标准曲线的绘制-吸光度标准曲线绘制生物化学实验报告ALT与其吸光度的标准曲线绘制采集样本：广西医科大学口腔医学2016级13班四个组中7组生物化学实验数据采集时间：2016年11月15日2016~2016上学期第十一周周一下午采集人：何洁梅一、几组ALT与其吸光度的标准曲线数据记录ALT活力单位A520吴修团1组A520黎丁菱1组A520杨璇璇1组A520谢晓兰2组A520莫雪玲2组A520李文良3组A520文全海4组00000000二、各采集样本汇总图样本1测定得待测血清ALT活力单位为50U/L样本2测定得待测血清ALT活力单位为97U/L样本3测定得待测血清ALT活力单位为135U/L样本4测定得待测血清ALT活力单位为70U/L样本5测定得待测血清ALT活力单位为148U/L样本6测定得待测血清ALT活力单位为45U/L样本7测定得待测血清ALT活力单位为98U/L四、采集数据处理结果分析1．数据总结样本编号测定的ALT活力单位是否大于40U/L正常/非正常150是非正常297是非正常3135是非正常470是非正常5148是非正常645是非正常798是非正常平均值92均为“是”均为“非正常”2.针对数据处理结果的分析采集的7组数据经标准曲线测量后，得到的ALT活力单位值均大于40，即均为非正常值，综上，认为待测血清中ALT 含量超于正常值。
3.针对源数据的分析采集的7组数据中样本4、5、6的数据经画图后可基本分布呈过原点的线性关系，符合理论规律，但其他的数据误差较大。
另外，比较符合理想标准曲线的4、5、6样本的三个ALT活力单位值也存在较大的出入。
4.经分析，总结可能的误差来源如下配置丙酮酸标准溶液、底物溶液、磷酸缓冲液的混合溶液时，丙酮酸标准溶液的剂量都很小，容易造成误差。
加入2,4—二硝基苯肼的时间可能有误差，保温的时间，以及加入NaOH 以停止反应的时间都有可能有偏差，容易造成较大。
如何用EXCEL绘制标准曲线Excel是Microsoft offices系统的重要组成，它是界于WORD字处理软件与ACCESS数据库软件之间的电子表格工具，功能十分强大，特别适合于日常工作使用。
使用得好，完全比目前所有的检验科办公系统优秀。
现就先介绍一下如何使用Excel绘制标准曲线。
首先，将数据整理好输入Excel，并选取完成的数据区，并点击图表向导，如下图所示。
点击图表向导后会运行图表向导如下图，先在图表类型中选“XY散点图”，并选了图表类型的“散点图”。
点击“下一步”，出现如下图界面。
如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如果是纵向列表就改选“列”。
如果发现图不理想，就要仔细察看是否数据区选择有问题，如果有误，可以点击“系列”来更改，如下图。
如果是X值错了就点击它文本框右边的小图标，结果如下图：出现上图后，如图在表上选取正确的数据区域。
然后点击“下一步”出现图表选项界面，如下图，上应调整选项，以满足自己想要的效果。
点击“下一步”，现在一张带标准值的完整散点图就已经完成，如下图。
完成了散点图，现在需要根据数据进行回归分析，计算回归方程，绘制出标准曲线。
其实这很简单，先点击图上的标准值点，然后按右键，点击“添加趋势线”。
如下图。
由于本例是线性关系，在类型中选“线性”如下图点击“确定”，标准曲线就回归并画好了。
标准曲线是画好了，可是我们怎么知道回归后的方程是什么样呢？这了简单，点击趋势线然后按右键，选趋势线格式，如下图：在显示公式和显示R平方值前点一下，勾上。
再点确定。
好了，现在公式和相关系数都出来了。
如图：呵R的平方达，线性相当好。
可是有时候有的项目是成指数增加的，散点图如下图，从上图看并不值关，除了最大的一个点外其余的几乎都成了直线。
这不难理解，对于10000000而言，10与10000都差不了多少。
因此我们平时常使用半对数坐标纸画图。
对于Excel也可以，先点中Y坐标轴，再按右键，选“坐标轴格式”如下图将左下方的对数刻度选中，确定。
完整的一个半对数标准曲线就做好了。
用Excel绘制标准曲线用Excel绘制标准曲线将数据整理好输入Excel，并选取完成的数据区，并点击图表向导，如下图：点击图表向导后会运行图表向导如下图，先在图表类型中选“XY散点图”，并选了图表类型的“散点图”。
点击“下一步”，出现如下图界面。
如是输入是如本例横向列表的就不用更改，如果是纵向列表就改选“列”：如果发现图不理想，就要仔细察看是否数据区选择有问题，如果有误，可以点击“系列”来更改，如下图：如果是X值错了就点击它文本框右边的小图标，结果如下图：在表上选取正确的数据区域，点击“下一步”，出现图表选项界面如下图，调整选项，以满足自己想要的效果：点击“下一步”，一张带标准值的完整散点图完成，如下图：现在要根据数据进行回归分析，计算回归方程，绘制出标准曲线：先点击图上的标准值点，然后按右键，点击“添加趋势线”。
如下图：本例是线性关系，在类型中选“线性”，如下图：点击“确定”，标准曲线回归画好：回归后的方程是什么样呢？点击趋势线然后按右键，选趋势线格式，如下图：在显示公式和显示R平方值前点一下，勾上。
再点确定，公式和相关系数都出来了。
如图：由此标准曲线可得出浓度：切换到“选项”标签页，选择“显示公式”，确定。
在图表中出现一个公式，即浓度对吸光度的关系。
在单元格中输入该公式，即可根据该公式计算出样品的浓度。
有时候有的项目是成指数增加，散点图如下图：从上图看并不相关，除了最大的一个点外其余的几乎都成了直线。
