土壤微生物的分离筛选
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content
一 微生物筛选原理及介绍
二
微生物筛选的流程
三
微生物筛选的操作
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一、微生物筛选介绍
1、概念 2、筛选及纯化的方法 3、培养基的选择
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概念 筛选及纯化的方法 培养基的选择
概念： 在混杂的微生物群体中，按照微生物的代谢特
征，分离出特定功能的微生物，并进行纯化直至 获得单一菌株的操作过程。
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概念 筛选及纯化的方法 培养基的选择
细菌的筛选：选择性培养基 根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、
物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混
合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的
筛选效率。
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概念 筛选及纯化的方法 培养基的选择
细菌的保存：牛肉膏蛋白胨培养基 配方（g）：牛肉膏3,蛋白胨10,氯化钠5，琼脂15,
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样品
富集培养 梯度稀释 涂布培养 划线纯化 斜面保存
以筛选产DMS功能微生物为例：
取2.5g土样置于50ml改良基 础盐液体培养基中，28 ℃震 荡培养4天。
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样品
富集培养 梯度稀释 涂布培养 划线纯化 斜面保存
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样品
富集培养 梯度稀释 涂布培养 划线纯化 斜面保存
① 将菌种用无菌水制成悬液。
土壤是微生物的大本营，混杂着大量的微生物， 从中分离可得到只含有一种微生物的纯培养。
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概念 筛选及纯化的方法 培养基的选择
微生物筛选的方法有：稀释涂布法和平板划线法。
稀释涂布法：将土壤溶液稀释成一定的梯度，将其 涂布到固体平板培养基上。
平板划线法：挑取稀释涂布后长出的菌落，在固体 平板培养基上划线培养，获取纯菌落。
划线目的：逐步纯化，直至出现单菌 落，获得纯菌株。3~5次。
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样品
富集培养 梯度稀释 涂布培养 划线纯化 斜面保存
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样品
富集培养 梯度稀释 涂布培养 划线纯化 斜面保存
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样品
富集培养 梯度稀释 涂布培养 划线纯化 斜面保存
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将接种菌株的斜面放入4 ℃冰箱中保存。 至此，已经完成了微生物的初筛。有关微 生物的更多信息可以用鉴别培养基对其进 行复筛，或者运用其他手段对其进行鉴别。
② 取若干只无菌试管，每只内盛9ml无菌 水。
③ 吸取上述菌悬液lml加入第1只含有无菌 水的试管内。也就是10-1。
④ 从第1只试管内(10-1)吸取lml注入第2只 含有无菌水的试管内，也就是10-2。
⑤ 用同样方法，制成10-3～10-8的菌悬液。
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样品
富集培养 梯度稀释 涂布培养 划线纯化 斜面保存
保存
采样：土壤样品，梅花形布点采样， 取得的用四分法进行取样，将样品 放入4 ℃冰箱中保存待用。
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样品
富集培养 梯度稀释 涂布培养 划线纯化 斜面保存
富集培养：指从微生物混合群开始,对 特定种的数量比例不断增高而引向纯 培养的一种培养方法。在适于目标微 生物而不适于其他微生物生长的条件 下继续培养，则目标微生物将成为优 势种而得到纯培养。
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谢谢大家
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蒸馏水1000ml，pH7.2。
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二、微生物筛选纯化的流程
富
样
集
品
培
养
梯
涂
度
布
稀
培
释
养
平
板
斜
划
面
线
保
纯
存
化
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三 微生物筛选纯化的操作
注意事项： ①筛选之前，提前制作好试验用的培养基。 ②与培养微生物相关的试验器材需要灭菌，方法为 在 121 ℃的条件下高压灭菌20分钟。 ③与微生物相关的操作需要在无菌操作台上进行。 操作之前15分钟打开紫外灯。