大鼠血管内皮细胞培养
1、劲椎脱臼处死大鼠,75%酒精中浸泡1分钟,打开胸腔,分离主动脉,放在无菌的D-Hanks 液培养皿中。
2、用眼科剪和镊子出去血管外周的脂肪和纤维组织,用含抗生素的D-hanks冲洗血管内外凝血数次,再放入另一无菌培养皿中。
3、用眼科剪纵向剪开血管,用手术刀将其切成1立方毫米大小的动脉植块,然后种植到培养皿中(培养皿用1%明胶37℃下过夜,使用前2h移入二氧化碳培养箱中,用时可以先经含10%小牛血清的培养液冲洗)。
将动脉植块的内膜面与皿底接触,种植密度约1块/立方厘米。
4、培养皿中静置2h(干贴壁),然后加入0.5ml含25%胎牛血清的培养液,略微盖过动脉植块内膜面。
24h后,更换培养液,加入2-3ml培养液。
5、72h左右,当观察到内皮细胞充分长出,而成纤维细胞刚要长出的时候,将动脉植块除去,刮出成纤维细胞,换培养液1次,以后每两天换液1次,每次换1/2 —1/3的液量。
继续培养8-10d,细胞融合成单层即可传代。