这不难理解，因为对于10000000而言，10与10000都差不了多少。
因此我们平时常使用半对数坐标纸画图。
对于Excel，先点中Y坐标轴，再按右键，选“坐标轴格式”如下图：将左下方的对数刻度选中，确定。
完整的一个半对数标准曲线就做好了：利用Excel制作标准曲线，如果认真调整参数可以得到不同的效果。
绘图时最好用XY散点图。
生成图表后，选择生成的曲线，之后在曲线上点击右键，选择“添加趋势线”，在“类型”中，选择最接近的曲线形式。
比如你的曲线接近线性，则选择“线性”，若接近乘幂的形式，则选择“乘幂”，如果比较难判断，则选择“多项式”，并调整其阶数。
荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制1. 绝对定量定义绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。
将标准品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应。
以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT 值为纵坐标，绘制标准曲线，对未知样品进行定量时，根据未知样品的CT值，即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。
* Log(起始浓度)与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，即得到该扩增反应存在的线性关系* 由样品CT值，就可以计算出样品中所含的模板量2. 绝对定量标准品标准品的一些标准* 必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增，并且扩增效率相同* 标准品必须是经过准确定量的* 标准品必须是标准化的* 在每组实验时，必须用相同的阈值设定来确定CT值标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA，也可以是比扩增片段长的纯化后的PCR产物，当然也可以是基因组DNA，甚至cDNA，但前提是所有的作为标准品的核酸都必须保证稳定。
3. 标准品的制备一般一条标准曲线取四到五个点，浓度范围要能覆盖样品的浓度区间，以保证定量的准确性。
一般一个点重复三至五次，对于常期稳定使用的标准品可以适当减少重复的次数。
倍比梯度稀释方法：1v原液+9v稀释缓冲液，得标准品ii1v标准品ii+9v稀释缓冲液，得标准品iii1v标准品iii+9v稀释缓冲液，得标准品iv1v标准品iv+9v稀释缓冲液，得标准品v依次倍比稀释拷贝数的计算：详见核酸拷贝数的计算4. 实例标准品的制作：将标准品依次进行10倍稀释，ASP-3700 测得其拷贝数×108copy /ul标准曲线的绘制设置对照：浓度为×107、×106、×105、×104、×103、×102、×101的标准样品各一个，设空白对照PCR反应：以不同浓度标准品作为模板标准品的扩增曲线标准品的溶解曲线标准品的标准曲线图扩增效率计算：E=10-1/斜率=10-1/-=，E%=()×100%=104%若未知样本的CT值为，将CT值代入线性方程：即=，所以X=()/(-)=Quantityunknow==50118 copies核酸拷贝数的计算一、分步推理如何计算核酸拷贝数1A260吸光度值=dsDNA 50ug/ml=ssDNA 33ug/ml=ssRNA 40ug/ml核酸浓度＝(OD260)×(dilution factor)×=ng/ulMW代表克/摩尔，单位dolton：1dolton即表示1g/mol1摩尔=摩尔分子(拷贝数)平均分子量(MW)：dsDNA=(碱基数)×(660道尔顿/碱基)ssDNA = (碱基数)×(330道尔顿/碱基)ssRNA=(碱基数)×(340道尔顿/碱基)得到拷贝数计算公式：(拷贝数/摩尔)×(浓度)/(MW g/mol)= copies/ml.即()×(g/ml)/(DNA length×660)=copies/ml.或(×1023)×(ng/ul×10-9)/(DNA length×660)=copies/ul.例：3000碱基质粒，浓度100 ng/ul MW=3000bp×660dalton/bp=×106daltons，即1mol=×106g(100ng×10-9)g/×106＝摩尔数copy数＝摩尔数××1023＝3×1010copies/ul.二、这是一个小小的计算器，使你计算更加方便快捷，免去算数之苦……什么是拷贝数？/html/如何计算拷贝数？计算方法：(×1023拷贝数/摩尔) ×(浓度g/ml) / (MW g/mol) = copies/ml 蛋白质水解度测定及其标准曲线绘制研究２１０２年３月广东轻工职业技术学院学报ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＵＡＮＧＤＯＮＧＮＤＵＳＩＴＲＹＴＥＣＨＮＩＣＡＬＣＯＬＬＥＧＥＶＯ．１１ｌＮｏ．１Ｍａ．ｒ２２Ｏ１蛋白质水解度测定及其标准曲线绘制研究蒋婧密８２３９摘要：应用茚三酮显色法对蛋白质水解度的测定及其标准曲线生成进行了分析。
进而，于一元线性回归分别在Ｅｃｌ和Ｍａａ基ｘｅｌｔｂ平台上对标准曲线的生成进行了研究，ｌ并给出了相应的标准曲线生成源代码，为蛋白质水解度的控制及工业分析中各标准曲线的绘制提供了必要的手段和方法。