血清皮肤试验阳性组与对照组问ＨＬＡ—ＤＲＢｌ 等位基因频率的分布比较
应等位基因的特异性。选用Ｂ一珠蛋白基因第二内
与阴性组间差异有统计学意义，仅计算其病因学因
子。ＡＳＳＴ阳性组与阴性组，ＥＦ＝８５．４２％，ＡＳＳＴ阳性
含子一段保守区基因片段作为内参照物，产物大小
为５７８ ｂｐ。ＰＣＲ扩增体系为２５斗ｌ：上、下游特异性 引物各１¨ｌ，内对照引物ｃ、Ｄ各０．８ ｐ，１，Ｍｉｘ反应液
０．０１，ＲＲ＝１７．０９）及ＡＳＳＴ阳性组与阴性组比较 ｆ只＜０．０１，ＲＲ＝７．２０），差异均有统计学意义。其他
１．ＡＳＳＴ试验：对１４４例慢性荨麻疹患者均进 行ＡＳＳＴ试验。操作方法见文献［５］。
２．模板ＤＮＡ制备：取受检者ＥＤＴＡ抗凝血
６００“ｌ，按血液基因组ＤＮＡ提取试剂盒说明书抽
提基因组ＤＮＡ并置一２０ ｃｃ保存。 ３．ＨＬＡ—ＤＲＢｌ基因型分析：采用ＰＣＲ—ＳＳＰ方
万方数据
一立！苣廛肤科盘。叁２０ｌ！笙２月第笪鲞第互＆ⅡＣ地ＬＬｌ）ｅｒ—ｍａ—ｔｏｌ，Ｆ蛔Ｄ，＿四ｌ！，ｙ１１．４１：盟！．２
件：患者均为汉族，双亲３代均生活在广西，相互问 无血缘关系，且疾病处于活动期；ｌ周内未使用抗组
７９
较采用ｔ检验，性别比采用矿检验。等位基因频率
采用直接计数法，两组间比较采用四格表ｘ２检验。 ３个组间等位基因频率比较采用ｘ２检验。Ｐ值均按
麻疹个人史及家族史，其中男８５例，女１１４例，年 龄１８～６４（３６。８±８．１）岁。每例均抽取外周静脉血
２
ｍｌ置一８０℃保存备用。３个组研究对象在年龄及
性别比例上均衡可比（Ｐ＞０．０５）。
在设计的１６对引物中，ＡＳＳＴ阳性组检测出
１２对等位基因，基因频率范围为０．８１％～２５％； ＡＳＳＴ阴性组检测出１ １对等位基因，基因频率范围 为０．６１％～２１．９５％；正常人对照组中检测出１６对 等位基因，基因频率范围为０．７５％～１６．０８％。 ＤＲＢＩ＊０１、木１４０１和水１６等位基因频率在三组间比
二、主要试剂与仪器
Ｔａｑ
ＤＮＡ聚合酶、ｄＮＴＰ购自宝生物工程（大连）
有限公司，ＨＬＡ—ＤＲＢｌ等位基因序列特异性引物及
内对照引物购自上海生工生物工程技术服务有限公 司。Ｂｉｏｍｅｔｒａ ＰＣＲ仪购自德国Ｂｉｏｍｅｔｒａ公司。 三、方法
较，差异有统计学意义（酽＝１０．９２，Ｐｃ＝０．０３２；妒＝ ３５．３４，Ｐｃ＜０．０１；ｒ＝１２．６９，Ｐｃ＝０．０３２）。ＤＲＢＩ术１４０１ 等位基因频率ＡＳＳＴ阳性组与对照组比较（Ｐ＜
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ｕｒｔｉｃａｒｉａ；Ａｌｌｅｌｅｓ；Ｇｅｎｅｓ，ＭＨＣ ｃｌａｓｓ ＩＩ；Ｓｋｉｎ
ｔｅｓｔｓ
临床上将自身免疫性荨麻疹（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ
的研究表明，ＨＬＡ一１１类基因是自身免疫性疾病重要 的遗传易感因子。本研究旨在探讨广西地区ＡＳＳＴ 阳性慢性荨麻疹与ＨＬＡ—ＤＲＢｌ等位基因遗传易感 性的关系。
７８
巾华皮肤科杂ｊ基２０１２堡量旦第鼻５卷第２期Ｃｈｉｎ』Ｄｅｍｍｔｏ—ｌ
Ｆｅｂｒｕａｒｙ
２０１２，Ｖ０１．４毛坠２
・论著・
自体血清皮肤试验阳性慢性荨麻疹与
ＨＬＡ—ＤＲＢ １基因的相关性研究
吴易
蒙金秋严煜林
【摘要】
曹存巍
刘栋华
梁伶
目的探讨广西地区白体血清皮肤试验阳性慢性荨麻疹与ＨＬＡ—ＤＲＢｌ等位基因遗传易
等位基因频率在ＡＳＳＴ阳性组、阴性组与对照组间 两两比较，差异均无统计学意义。携带ＤＲＢｌ术１４０１ 等位基因的ＲＲ大于１，且仅有ＤＲＢｌ｝１４０１等位基
因频率在ＡＳＳＴ阳性组与对照组间及ＡＳＳＴ阳性组
法分析ＨＬＡ—ＤＲＢｌ基因多态性，参照文献［６］设计 并合成１６对特异性引物，其所扩增的产物具有相
统计学意义，提示ＤＲＢｌ＊０４等位
基因与Ａｕ有相关性，这与我们的 研究结果不一致。因ＨＬＡ等位基 因频率分布存在种族、地区及群 体的差异，不同地区、不同民族的 研究结果不尽相同。不同等位基 因在群体中出现的频率各异，在
对象与方法 一、对象 ２００９年３月至２０１０年７月在广西医科大学 第一附属医院皮肤科门诊确诊的慢性荨麻疹患者 １４４例，诊断标准参照２００９年ＥＡＡＣＩ／ＧＡ２ＬＥＮ／ ＥＤＦ／ＷＡＯ荨麻疹及血管性水肿诊疗指南…。人选条
ｕｒｔｉｃａｒｉａ，Ａｕ）归为慢性荨麻疹的特殊类型，并认为 是多基因遗传背景下的自身免疫性疾病…。Ａｕ的发 病机制尚不清楚，目前认为Ａｕ与遗传因素，尤其是
ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔ：ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ（ｎ＝６２）ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ（ｎ＝８２）．ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｓｅｑｕｅｎｃｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ＨＬＡ—ＤＲＢ １ ａｌｌｅｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ １９９ ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｃｏｎ— ｔｒｏｉｓ．Ｃｈｉ．ｓｑｕａｒｅ
组与正常人对照组，ＥＦ＝４２５．８０％。见表１～３。
讨 论
１２．５斗ｌ，灭菌双蒸水７．９斗ｌ，０．０５～０．１ ｇ／Ｌ模板
ＤＮＡ
１¨ｌ。ＰＣＲ循环条件：９５℃预变性５
ｒａｉｎ，９４℃
变性３０ Ｓ，５６～６２℃退火３０ Ｓ（在梯度ＰＣＲ仪上找 出每对特异性引物的最适退火温度），７２ ｑＣ延伸
４５
Ａｕ近年来正在逐渐被人们所认识，其临床症 状较普通的慢性荨麻疹严重，大多表现为严重的难
与ＨＬＡ—ＩＩ类基因及免疫异常关系密切。Ａｕ的临床
诊断主要靠自身血清皮肤试验（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｓｅｒｕｍ ｓｋｉｎ ｔｅｓｔ，ＡＳＳＴ）［２ ３，在慢性荨麻疹患者中，ＡＳＳＴ阳性
者提示为ＡＵ，ＡＳＳＴ适用于Ａｕ的临床筛选㈦。近年
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０４１２—４０３０．２０１２．０２．００２ 作者单位：５３００２１南宁，广西医科大学第一附属医院皮肤性 病科 通信作者：吴易，Ｅｍａｉｌ：ｗｕｙｉｎｎｎ＠１６３．ｃｏｒｎ
ｔｅｓｔ
ｗａｓ
ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ
ｔｏ
ａｎａｌｙｓｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ＨＬＡ—ＤＲＢ １ ａｌｌｅｌｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ
３ ｇｒｏｕｐｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＳＰＳＳ １ ３．０ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ＡＳＳＴ
ＨＬＡ—ＤＲＢ １￥１ ４０１ ａｌｌｅｌｅ ｍａｙ ｂｅ，ｏｒ ｂｅ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ。ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｎｇ ｇｅｎｅ
ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｕｒｔｉｃａｒｉａ ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ＡＳＳＴ ｉｎ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｚｈｕａｎｇ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｒｅｇｉｏｎ．
Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ
ｔｅｓｔ
ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｓｅｒｌｌｍ ｓｋｉｎ
ｆＡＳＳＴ）ｉｎ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｚｈｕａｎｇ
Ｒｅｇｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ＡＳＳＴ ｗａｓ
ｔｏ
ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｉｎ １ ４４ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｕｒｔｉｃａｒｉａ．ｗｈｏ ｗｅｒｅ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