用茎尖培养脱毒，需要用很小的茎尖才能脱除病毒，通常采
用的茎尖大小为0.1~0.2mm，因茎尖太小往往成活率很低。对 于茎尖嫁接也有类似情况，茎尖太小往往不能成活。因此，茎 尖培养、茎尖嫁接不仅很难操作，而且一些病毒不能脱去，如 单纯的茎尖嫁接不能脱除柑橘碎叶病毒。
合并使用热处理、茎尖培养或茎尖嫁接能克服两种方法各自
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二、组织培养脱毒
1.茎尖培养脱毒
Morel等（1952）首先从感染有花叶病毒的大丽花上分离 出茎尖分生组织（0.25mm）培养得到植株，嫁接在大丽花 实生砧木上检验未无病毒植株。从此，茎尖培养就成为脱去 病毒的一个有效途径，并相继在马铃薯、菊花、兰花等茎尖 培养脱毒的研究中获得成功。茎尖培养脱毒可脱除多种病毒、 类病毒、类菌原体和类立克次体，很多不能通过热处理脱除 的病毒可以通过茎尖培养而脱掉。茎尖培养脱毒直接从茎尖 生长获得植株，很少有变异，能很好地保持品种的特性。
植物的感染病组织中不是所有细胞都含有 病毒。因此，也有人从感病植株分离原生质体、 愈伤细胞或其他细胞，继而培养获得植株，然 后通过鉴定病毒从中选择无病的材料
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三、其他脱毒方法 1.合并使用热处理、茎尖培养或微芽嫁接脱毒
这种脱毒方法是从经热处理后的新梢顶端切取一段嫩梢，
再嫁接到事先准备好的实生砧木上，如果用徒手嫁接，枝梢的 长度至少要达到1.0~1.5cm方可。若要使这样长的嫩梢无病毒， 对于苹果至少须热处理3~4周，而一些耐热性弱的品种，在热 处理期间，因高温伤害，大部分枯死，或嫁接后成活率很低。
茎尖培养之所以能脱除病毒，是因为感染病毒的植株的幼 嫩及未成熟的组织和器官中病毒含量较低，生长点（约 0.1~1.5mm区域）则几乎不含病毒或含病毒很少。
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植物茎尖等分生组织中不含或很少含有病毒的原因： （1）植物茎尖分生组织中胞间连丝发育不完全或
太细，使病毒在细胞之间的扩散作用受到抑制。 （2）病毒复制、运输速度与茎尖细胞生长速度不
力，而保持其本身的生活力，从而达到脱毒的目的。
该法尤其适用于类菌原体、类细菌的脱毒，而对于
类病毒的脱毒效果较差，因为类病毒通常有较强的
热稳定性。这种处理方法与1921年首先用于甘蔗的
脱毒，国内用这种方法处理柑橘，可脱除柑橘材料
内的黄龙病类细菌。
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2 低热长时处理法
低热长时处理一般不能使整株植株脱毒，而只能 使个别器官脱毒，大多是使在热处理过程中长出的 茎尖无病毒。因此，处理的最后步骤是要取新产生 的茎尖嫁接到无毒实生碊木上或将新产生的茎尖进 行扦插繁殖，以获得脱病毒植株。但对不同病毒及 不同植物种类的脱毒率差异很大。
同，病毒向上运输速度慢，而而分生组织细胞繁殖 快，结果使茎尖区域部分的细胞没有病毒。
（3）植物生长点细胞中缺少病毒增值的感受点， 因而复制过程不能进行。
（4）茎尖等分生组织中存在抑制、钝化病毒的物 质
（5）茎尖或其他组织在培养过程中病毒被钝化或 抑制
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2.茎尖微芽嫁接脱毒
茎尖微芽嫁接脱毒是组织培养与嫁接相结合，用以获得
如格瑞弗斯苹果通过茎尖组织培养，可以获得无病毒新梢，
但不能生根，只有通过茎尖微芽嫁接脱毒才能获得完整植
株。
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3.其他外植体的组织培养方法脱毒
除茎尖培养外，还可从 花粉、花药、胚、胚珠及珠心等组织培养获 得无病毒的植株。这些器官或组织也是植株中含病毒较少的部位，但不 同病毒或不同寄主植物使他们带毒或不带毒的情况各不相同，采用这些 器官脱毒时，首先应弄清楚其带毒情况。
无病毒苗木的一种新技术。他将0.1~0.3mm的茎尖作为接
穗，嫁接到由试管中培养出来的无毒实生砧木上，继而进
行试管培养，愈合成为完整植株的脱毒方法。它可消除用
热处理不能除去的一些病毒，如衰退病毒、木质陷孔病毒、
黄脉病毒等。茎尖微芽嫁接脱毒可以解决一些果树茎尖培
养成苗难，特别是生根困难的问题。有些果树种类或品种，
关于一些植物种胚中不携带病毒的原因有两种观点：一种观点认为
病毒不能进入胚中，植物子房中胚与其他母体细胞之间缺少维管束组织
和胞间连丝的关系；另一种是认为病毒能进入胚，但进入后为寄主所消
灭。有这样一种现象，种子在未成熟时带有病毒，到成熟时，病毒就消
失了，这就说明，即使没有胞间连丝，病毒还可以通过其他途径进入胚
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3、化学处理结合茎尖培养
目前尚无一种抗病毒药剂能从整 株 植 株 消毒 病 毒 ，但某些
病毒抑制 剂或钝化剂加到组织培养的培养基中却能消除培养
组织中的病毒。Ribavirin（抗病毒醚）是一种对DNA病毒或
第七章 植物脱毒和快速繁殖技术
组员：贺秀娟 叶研春 韩婷花 韩秀丽 白秉元 马延梅
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第一节 植物脱毒的原理
一 热处理脱毒
1.高温短时处理法
这种方法是利用病毒与植物耐热能力的不同，将木
苗、接穗或种子等繁殖材料在一定的高温下处理一
段时间，将其体内的病原杀死或钝化，失去侵染能
中，但是有些植物的种子中存在着一种抑制病毒的物质。此外，还有人
认为是有些种胚中缺少病毒增值所需要的重要物质。而使病毒不能复制
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对于一些果树植物要获得与亲本一致的无性 系无病材料，可以从胚囊败育的子房中在胚囊 败育之前获取胚珠或珠心组织进行培养。
花药或花粉培养也可以作为一种脱毒方法， 这种方法可结合单倍体育种进行，用花药培养 进行草莓脱毒，脱毒率可达100%。花药培养 获得的无毒材料多为高产优质的类型。
的缺点。不仅可完全脱除病毒，同时茎尖成活率也得到提高，
由此果的脱毒多采用热处理茎尖培养方法；柑橘
则都采用热处理与茎尖嫁接相结合的办法。两种组合均提高了
获得无病毒苗木的可能性 精选课件
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2.冷处理结合茎尖培养
有些作物对高温非常敏感，可用冷处理代替热处 理并结合茎尖培养来脱毒。如三叶草的脱毒，将准 备切去茎尖的母株在取茎尖之前，放在10℃中经过 2~4个月，以代替热处理，可以部分去除病毒。这种 方法也有人用于从马铃薯上消除梭状块茎类病毒。