(2)常用灭菌的方法：
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌：160170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸汽灭菌：100kPa、 121 ℃下维持15-30min.
步骤一：制备LB培养基(液)
称量-计算-溶化-灭菌-倒平板
灭菌：加上封口膜，用牛皮纸包好放在高压蒸汽灭 菌锅中灭菌，1Kg压力灭菌15Min
倒平板过程总结
凝固剂 琼脂
固体培养基 分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏
选择培养基 鉴定培养基
天然培养基 合成培养基
培养基成分
成分
作用
碳源
主要作能源物质
氮源
合成含N类化合物
无机盐
调节渗透压等
水
生长因子
调节促生长
主要来源
无机碳(CO2) 或有机碳(糖类) N2，NH3，铵，硝酸盐 尿素，牛肉膏，蛋白胨
维生素，AA，碱基等
步骤四：接种到斜面保存
将单菌落用划线法接种到斜面，37度培养24h后放 入4度冰箱保藏
分离的另一种方法：稀释涂布平板 法
分离的另一种方法：稀释涂布平板 法
谢谢！
平板划线接种
灼烧接种环
冷却
蘸取菌液
灼烧接种环
冷却
灼烧接种环 灼烧接种环
冷却 冷却
划线 （第一区域）
划线 （第二区域）
划线 （第三区域）
划线 （第四区域）
灼烧接种环
冷却
平板倒置放置培养
划线 （第五区域）
灼烧接种环
第五区域 第四Leabharlann 域第一区域 第二区域第三区域
1.为什么在操作的第一步以及每次划线 之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时， 仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进 行划线？
• 以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么 总是从上一次划线的末端开始划线？
• 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处 要少，每次从上一次划线的末端开始，能使 细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少， 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
步骤三：大肠杆菌的分离纯化
分离方法：平板划线分离法
原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表 面。在数次划线后，可以分离到由一个细胞繁殖而 来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。
只能蘸一次、再次划线从上次末端开始、划好倒置 培养1-2天、划线末端出现不连续的单个菌落
紫外灯，过滤风，酒精灯，酒精棉球 在火焰旁右手3指拿锥形瓶，2指拿封口膜 使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰 左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培
养皿，立刻盖上皿盖 待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置
步骤二：大肠杆菌的扩大培养
从大肠杆菌斜面→锥形瓶中的液体培养基 接种好后在37度摇床振荡培养12h 工具：接种环在接种前要灭菌
• 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可 能存在的微生物污染培养物
• 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束 后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接 种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而 通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目 逐渐减少，以便得到菌落
• 划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残 留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
无菌技术
消毒：较为温和的方法，如酒精 注：消毒不能杀死芽孢
灭菌：强烈，所有，完全无菌
灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重 要的技术。
(1)常用消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min（牛奶） 3、化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;氯 气消毒水源 4、紫外线消毒（空气）
微生物
放线菌
单细胞原核，分支状的菌丝（基内~、气生~）
芽孢
芽孢：细菌的休眠体
大肠杆菌
结构 异养型，兼性厌氧型，革兰氏阴性(红色)(G-) 物质(元素)组成：C H O N P S…
培养基类型
按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生 长繁殖的营养基质。
液体培养基 扩大培养，工业生产