Ｄ Ａ Ｖ Ｂ， Ｈ 、 Ｅ 引物序列和 目的产物长度见表 １ ０ Ｐ Ｒ扩增体 系为 ： ｌ Ｐ Ｃ Ｐ 、２引物 各 ０ ５Ｉ ｏ Ｌ Ｋ Ｉ ． ｍ ｌ ， Ｃ ｚ ／
１ ０ ｍｍｏ Ｌ， Ｃ２２ ｍｍｏ Ｌ， ＮＨ ） Ｓ ４８ ｍｍｏ Ｌ ｌ Ｍｇ １ ／ ｌ （ ４ ２ Ｏ ／ ｌ ， ／ Ｔｉ ＨＣ （ Ｈ ９ ０） １ ｍｍｏ Ｌ ＮＰ ０ ０ ５ ， Ｓ ｒ ｓ— １ ｐ ． ０ ｌ ， ４ ．％ ＢＡ ／
基 因阳性率 １．％ ；Ｅ 、 Ｈ 、 Ｉ 、Ｐ ＶＭ基 因 阳性检 出。结论 ０５ Ｐ Ｒ Ｄ Ａ ＧＭ ＳＭ、Ｉ 无
是 导 致 菌 株 出现 多 重 耐 药性 的重种 耐药基 因 Ｃ
【 关键词 】 铜绿假 单胞 茵； 耐药基 因； 耐药机制
００ ％ （ 量 浓 度 ） Ｔ ｑＤ Ａ ｓ Ｕ 共 ｌ Ｌ 另加 入 ．２ 质 ，ａ Ｎ ａｅ１ ， ５ ，
模版 Ｄ Ａ５Ｉ 。循环参数为 ：２ Ｎ ｘ Ｌ ９ ℃预变性 ５ｍｎ ９ ｏ ｉ ；３Ｃ
６ ，５Ｃ ６ ， ￣ ６ ， ０ｓ５ ｏ ０ｓ７ Ｃ ０ｓ循环 ３ ２ ５次 ； 最后 ７ ℃延伸 ５ ２ ａ 。Ｐ Ｒ扩增产物用 １５ ｒｎ Ｃ ｉ ． ％琼脂糖 凝胶 电泳 ， 胶成 凝
出。因此 ， 我们将 ＩＵ检 出 Ｐ ｅ Ｃ ａ 菌株进 行体 外耐药 监 测， 并对其 中 ｌ ９株 多重 耐药 菌株 进行 耐 药基 因 的检
１ ｉ， ０ｍ ｎ 取上清置 于 一 ０ ２ ℃保存备用 。 １５ 耐 药基 因检测 均采用 Ｐ Ｒ扩增 法 ， 测的耐 ． Ｃ 检
药基 因 有 Ｏ ｒ ２ Ｉ Ｐ一１ Ｇ Ｍ、Ｐ Ｖ Ｍ、Ｅ Ｐ Ｒ ｐＤ 、Ｍ 、 Ｉ Ｓ Ｍ、 Ｉ Ｔ Ｍ、 Ｅ 、
・
１６ ２８・
东匿 ２１年５ 第３ 卷第 １期 Ｇａｇｏｇ ｄ ａＪｕｎｌ ａ２１， ｏ ３， ｏ １ 学 ００ 月 １ ０ ｕｎｄｎ ｉｌｏｒａ Ｍｅｃ Ｍｙ ０ Ｖ１ １ Ｎ． ０ ０ ．
重症 监护 室 多 重 耐药 铜绿 假单 胞 菌 耐药 基 因分 型研究
马骥 ，黄彬 蓝锴 ，
Ｇ Ｍ Ｉ
Ｐ ： 一Ｃ Ｙ Ｔ ＧＣ １ｒ ＣＣ Ｇ ’Ｉ 一 １５ ＴＩ； Ａ Ｇ ＹＧ Ａ Ｃ１ ＇Ａ ３ １＇ Ｐ ５ ２． 一Ｃ ＣＣ Ａ ＡＧ Ｔ ＡＴ ＇ＡＧ ＡＧ Ｃ ＡＧ Ｃ Ａ １ Ｇ Ｇ一３
广东省 中医院检验科 （ 州 ５０ ２ ） 。 广 １１０ ； 中山大学附属第一 医院检验科（ 州 ５ ０ ８ ） 广 １０ ０
【 摘要 】 目的 了解 ＩＵ检 出多重耐 药铜绿假 单胞 茵（ ａ ） 药基 因存在情 况。方法 将 ＩＵ检 出 Ｐ ｅ菌 Ｃ Ｐｅ 耐 Ｃ ａ
