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DNA的半不连续复制
脉冲标记实验：被3H-T标记的
新
航打金农民太热空工业可以看见法合成的DNA片段
任何额外刚刚过热而二个如果戈伟几乎都为10~20s，
是公司公司如果我国俄国人给我而即均1000~2000
核酸大小
核酸大小
冈崎实验
脉冲追踪实验：小片段已被连接 成 豆腐乳热热太热越狱兔突然虎头70~120s的大片 段
在存在dUTPase的情况下，仍有dUTP分子以1/1200的
概
率掺入到DNA分子中，当细胞中没有了
dUTPase
时，这一概率将会加大。
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• UNG酶缺陷型突变体不能合成尿嘧啶-N-糖苷酶，
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• dut-(dUTP酶缺陷型)突变体
由于dUMP掺入的概率增加，dUMP片段将变短。
· ung- (UNG酶缺陷型)突变体
由于以掺入dUMP被切除的概率降低， dUMP片段将变长。
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DNA复制的起点
影放 射 自 显
•复制开始时，用低放射-脱氧胸苷标记·，将来感光 还原的银密度低； •再转移到含高放射-脱氧胸苷培养基，则继续合成区 的银密度高；
多dUMP，从而避免了dUTP作为底物而掺入到DNA分子中。
但仍有dUTP分子约以1/1200的概 率逃逸分解掺入到DNA分子中
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细胞内的第二道防线：
形成一个无嘌呤或碱基的Ap位点
Ap内切酶进一步将Ap位点酶解成缺口
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dUMP片段
• dUTP有1/1200的概率掺入到DNA中，则约1200个核苷酸 就有一个dUMP被剪切的可能，被剪切后则会与冈崎片段相 似大小的1000~2000核苷酸的片段。
•如果：单向复制，则密度为：高低 双向复制，密度为：中间低，两侧高
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17
• 结束
• 谢谢倾听
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由dut基因编码的dUTP酶能有效地将dUTP,dUDP分解为 dUMP，从而避免了dUTP作为底物而掺入到DNA分子中。
dUTP酶缺陷型突变体不能合成dUTP酶，故不能分解细 胞中的dUTP。
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9
冈崎片段
DNA聚合酶Ⅰ 具有5，→3，外切酶活 性，它可以及时切除复制起始合成的RNA 引物，并填补切除引物的裂隙。
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dUMP片段
•形成原因： 1、dUMP会掺入到DNA分子中去； 2、细胞通过两道防线阻止了dUMP掺
入到DNA分子的过程； 3、第二道防线中的“尿嘧啶-N-糖苷酶”
和“Ap内切酶”会将新合成的DNA链酶切成 片段。
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dUMP片段
•dUMP掺入到DNA分子中的机制：
1、细胞内存在dUMP和dTTP两种类似物，而DNA 而我聚合酶Ⅲ又不能区分这两者，故会错将U当成T加入到合 而我成的DNA新链中；
2、新合成的链中会有C因氧化脱氨而成为U；
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dUMP片段
•细胞内的第一道防线： DNA复制的底物为:dNTP（即dATP,dTTP,dGTP,dCTP)； dUMP与dTTP类似，在错配的情况下可以掺入DNA中； 由dut基因编码的dUTP酶能有效地将dUTP,dUDP分解为
蒋尚蓉
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1
DNA复制的特点
1.半保留复制
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on和Stahl的重氮实验
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4
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5
DNA按5’→3’方向延伸
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6
•三个磷酸基团的强 大斥力是dNTP难以 靠近带有三个磷酸基 团的5’端
•空间位阻，带有三 个磷酸基团的5’端不 能与模板配对
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7
• 在出现错配时就要修复,如果是从3’ → 5’,切 除错配的核苷酸后就剩下的5端就是单磷酸 腺苷,就必须再加两个磷酸基团上去,成为三 磷酸腺苷,这样就浪费了能量