可以分析得出SARS与非SARS 病人血清中的蛋 白质成分变化。该技术不是利用单独的蛋白质 峰的出现和消失来判断SARS ,而是用5 个蛋白 质峰的出现和消失来判断,好比刑侦破案中甄 别5 个手指的指纹,故此称为“指纹图谱”。
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八，LAMP技术
病原微生物检测方法
环介导等温扩增(loop—mediated isothermal amplification，LAMP)技术是近年来发展出的一种 敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传统 PCR方法相比，LAMP不需要热循环，为等温扩增。 且由于LAMP反应中产生大量的副产物一白色焦磷 酸钾沉淀，扩增产物可不经过电泳，通过肉眼观 察或浊度计即可判定结果。
Dot-ELISA法（DIBA法）： Dot-ELISA 以纤维素 膜代替常规ELISA 中常用的聚苯乙烯酶标板， 这种微孔滤膜对样品吸附量大，且包被牢固，
所以样品用量少，试验结果可通过颜色斑点的 出现与否和色泽进行判定，不需特殊仪器。
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病原微生物检测方法
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检测 灰飞 虱带 RBS DV的 DIBA 法
室温晾干
3,将干燥的NC膜浸入封闭液中， 37 ℃,30min
6,将膜浸入用封闭液稀释5000倍 的酶标二抗中， 37 ℃,1.5h
7,取出膜，用0.01MPBST洗3次， 每次5min
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核酸杂交法
病原微生物检测方法
原理：是通过标记根据病原体核酸片段制备的 探针，与病原体核酸片段杂交,观察是否产生
特异的杂交信号。核酸杂交有原位杂交、打点 杂交、斑点杂交、Southern 杂交、Northern 杂
交等。核酸分子探针又可根据它们的来源和性 质分为DNA 探针、cDNA 探针、RNA 探针及人 工合成的寡聚核苷酸探针等。
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病原微生物检测方法
斑点杂交
被广泛用于检测植物或介体带毒及核酸同源性。如 果用于检测RNA样品，称为Northern杂交；如果用 于检测DNA样品，称为Southern杂交。操作程序如 下：
用于检测：丙型肝炎病毒(HCV) 、严重急性呼吸 综合征冠状病毒(SARS—CoV) 、乙脑病毒(JEV) 、 甲型流感病毒(AIV) 、 腮腺炎病毒(MV)等。
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病原微生物检测方法
谢谢
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荧光抗体技术
病原微生物检测方法
荧光抗体技术是根据抗原抗体反应具有高度的 特异性,把荧光素作为抗原标记物,在荧光显微 镜下检查呈现荧光的特异性抗原抗体复合物及 其存在部位。
荧光抗体技术 酶联免疫技术
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病原微生物检测方法
三，分子生物学方法
分子生物学及分子遗传学的发展 ,使人们对微生物的 认识逐渐从转向基因水 平的检测。
核酸杂交法 PCR及其衍生技术 基于16S rRNA的检测技术
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病原微生物检测方法
病原微生物检测方法
病原微生物检测方法
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一，生物化学方法
病原微生物检测方法
原理：生化方法检测病原微生物实际上是测定微生 物特异性酶。由于各种微生物所具有的系统不完全 相同 ,对许多物质的分解能力亦不一致。因此可利用
不同底物产生的不同代谢产物来间接检测该微生物 内酶的有无 ,从而达到检测特定微生物的目的。
利用大肠杆菌抗体的免疫吸附反应,使用集成 化SPR 传感器快速检测大肠杆菌O157 : H7 ,采 用亲和素- 生物素系统放大检测的反应信号,并 引入复合抗体作为二次抗体,使该传感器对大 肠杆菌的检测限由106 cfu/ ml 下降到105 cfu/ ml。
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六，生物芯片
病原微生物检测方法
生物芯片技术是将生物大分子,如寡核苷酸 cDNA、基因组DNA、肽、抗原以及抗体等固 定在诸如硅片、玻璃片、塑料片、凝胶和尼龙 膜等固相介质上形成生物分子点阵,当待测样 品中的生物分子与生物芯片的探针分子发生杂 交或相互作用后,利用激光共聚焦显微扫描仪 对杂交信号进行检测和分析。
1,NC膜用铅笔画出0.5cm正方格
4,取出NC膜，浸入用封闭液稀释 10000倍的单抗体中，37 ℃,1.5h
5,取出膜，用0.01MPBST洗3次，每次 5min
8,将膜浸入HRP底物显色液中， 37 ℃,30min，显色后，用自来水冲洗，
室温晾干
2,单头灰飞虱加100ul碳酸盐缓冲 液，用牙签捣碎，取上清2ul加样，
根据芯片上探针的分子种类而将之分为：DNA 芯片(即基因芯片) 和蛋白质芯片。
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病原微生物检测方法
七，蛋白质指纹图谱技术
蛋白质指纹图谱技术用于各种疾病特异性蛋白 指纹的识别和判断,可以直接检测不经处理的 尿液、血液或细胞裂解液等。人体血清里有成 千上万个蛋白,人一旦发生了某种疾病,蛋白质 成分就必然会起变化。
辛酯酶法：快速检测沙门氏菌。沙门氏菌能产生辛 酯酶,这一性能是除沙门氏菌外的各属肠杆菌科细菌 所不具备的。以4-甲基伞形酮辛酯(MUCAP)为底物, 经沙门氏菌的辛酯酶降解后,释放出4-甲基伞形酮 (4MU),在紫外灯下观察其发出的蓝色荧光。
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病原微生物检测方法
二，血清免疫学方法
免疫学技术是利用特异性抗原抗体反应,观察和研究 组织细胞、特定抗原(抗体)的定性和定量技术。为了 显示和观察这种抗原抗体反应,需要预先将某种标记 物结合到抗体上,借标记物的荧光或酶的有色反应、 放射性或高电子密度,在光镜或电镜下进行定性、定 位或定量研究。
四，分子生物学与免疫学相结合的方法
免疫 PCR (immuno polymerase chain reaction , IM PCR)
PCR-ELISA
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病原微生物检测方法
五，用生物传感器进行病原微生物的鉴定
生物传感器是将新兴的传感器技术和分子诊断 技术相结合而成的一种新技术。生物传感器包 含两部分,即分子识别器件和换能器。
直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧 光标记的抗血清,经洗涤后在荧光显微镜下观 察结果。间接法是在检测样品上滴加已知的细 菌特异性抗体,待作用后经洗涤,再加入荧光标 记的第二抗体。
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酶联免疫技术
病原微生物检测方法
酶联免疫技术是根据抗原- 抗体的免疫反应与 酶的高效催化作用原理有机结合,通过酶催化 底物进而发生一系列的化学反应,使溶液呈现 出颜色变化,从而显示抗原抗体特异性反应的 存在。