从西洋参中提取分高纯化人参皂苷Rb1和人参皂苷Re的研究2.1 西洋参粗提液的制备
称取100g西洋参,粉碎成粗粉,用70%乙醇12倍量水浴加热回流提取3次(400mL×3),每次时间2h。
提取液减压浓缩至50mL,得西洋参粗提液。
HPLC检测发现,提取液中含有大量杂质,其主要成分有两种:人参皂苷Re(保留时间29.1min左右)和人参皂苷Rb1(保留时间50.3min左右)。
人参皂苷Re与Rb1的质量分数分别为10%和60%。
见图2。
2.2 人参皂苷Re与Rb1的初步纯化
西洋参粗提液用15倍量水(V/W)溶解上已处理好D101大孔吸附树脂柱(50×4cm,树脂为200g)。
先用水洗柱,以去除大部分杂质, 再用2%NaOH溶液洗柱以除去色素,后用2% HCl溶液洗柱,再用水洗柱至流出液中性。
最后用90%乙醇淋洗,收集流出液。
回收溶剂至干,60℃减压干燥,得干燥疏松黄白色粉末6.0g,为西洋参总皂苷。
HPLC检测, 人参皂苷Re与Rb1的质量分数分别为12.5%和65% 。
2.3 人参皂苷Re与Rb1的进一步纯化
西洋参总皂苷6.0g,用30mL70%乙醇溶解,加300mL丙酮搅拌, 析出大量沉淀,放置,过滤,沉淀干燥,得棕黄色干燥疏松粉末4.2g,为A部分。
母液回收溶剂至干,得棕黄色疏松粉末1.8 g,为B部分。
A部分中人参皂苷Rb1的质量分数提高到80%(人参皂苷Re下降为4.5% ),B部分中人参皂苷Re的质量分数提
高到40% (人参皂苷Rb1下降为30% )。
见图3、图4。
2.4 人参皂苷Re和Rb1的再进一步纯化
A部分用20mL水溶解,加200mL丙酮搅拌,析出大量沉淀,静置, 过滤, 沉淀再用20mL水溶解,加200mL丙酮同法处理,静置过滤,60℃减压干燥,得黄白色干燥疏松粉末2.6g,为人参皂苷Rb1。
HPLC 检测, 人参皂苷Rb1的质量分数为95% (人参皂苷Re为0.2% ), 见图6。
A部分丙酮沉淀的母液回收溶剂至干, 得量1. 6 g, 与B 部分合并,用30mL95%乙醇溶解,加300mL丙酮搅拌, 析出沉淀,静置,过滤,母液回收至干,再用20 mL95%乙醇溶解,加200mL丙酮同法处理,过滤,溶液回收至干, 再用丙酮同法处理一次,过滤,回收溶液至干,60℃减压干燥, 得黄白色干燥疏松粉末0.5g, 为人参皂苷Re。
HPLC 检测,人参皂苷Re的质量分数为92% (人参皂苷Rb1为3% ),见图7。
2.5 人参皂苷Re和Rb1晶体的制备
取质量分数为95%的人参皂苷Rb1 2.6 g, 用甲醇少量加热溶解, 冰箱放置析晶, 过滤, 甲醇再重结晶一次, 过滤, 60℃减压干燥,得2.0g白色沙状粉末。
HPLC检测,质量分数为98.5% (收率2.0%)。
取质量分数为92%的人参皂苷Re 0.25 g,用70%乙醇少量加热溶解,冰箱放置析晶,过滤,甲醇再重结晶一次,过滤,60℃减压干燥,得0.25g无色结晶。
HPLC 检测, 质量分数为97.5%(收率0.25%)。
四川省中医药科学院, 成都610041 HSCCC 法从人参总皂苷中分高制备人参皂苷Re与Rg1 配制乙酸乙酯- 正丁醇- 水（4∶1∶5）的溶剂系统，充分摇匀，静置分层时间26s（小于30s,可用）。
分层后将上、下相分开，以上相为固定相，下相为流动相。
先以较大流速将固定相（上相）注满管柱，开启主机，主机转速为
800r·min-1,UV 检测仪显示基线平稳后，以恒定流速1.50 mL·min-1 通入流动相（下相），待体系平衡进样。
