生物样品前处理方法
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生物样品前处理的重要性
▲进行体内药物分析时,除了极少数情况下只需将样 品进行简单处理就可以直接测定外,都要采取分离、 净化、浓缩、化学衍生化等预处理技术,为测定创 造良好的条件。
▲样品预处理是体内药物分析中极为重要的环节,也 是分析中最困难、最繁复的工作。
▲由于药物在体内存在形式不同、待测药物浓度低、 生物介质组分繁杂、待测药物类型众多、理化性质 各异等原因,所以样品前处理过程的好坏会直接影 响到样品的测定结果。
生物样品前处理方法
姓名:朱文兵 学号: 201312282995 专业:药剂学
生物样品前处理的目的
▲将药物从缀合物或结合物中释放出来,以测定药物 的总浓度。
▲将微量药物从复杂的介质中纯化、富集出来。 ▲为适应和符合分析方法所要求的专属性、灵敏度等。 ▲防止分析仪器的污染,提高测定灵敏度、准确度、
精密度和选择性等。
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生物样品前处理的考虑因素
▲药物的理化性质和存在形式 ▲待测药物的浓度范围 ▲选用的生物样品类型 ▲样品预处理与分析技术的关系 ▲药物测定的目的
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生物样品前处理-有机破坏法
▲湿法破坏
硝酸-高氯酸法、电热消化器法、电热板消化法、烘箱消化 法。
▲干法破坏
高温电阻炉灰化法、低温等离子灰化法。
▲ 常用蛋白沉淀的方法 盐析法 有机溶剂沉淀法 等电点沉淀法 离子型聚合物沉淀法
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生物样品前处理-沉淀蛋白法
▲ 甲醇、乙睛、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有机溶剂,中 性盐常用的有硫酸铵、氯化铵等。
当药物水溶性强时,一般使用甲醇和乙腈。 当对药物定量回收要求高时,一般使用三氯醋酸。 通常1体积的血浆加入1.5体积以上的乙腈或加入2体积以上的甲醇可
▲溶剂的选择原则
了解药物与溶剂的化学结构与性质,按相似相溶原则选用。 对药物的未电离分子可溶,而对电离形式的分子不溶。 沸点低、易挥发、浓集,与水不相混溶,无毒,不易燃烧。 不易形成乳化,具有较高的化学稳定性和惰性。
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生物样品前处理-液液萃取法
▲ 液-液萃取法优点
应用范围广 提取效率较高
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生物样品前处理-固相萃取法
▲固相萃取发展趋势
改善填料性能,开发适用范围广的通用性填料。 与更多仪器实现在线联用。 使SPE小柱更加耐压且易于更换。
▲固相萃取新技术
固相微萃取技术 基质分散固相萃取技术 分子印迹固相萃取技术 磁力搅拌棒吸附萃取技术
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生物样品前处理-固相萃取法
▲固相萃取法简介
固相萃取技术(SPE)是从上世纪八十年代中期发展起 来的,广泛运用于医学、制药、环境、食品等领域。
固相萃取法(SPE)就是用固体物质作为萃取剂,采用 高效、高选择性的固定相,进行萃取的样品预处理技术。
▲固相萃取法原理
以吸附剂为固定相,当液体样品通过固定相时,保留其 中某些组分,再用适当溶剂冲出杂质。
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生物样品前处理-固相萃取法
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生物样品前处理-固相萃取法
▲固相萃取法优点
分析速度快,回收率高,自动化程度高。 溶剂用量少,不易产生乳化。
▲固相萃取法缺点
截面积小,流量低。 易堵塞,尤其是对生物样品。 易产生缝隙,降低提取效率。 重复性较差。
▲ 周丽华.体内药物分析测定前样品处理以及测定的基本程序 [J].内蒙古中医药,2013,10(1):116-118.
▲ 安彦.固相微萃取技术及其在药物分析中的应用[J].天津药 学,2009,21(6):52-55.
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▲ 液-液萃取法缺点
操作费时 有机溶剂用量大 易发生乳化现象
▲ 液பைடு நூலகம்液萃取新技术
液相微萃取(LPME)是在LLE基础上发展起来的,与LLE相比, LPME可以达到相同的灵敏度,同时所需的溶剂更少,比较适合于 生物样品中痕量、超痕量物质的测定。
LPME一般包括分散液相微萃取、单滴液相微萃取以及中空纤维液 相微萃取等。
主要参考文献
▲ 李章万,徐秀荣.色谱分析中生物样品的前处理方法[J].药物分 析杂志,1996,16(1):55-59.
▲ 刘松青,刘芳.药物色谱分析中生物样品的前处理方法[J].中国 医药用药评价与分析,2012,12(10):871-873.
▲ 戴国梁,居文政,谈恒山.生物样品前处理研究进展[J].中国医 院药学杂志,2013,33(6):484-487.
以除去98%以上的蛋白质。
▲ 沉淀蛋白法优点
操作简便易行
▲ 沉淀蛋白法缺点
此法仅除去了蛋白质,内源性杂质并没有除去。 运用此法处理后的样品浓度会被稀释,不利于检测。
此法所得样品不能用光。谱法检测。
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生物样品前处理-液液萃取法
▲液液萃取法简介
多数药物是亲脂性的,在适当的有机溶剂中的溶解度大于在水 相中的溶解度,而生物样品中的大多数内源性杂质是强极性 的水溶性物质。因而用有机溶剂萃取一次即可除去大部分杂 质。
▲氧瓶燃烧法 ▲注意事项
有机破坏法均是破坏有机物,只能进行生物样品中的元素分 析。
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生物样品前处理-沉淀蛋白法
▲ 蛋白沉淀法简介 蛋白沉淀法一般是通过加入有机溶剂、酸碱盐等使蛋白质 变性而与待测组分分离。 适用于强极性药物或两性类药物,这些药物难以用有机溶 剂从血浆中提取。
然后用少量溶剂洗脱,从而达到分离、净化与浓缩的目 的。
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生物样品前处理-固相萃取法
▲固相萃取法适用范围
大多数液体生物样品的前处理(如血浆、尿等)。 固体、半固体样品经过处理后也可使用SPE进行分离。
▲固相萃取法操作步骤
活化:根据所选择固定相的类型使用相应的活化溶剂 上样:上样溶剂强度不宜过高 淋洗:中等强度溶剂冲去干扰杂质,同时使分析物保留 洗脱:选用离子强度较弱但能洗下待测物的洗脱溶剂