生化实验技术
一、选择题
1、某蛋白质pI为7.5，在pH6.0的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向为
A、向负极移动
B、向正极移动
C、不运动
D、同时向正极和负极移动
2、进行酶活力测定时
A、底物浓度必须极大于酶浓度
B、酶浓度必须极大于底物浓度，
D、酶能提高反应的平衡点 C、与底物浓度无关
3、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳比一般电泳的分辨率高，是因为具有下列哪种效应？
A、浓缩效应
B、电荷效应
C、分子筛效应
D、粘度效应
4、分离鉴定氨基酸的纸层析属于
A、亲和层析
B、吸附层析
C、离子交换层析
D、分配层析
5、下面关于多聚酶链式反应（PCR）的叙述哪一个是不正确的？
A、是Mullis 在1984年发明的一种体外扩增DNA的技术。

B、根据DNA复制的基本原则，反应体系中需要加入RNA聚合酶以合成引物
C、在PCR反应体系中，需要特定引物、四种脱氧核苷酸三磷酸、镁离子等
D、需要模板DNA，即待测的DNA片段
二、是非题（在题后括号内打√或×）
1、蛋白质在小于等电点的pH溶液中，向阳极移动，而在大于等电点的pH溶液中，将向阴极移动。

2、酶的比活力可表示酶纯度。

3、3、提纯酶时，只需求其总活力，就可以知其纯度是否提高了。

三、问答题：
1、盐析法沉淀蛋白质时，往往需要将pH调到蛋白质等电点附近，为什么？
2、试分别阐述分配层析和吸附层析法分离鉴定氨基酸的原理和操作步骤。

1、3、以DNA的分离纯化为例，阐述生物大分子分离纯化的基本原则原理和注意事项。

4、电泳现象的产生与蛋白质的分子结构有何关系？
5、在pH6.5的谷氨酸和丙酮酸混合液中，加入适量的新鲜猪肝匀浆后于37℃水浴中保温30分钟，煮沸后蛋白质沉淀，将上清液点在层析滤纸上，用酚水饱和液进行层析，层析结束后用茚三酮显色出现两条带，这两条带各是什么物质：说明原因？
6、测定酶活力时，应注意哪些事项？为什么？
7、聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么特点？试述聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质的基本原理和主要操作步骤。

8、如果你从动物肝脏中分离提取到了一种物质，猜测它可能是转氨酶，你怎样确定它是蛋白质？又如何判断它是酶？请简述你的方案。

9、试比较核酸测序和蛋白质测序在方法策略上的异同。

10、阐述核酸、蛋白质一级结构研究和大规模测序的必要性以及对生命科学发展的重大影响。

四、名词解释
吸附层析分配层析分子筛层析离子交换层析亲和层析
浓缩效应PAGE 盐析透析
参考答案
一、选择题
1. A
2..A
3.A
4.D
5.B
二、是非题
1.×
2..√
3.×。