进样量为120mg，以2mL上相+2mL下相充分溶解，在计时开始后，分离时间为4h，每10min收集一个流分。
1.1TLC鉴定条件
分别以氯仿-甲醇-水（69∶27∶4），乙酸乙酯-正丁醇-水（4∶1∶5）上相，正丁醇-乙酸乙酯-水（4∶1∶1）为展开剂。
将分高组分别加以TLC 鉴定，展开距高为7~8 cm，以10% H2504 乙醇液作为显色剂。
1. 2 鉴定结果展开剂乙酸乙酯-正丁醇-水（4∶1∶5）上相。
合并流分13和14以及16～18,二者除采用上述溶剂系统外
还采用氯仿-甲醇-水（69∶27∶4）和氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水（2∶2∶4∶1,下相）与人参皂苷Re及Rg1标准品共薄层，点样量为50μg以上，二者都呈现单点并且分别和人参皂苷Re及Rg1的Rf值一致。
因此鉴定为人参皂苷Rg1(18mg)和Re(25 mg)。
（沈阳药科大学中药学院，辽宁沈阳 110016）
高效液相色谱法一重结晶法分高人参皂苷
单体Re
1．1制备用流动相的配制
配制甲醇与水体积比为40:60的流动相4000mL, 再配制甲醇与水体积比为50:50 的流动相5000mL, 纯甲醇2000ml。
以上流动相超声脱气处理。
1.2 含人参皂苷Re段组分的制备
准确称取人参皂苷粗原料10.0g, 用40mL纯甲醇超声溶解, 用流动相平衡制备柱; 然后用制备洗脱泵向柱中进原料样品, 最后用流动相洗脱, 接取馏分段, 将各馏分段收集液用薄膜旋转蒸发器在60℃浓缩, 用纯甲醇溶解收集, 在真空干燥箱中60℃烘干备用。
其中,甲醇与水体积比为50:50 的流动相冲洗段只含有人参皂苷Re和Rgl的混合物。
1.3 重结晶法制备人参皂苷Re
称量1,0g人参皂苷Re和Rg1的混合物,用20:80的V乙腈:V水
6mL超声至完全溶解后20℃下静置5h,结晶。
将白色结晶经微孔滤膜过滤,阴干,称量,收集待测,滤液放入真空干燥箱中
浓缩备用。
1.4人参皂苷Re的结构分析
对2.5中所得晶体运用核磁共振分析、高效液相色谱一质谱分析、紫外分析和红外分析进行结构分析。
2 结果与讨论
2.1 高效液相色谱法纯化人今皂苷Re和Rg1
在所选的分离条件下, 对甲醇与水体积比为50:50的流动相冲洗段色谱图如图1所示,谱图中只出现了人参皂苷Re 和Rg1 2个峰, 说明应用上述分离条件是可行的。
以
18:82-22:78 的乙腈:水为流动相进行梯度洗脱, 可以将Re 和Rg1分离,且保留时间较短,适于实际操作。
2.2 重结晶法分离人参皂苷Re
实验中分别尝试了萃取方法HPLC方法和重结晶的的方法进行人参皂昔Re的分离。
通过对各种方法的应用,发现乙酸乙醋萃取、正丁醇萃取方法萃取效果不明显且溶剂消耗较大。
应用HPLC方法中, 使用侧备柱分离人参皂昔Re 流动相消耗较多, 馏分收集比较困难。
使用重结晶方法操作简便, 节省溶剂, 避免了设备的损耗和色谱柱填料的消耗, 还可以得到纯度较高的人参皂昔单体Re。
确定了结晶溶剂为V乙腈:V 水=20：8O的混合溶液; 结晶温度为20℃、结晶时间为5h、混合物与重结晶溶荆的固液比为1:6(g/mL)的结晶条件。
如图2 所示,谱图中去掉手动更换流动相带来的干扰后, 谱图只出现2个峰, 其中时间稍长的为人参皂昔Re,含量为91%,同时结晶液中人参皂普Rg1的含量提高了。
(1
.1 辽宁科技大学分离技术中心, 辽宁鞍山n4051 ;
2. 辽宁科技大学化学工程学院应化2 仪洲〕, 辽宁鞍山n4051)。