产等。它广泛存在于自然界中。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都可被污染。 该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。 其易感人群主要为孕妇、老人、新生儿和免疫缺陷人群。大多数发达国家人类李斯特菌病 发生率约为每一百万人2-15例，死亡率为13-34% 加拿大由单增李斯特氏菌污染肉制品引发李斯特菌病暴发，导致十几人死亡。很多国家都 已经采取措施来控制食品中的单增李斯特氏菌，并制定了相应的标准。
按2009年国家食源性疾病检测网的工作手 册
1.定性检测 2.定量检测
检样 25 g(ml)样品+LB 增菌液225 mL，均质
1
30 ℃±1 ℃，24 h 0.1 mL+10 mL LB 增菌液
2 30 ℃±1 ℃，18 h～24 h
科玛嘉李斯特菌显色培养基 36 ℃±1 ℃，24 h～48 h
表1 单核细胞增生李斯特菌在选择性平板 上的菌落特征
选择性琼脂平板单核细胞增生李斯特菌科 玛嘉显色培养基菌落为:蓝色，周围有白色 晕圈.
PALCAM琼脂菌落:为灰绿色，小的圆形菌落 ，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色 凹陷
L.M在 Chromagar培养基生长特征
L.M在OXA培养基生长特征
协同溶血试验 (cAMP):
在血平板上平行接种金黄色葡萄球菌和马红球菌 (R.equi), 在它们中两者之间垂直接种可疑李斯特菌 , 但不要触及它们, 于30℃培养24h～48 h, 检查平板 中垂直接种点对溶血环的影响。靠近金黄色葡萄 球菌接种点的单核细胞增生李斯特菌的溶血增强, 斯氏李斯特菌（L.seeligeri）的溶血也增强, 而伊氏 李斯特菌（L.ivanovii）在马红球菌附近的溶血增 强。
PALCAM琼脂
接种木糖、鼠李糖，36 ℃±1 ℃，24 h；同时于TSA-YE平板划线纯化，30 ℃±1 ℃，24 h～48 h
木糖-，鼠李糖+ 鉴定
结果报告
增菌培养:LB1增菌液225 mL，于30℃培养24h, 吸取 0.1 mL，加入10mL LB2增菌液中二次增菌。
分离培养:LB2 二次增菌液转种于选择培养基PALCAM 和科玛嘉琼脂平板上，于37℃培养24 h，观察各个平板 上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。
单核细胞增生李斯特菌检验 ppt课件
李斯特氏菌属
李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，最新的分 类学研究表明，其分为六个种： Ø 单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes） Ø 伊氏李斯特氏菌（Listeria ivanovii） Ø 英诺克李斯特氏菌（Listeria innocua） Ø 斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri） Ø 威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri） Ø 格氏李斯特氏菌（Listeria grayi）
初筛及纯培养
自选择性琼脂平板上分别挑取5个以上典 型或可疑菌落，分别接种在木糖、鼠李 糖发酵管，于37℃培养24h；同时在胰酪 胨大豆琼脂培养基（TSA-YE）平板上划线 纯化，于30℃培养24h-48h。木糖阴性为 蓝色，鼠李糖阳性为黄色，在TSA-YE平板 上可疑菌落为淡蓝色。
单增李斯特氏菌生化性状与其种间的区别
该菌为革兰氏阳性无芽孢杆菌，在纯培养物
中呈短小杆菌，在初龄培养物中呈球杆菌状
，在老龄培养物中呈长丝的长杆菌状，有些
细菌因此而变成革兰氏阴性；为需氧或兼性 厌氧菌，在20～25℃培养时能形成4根鞭毛 ，运动活泼；在37℃培养时无鞭毛，运动消 失。
1.初筛
在我们前期工作中发现，高污染样品在选择 性琼脂平板上可疑菌落较多，为避免漏检和 减少工作量，增加初筛步骤：挑取典型或可 疑菌落接种在木糖、鼠李糖发酵管中，无须 烧环同时TSA-YE平板上划线分离纯菌。
金葡
伊氏李
马红
单核
对小鼠的毒力试验 （可选择）
将符合上述特性的纯培养物接种于TSB-YE中, 于30℃培养24 h, 离心, 弃上清液，用0.85无菌
生理盐水制备成浓度为1010cfu/mL的菌悬液, 取此
菌悬液进行小鼠腹腔注射 3～5只, 每只0.5 mL， 观察小鼠死亡情况。致病株于2～5d 内死亡。 试验时可用已知菌作对照。单核细胞增生利斯 特菌、伊氏利斯特菌（L.ivanovii）对小鼠有致 病性。
动力试验
将TSA-YE平板上的疑似菌落穿刺接种到SIM培 养基中，于30℃培养24h-48h，李斯特菌有动 力，呈伞状生长。
溶血实验：
将7%羊血琼脂平板底面划分为20-25个小格， 从TSA-YE上挑取菌落刺种到血平板上，每格刺 种一个菌落，并刺种阳性对照菌(单增李斯特 菌和绵羊李斯特菌)和阴性对照菌(英诺克李斯 特菌)，
在李斯特氏菌属的六个种中，只有两种致病菌：单核增 生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌可以引起老鼠和其他动物 发病。但是，其中通常只有单核增生李斯特氏菌和人类的 李斯特氏菌症（listeriosis）相关。因此，李斯特氏菌中最 有检测意义的是单核增生李斯特氏菌。
单增李斯特氏菌能引起人、畜的李斯特氏菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和流
L.M在PALCA型，很 难与杂菌区分
进口PALCAM 、进口OXA菌落较典型，易与 杂菌区分
CHROMagar菌落较典型，易与杂菌区分， 对高污染食品中的杂菌抑制性较差
染色镜检
将上述可疑纯培养物做革兰氏染色并做湿片 检查; 利斯特菌为革兰氏阳性短杆菌, 大小为 0.4～0.5μm×0.5～2.0μm；用生理盐水制成 菌悬液, 在油镜或相差显微镜下观察, 该菌出 现轻微旋转或翻滚样的运动。
于35℃培养24h-48h，穿刺时尽量接近底部 ，但不要触到底面，同时避免琼脂破裂。
于明亮处观察洁净的血琼脂平板，单增李 斯特菌和斯氏李斯特菌在刺种点周围产生 狭小的透明溶血环，无害李斯特菌无溶血 环，伊氏利斯特菌产生大的透明溶血环。 注意：不要据此来区别李斯特氏各种菌， 仅仅是一种溶血现象。用CAMP试验来确 证李斯特氏各种菌。