• 单向琼脂扩散试验：指可溶性抗原在相 应抗体的琼脂介质中的扩散，可定性、 定量抗原
• 双向琼脂扩散试验，是将抗原和相应抗 体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。 两者相互扩散，当扩散到他们的浓度比 例合适的部位相遇时，就会形成抗原抗 体复合物的沉淀
二、实验材料
• • • • 法氏囊病毒琼扩抗原 法氏囊琼扩阳性血清 1%琼脂 玻片、打孔器、加样器、tip头等
中和反应
• 针对病毒的一些蛋白质抗原或抗原表位 的抗体与病毒结合后可以中和病毒的感 染性。 • 病毒中和试验可以在细胞培养、鸡胚或 动物上进行，一般将抗体作稀释，与一 定量的病毒混合，然后检测其在细胞培 养、鸡胚或动物上的残余感染性。
• 终点是以抑制细胞病变（细胞培养）或 病毒复制（鸡胚或动物）的抗体最高稀 释度来表示。 • 中和试验具有很强的特异性，是检测病 毒和新分离病毒毒株的鉴定最经典的方 法，也可用于检测病毒感染动物血清中 的抗体。
双向琼脂扩散试验
一、实验目的
• 掌握双向琼扩试验的原理和用途 • 掌握双向琼扩试验操作方法 • 观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线
一、原理
血清学反应：
• 凝集反应
• 沉淀反应
• 补体参与的反应
• 中和反应
凝集反应
• 颗粒性抗原，或吸附在颗粒性载体表面 的可溶性性抗原，与相应抗体结合，在 有适当电解质存在，经过一定时间，形 成肉眼可见的凝集团块
三、步骤
• • • • • • • • 称取1g琼脂粉，加至100ml 8%高渗盐水中，配制1%琼脂凝胶； 稍冷至55 ℃却后浇板(4ml/块)，注意载玻片应放水平，琼脂勿倒出板外； 待凝固后在琼脂上打梅花孔(孔径2mm,孔距3mm)，孔内的琼脂如未吸出 则用注射器针头挑出 封底：将玻片于酒精灯上烘烤背面（温度不宜过高，以不烫手为宜），使 琼脂与玻片紧贴； 将抗体按二倍比稀释法稀释成1:2，1:4，1:8，1:16，1:32 中间孔加抗原，周围孔加倍比稀释抗体，其中一个 孔加滴入生理盐水作 为对照（小心加样，不要溢出） 置37 ℃湿盒24-48h 结果观察：在抗原抗体比例合适处，出现白色沉淀，以出现明显的沉淀线 的最高稀释度为该抗体的效价
• 参与凝集反应的抗原称凝集原，抗体称 为凝集素
沉淀反应
• 沉淀反应：将可溶性抗原与相应抗体混合，在 电解质存在条件下，经过一定时间，即可形成 肉眼可见的沉淀物 • 沉淀物只有在抗原抗体比例合适时才出现
补体参与的反应
• 补体结合试验是根据补体能与任何抗原 抗体复合物结合，但不能单独同抗原或 抗体结合的特性，用特定的补体来检测 抗原抗体间有无特异性结合
四、作业
• 实验报告（画图并解释实验结果） • 琼扩试验应注意哪些事项？ • 琼扩试验有何意义？
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