株 进 行 体 外 耐 药 监 测 ， 对 其 中 １ 多 重耐 药菌 株进 行 耐 药相 关基 因 Ｏ ｒ２ Ｉ 并 ９株 ｐＤ 、 ＭＰ一１ ＧＭ、Ｐ Ｖ Ｍ、 Ｅ Ｐ Ｒ 、 Ｉ Ｓ Ｍ、 Ｉ Ｔ Ｍ、Ｅ 、 Ｄ Ａ 和 Ｖ Ｂ检 测 。结 果 Ｈ Ｅ Ｐ Ｒ 结 果 显 示 Ｏ ｒ２基 因 、Ｍ Ｃ ｐＤ Ｉ Ｐ一１基 因 阳性 率 １０ ；Ｅ 基 因 阳 性 率 ７ ． ％ ： Ｅ ０％ ＴＭ ３７ Ｖ Ｂ
碳青霉烯类是 目前所使用抗生素 中有最广抗菌谱 的药物 ， 了嗜麦芽窄食单胞 菌等一些天然 耐药的细 除 菌外 ， 对几乎所有 的由质粒 或染色 体介导 的 Ｂ一内酰 胺酶稳定 ， 抗菌活力 强 ， 具有快 速杀菌作 用 ， 因此 被称 作革 兰 阴 性 杆 菌 的 “ 牌 杀 手 ” 王 。铜 绿 假 单 胞 菌 （ ｓｕｏ ｏａ ｅ ｇ ｏａ Ｐ ｅ 是 最 常见 的条 件 致 病 Ｐｅｄｍ ｎｓａｒ ｉ ｓ ， ａ ） ｕｎ 菌 ， 由于存在 多种 耐药机制使 得其耐药率 常常居高 且 不下 ， 尤其是重症 监护 室 （Ｃ ） Ｉ Ｕ 患者 因住 院时间长 且 长期使用多 种抗 生素 和免疫 抑 制剂 等或 长期 体外 插 管， 使得 ＩＵ患者检 出铜 绿假单 胞菌耐药 现象尤 为突 Ｃ
ＭＨ平板购 自广州迪 景 生物有 限公 司； 敏纸 片购 自 药 Ｏｏ ｘｉ ｄ公司 ； 药敏试验结 果判断采 用美 国 Ｃ Ｓ ２０ Ｌ Ｉ ０ ８年 标准… 。检测 １ ７种抗 生素 ： 庆大霉素 、 阿米 卡星、 四环 素、 妥布霉 素 、 卡西林 、 替 替卡西林／ 克拉维 酸 、 哌拉 西 林、 哌拉西彬 他唑 巴坦 、 环丙 沙星 、 氧氟 沙星 、 孢 左 头 瞳松 、 头孢他啶、 头孢 吡肟 、 曲南 、 氨 亚胺培 南 、 美罗 培
像 系 统 观 察 分 析 ， 录结 果 。 记
表 １ 耐 药 基 因 引物 序 列 及 目的产 物 长 度
测， 以期从 分子水平揭示其耐药率高的原 因。
１ 材 料 与 方 法
１１ 茵株 来源 Ｐｅ ． ａ 菌株全部分离 自２０ ０ ９年 １ —６月 我院 ＩＵ患者 的痰 、 Ｃ 中段尿 、 液、 血 腹水 等标 本 ， 总计
长ｂ 度 产） （ 物 ｐ
１３ ９
１２ 药物敏 感试 验 ．
采 用 Ｋ—Ｂ法进 行 药敏 试 验。
ＩＰ一 Ｍ １
Ｐ ： 一 Ｇ Ｃ （ ／ ） Ａ Ｇ Ｇ Ａ Ｃ Ｇ Ｇ Ｔ Ｃ］ｒ ３ ５７ １５ Ｃ Ｇ Ｃ ＧＴ Ｃ Ｇ Ａ （ ／ ） （ ／ ） １ 一 ８ ｒ
Ｐ ： Ａ Ｃ Ａ ＴＴＦ Ｃ Ｃ Ｔ Ｔ Ａ （ ／ ） Ｔ一 ２５ Ａ Ｃ Ｇ Ｉ Ｇ （／）ｒＣＣＴＡ ３
２５株 ， 用 法 国生 物 梅 里 埃 Ｖｔ ２ 定 到 种 。 １ 均 ｉｋ一 鉴 ｅ
誓
Ｏｒ２ ｐＤ
引列 物 序
Ｐ ： 一 Ｇ Ｃ Ｃ ＣＣ ＡＧ Ｃ Ｔ 一 １５ ＣＧ ＡＴ Ｔ Ａ ＡＣ Ａ Ｇ ３ Ｐ 一 ＧＣ ＡＣ Ｃ Ｔ ＧＡ Ｇ ２１ ５ Ｃ Ｇ ＧＡ ｒｒ ＣＧ ＡＧ一３