用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体 积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－ 7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗
③消毒液处理
取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分， 放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min， 取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净 消毒液
（三）接种
1、接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种 室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空 气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外 线照射20分钟
2、花药的结构
花药
药隔：花药中部，由薄壁细胞构成， 内有维管束
花粉粒
花粉囊（4或2） 囊壁
表皮 纤维层
3、被子植物的花粉发育
花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的， 因此，花粉是单倍体的生殖细胞 ①经历时期： 四分体时期、单核期、双核期 ②花粉粒的形成
2.离体的植物组织和细胞，对营养、环境等条件 的要求相对特殊，需要配制适宜的培养基。
常用的一种培养基是MS培养基。其主要成分包 括：大量元素，如N、P、K、Ca、Mg、S;微量元素， 如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；有机物， 如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素，以及蔗糖等。在配 制好的MS培养基中，常常需要添加植物激素。
组织的脱分化及愈伤组织的再分化。 植物组织培养过程中，影响植物细胞脱分化、再分 化的最重要因素是植物激素，细胞分裂素与生长素之间 的浓度比可以调控植株组培过程中芽和根的形成。
3.植物激素浓度、使用的先后顺序以及用量的比 例等，会影响实验结果。
植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞 分裂、脱分化和再分化的关键性激素。按照 不同的顺序使用这两类激素，会得到不同的 实验结果。
珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、 透性好，适合栽培 3、移栽 幼苗长壮后，移栽到土壤中
（六）栽培
幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况， 适时浇水、施肥，直至开花
课堂2 月季的花药培养
一、被子植物和裸子植物
1、被子植物定义：凡是种子有果皮包被着， 胚珠有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物
（1）基础知识
必要条件： 细胞离体
一定的营养物质、激素和其他
外界条件
原理: 细胞的全能性
①定义：
植物细胞具有全能性，即已分化的
细胞，具有使后代细胞形成完整个
体的潜能。
②原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所
特有的全套遗传物质，都有发育成为完
整个体所必需的全部基因
结细果胞：的分形化成不同的细胞和组织 原因： 基因在特定的时间和空间条件下的选
不同的植物对各种条件的要求往往不同。进行 菊花的 组织培养，一般将PH值控制在5.8左右，温度控制在1822℃，并且每日用日光灯照射12h。
高 有利于根的分化、抑制芽的形成
生长素/细胞分裂素
低 有利于芽的分化、抑制根的形成
二、实验操作
（一）制备MS固体培养基 （二）外植体消毒 （三）接种 （四）培养 （五）移栽
择性表达的结果
概念： 在个体发育中，相同细胞的后代在形 态、结构、生理功能上发生稳定性差 异的过程
植物组织培养的基本过程
离体的植物 脱分化 器官、组织、
细胞
愈 再分化 根 伤
组
织
芽
植 物 体
愈伤组织
（二）影响植物组织培养的因素
1.不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。
例如，烟草和胡萝卜的组织培养较为容易， 而枸杞愈伤组织的芽诱导就比较难。因此，植物 材料的选择直接关系到实验的成败。对于同一种 植物材料，材料的年龄、保存时间的长短等也会 影响实验结果。菊花的组织培养，一般选择未开 花植株的茎上部新萌生的侧枝。
与培养细菌的培养基有何不同？
MS固体培养基成分及比例
阅读课文，思考以下问题
1. 同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不 同？
微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不 同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包 括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
2、你认为组织培养过程中，成功的关键有哪些？这些步骤的 适宜条件是什么？
（六）栽培
二23、、、配实灭置验菌培操养作基 （分一装）好制的备培M养S固基体连培同养其基他器械一起进行高压蒸
汽灭菌
1、配置各种母液
（二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒 ①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷 轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
② 酒精处理
当同时使用这两类激素时，两者用量的比例决定着发 育的方向，是愈伤组织、长根还是长芽。如为了促进 芽器官的分化，应除去或降低生长素的浓度，或者调 整培养基中生长素与细胞分裂素的比例。
高 利于根的分化，抑制芽的形成 生长素/细胞分裂素 适中 利于促进愈伤组织的形成
低 利于芽的分化，抑制根的形成
4.除了上述因素外，PH、温度、光照等条件也很重要。
实例：玉米、大豆、梨、杏
2、裸子植物定义：凡是胚珠裸露，外面没有 子房壁包被，种子外面没有果皮包被的植物称 为裸子植物
实例：松、杉、柏
3、花的结构
4、花的作用 被子植物的有性生殖是在花里进行的，雌蕊 和雄蕊是进行有性生殖的主要部分
二、被子植物花粉粒的形成 1、雄蕊的结构
花丝 雄蕊：
花药：囊状结构，内有很多花粉粒
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
（四）培养
接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期 间应定期消毒。培养温度控制在18-22，并且脱 分化形成愈伤组织后，每日用日光灯光照12h。
（五）移栽 1、打开封口膜 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶 的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消 过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间
课题1 菊花的组织培养
通过必修课的学习，我们已经了解到 大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那 么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？
扦插
营养繁殖
嫁接
压条
组织培养
扦插
指在人工培养 基上，离体培养植物的器 官、组织、细胞和原生质 体，并使其生长、增殖、 分化以及再生植株的技术。