沉淀反应一、沉淀反应-双向免疫扩散试验
原理 用半固体琼脂凝胶作为介质，可溶性抗原、抗体在其中能 用半固体琼脂凝胶作为介质，可溶性抗原、 自由扩散。 自由扩散。将可溶性抗原和抗体分别加入琼脂板上相对应 的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗原和抗体相对应， 的孔中，两者各自向四周扩散，如果抗原和抗体相对应， 则在两者比例适当处形成白色沉淀线。 则在两者比例适当处形成白色沉淀线。
实验步骤
配制1%琼脂：用生理盐水配制， 配制1%琼脂：用生理盐水配制，加热溶解 1%琼脂 制板：趁热将3.5ml 3.5ml融化琼脂水平铺在玻 制板：趁热将3.5ml融化琼脂水平铺在玻 片上， 片上，室温下冷却凝固 6 打孔： 打孔：用打孔器按图示打孔 control 稀释抗体： EP管 稀释抗体：取5支EP管，将抗体倍比稀释 加样：周围孔加入不同稀释度的抗体， 加样：周围孔加入不同稀释度的抗体，中 5 间孔加入抗原 琼脂板放入湿盒内， 4℃，24-48小时后 琼脂板放入湿盒内，置4℃，24-48小时后 观察结果。 观察结果。
存在三种不同的抗原
两个样品为同一抗原
两个样品部分相同
二、凝集反应 原理
颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等) 颗粒性抗原(完整的病原微生物或红细胞等)与相应 抗体特异性结合，在有电解质存在的条件下，形成肉眼可 抗体特异性结合，在有电解质存在的条件下， 见的凝集团块。 见的凝集团块。
基本类型
直接凝集反应、间接凝集反应、凝集抑制反应等。 直接凝集反应、间接凝集反应、凝集抑制反应等。
1 2 Ag 3 4
倍比稀释法
样 品 管 100µL 管 一 第 100µL 管 二 第 100µL 管 四 第
100µL
100µL
100µL
100µL
1:4
1:8

1:16
1:64
结果判断
1 6 2
5 4
3
应用
测定抗体的效价 用特异性抗体检测抗原 检查抗原和免疫血清的特异性、纯度或浓度， 检查抗原和免疫血清的特异性、纯度或浓度，比较抗 原之间的异同点
主要材料
器材：载玻片、EP管 微量加样器、枪头、打孔器、 器材：载玻片、EP管、微量加样器、枪头、打孔器、 注射器针头 试剂：生理盐水、琼脂粉、 试剂：生理盐水、琼脂粉、 抗原（正常小鼠IgG IgG）、 抗原（正常小鼠IgG）、 抗体（兔抗小鼠IgG血清） IgG血清 抗体（兔抗小鼠IgG血清）
双向免疫扩散试验 直接凝集试验
抗原（ 抗原（antigen, Ag）: ） 能够刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞 并能与之特异 能够 刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞， 并能与之 特异 刺激机体产生 抗体和致敏淋巴细胞， 性结合的物质 的物质。 性结合的物质。
抗体( 抗体(antibody, Ab)： ) 细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的可特异 B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的可特异 性结合抗原的一组糖蛋白 的一组糖蛋白。 性结合抗原的一组糖蛋白。
直接凝集实验（ABO血型鉴定） 直接凝集实验（ABO血型鉴定） 血型鉴定
主要材料
器材：酒精棉球、灭菌干棉球、微量加样器、 器材：酒精棉球、灭菌干棉球、微量加样器、 灭菌枪头、玻片、 灭菌枪头、玻片、一次性采血针 试剂 试剂（蓝色） 试剂（黄色） 抗A试剂（蓝色）、抗B试剂（黄色）
实验步骤
干净玻片上分别滴加抗A、抗B试剂各一滴 干净玻片上分别滴加抗A 酒精棉球消毒无名指， 酒精棉球消毒无名指，采血针采血 用加样器加末梢血各1 用加样器加末梢血各1滴 不断转动玻片，使血液与试剂充分混匀，静止1 不断转动玻片，使血液与试剂充分混匀，静止1-2min 左右， 左右，观察结果 A
抗原抗原-抗体反应的基本检测方法
凝集反应(agglutination):颗粒性抗原与抗体的反应。 凝集反应(agglutination):颗粒性抗原与抗体的反应。 (agglutination):颗粒性抗原与抗体的反应 沉淀反应(precipitation):可溶性抗原与抗体的反应。 沉淀反应(precipitation):可溶性抗原与抗体的反应。 (precipitation):可溶性抗原与抗体的反应 补体参与的反应 免疫标记技术（ technique） 免疫标记技术（immunolabelling technique）:用示踪物质标记 抗原或抗体，进行抗原-抗体反应的检测。 抗原或抗体，进行抗原-抗体反应的检测。
抗 A
B
抗 B
结果判断
血型 A B 0 AB
抗A试剂 + +
抗B试剂 + +
注意事项 注意无菌操作 滴加血液时，不要使枪头尖触及试剂 滴加血液时，