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• 1.2麻醉法 • 移取飞翔或活动能力强的试虫时，常采用麻醉法处理，以 达到试虫混匀移取的要求。但是麻醉处理对昆虫的生理状 态有一定影响，因而要注意麻醉时间，以免对试虫造成伤 害。 • 1.2.1 二氧化碳法 • 用CO2或CO2与空气（3：1）混合气体麻醉法，可用于大 多数试虫。可在一个密闭容器里放入试虫，然后通入二氧 化碳即可进行麻醉。 • 1.2.2 挥发蒸气法 • 在密闭广口玻璃容器（如干燥器）中，放入三氯甲烷与 酒精（1：1）、三氯甲烷与乙醚（1：1）、乙醚与酒精 （1：1）或乙醚等药品，进行麻醉。麻醉时间随各种试虫 群体对麻醉剂的敏感性和所要求的麻醉程度不同而定，如 家蝇的麻醉时间一般在4min以内。
B 田间药效试验
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• 田间药效试验是在自然或一定的人为 控制条件下进行的生物测定，是一种 综合评价药剂使用价值的试验方法。 是一种新化合物能否成为农药的关键 性阶段。
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LOGO 田间药效试验可分为： 小区试验 大区试验 大面积示范试验 其中小区和大区药效试验都是在有限的 范围和面积内进行的，有一定的局限性， 通常还要进行大面积示范试验以取得验证 并迅速推广。
棉铃虫的饲养
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• 棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目 夜蛾科。食性杂，可长年饲养。但因幼虫 在三龄期以后有相互残杀习性，须单头饲 养。连续大量饲养可采用人工饲养。
（1）人工饲料配方
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• A．含大豆粉和玉米粉的饲料 • （a）饲料组成 • 熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0 • 大麦粉（g）30.0 抗坏血酸b）0 • 干酵母（g）8.0 琼脂（g）3.5 • 苯甲酸钠（g）0.8 棉油（ml）0.5 • 36％醋酸（ml）6.0 10％甲醛（ml）1.0 • 水（ml）200
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• 1.3趋光法 • 用强光照射时，家蝇、果蝇等试虫会向光 源群集，利用昆虫的这种趋光性来移取试 虫。如家蝇成虫，家蝇从饲养笼中向着阳 光或灯光飞到移取笼中。该法移取的试虫 均匀性较差，先移出的试虫多为生活力较 强的个体，且易造成虫体损伤或飞逃。
三 、杀虫剂毒力的表示方法
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• 毒力即是农药的毒性程度。常用的杀虫剂毒力表示方式： • 致死中量(Median Lethal Dose)，即杀死供试昆虫群体半数 个体所需要的剂量，常以LD50表示； • 致死中浓度 (Median Lathal Concentration)，即杀死供试昆 虫群体一半个体所需要的药剂浓度，以LC50表示； • 致死中时(Median Lethal Time)或击倒中时(Median Knockdown Time),即杀死或击倒供试昆虫群体一半个体所 需的时间，单位示分钟，记做LT50或KT50。 • 同时，在不同药剂间毒力比较时，还常常使用LD95或LC95 来描述杀虫剂毒力, 即杀死昆虫群体95％的个体所需的药 剂剂量或浓度。
B．含棉叶粉的饲料 （a）饲料组成 干棉叶粉（g） 7.0 尼泊金（g） 0.25 熟豆粉（g） 7.5 琼脂（g） 1.5 多维葡萄糖（g） 1.9 自来水（mL） 600 抗坏血酸（g） 1.9 酵母片（粉）（g） 4.5
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• （b）配制方法 将黄豆粉置高压灭菌锅内， 经30分钟灭菌（15磅压力），取出凉干备 用。把酵母片研成粉末，置紫外线灯下灭 菌30分钟。将琼脂放入200ml水中加热熔化， 再加入400ml水、熟豆粉、多维葡萄糖、抗 坏血酸、尼泊金、干制棉叶粉，充分拌匀 后，分装于指形管中，每管10g左右。
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2．设立对照，消除试验中的偶然误差 在农药试验中通常所设的对照有： （1）空白对照 （2）溶剂和乳化剂试验 （3）标准药剂试验
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• 3．各处理设立重复，减少误差 • 从生物统计的理论上讲，重复次数越多， 其平均值就越接近真实值，试验结果也越 可靠，但工作量太大。通常在生物测定中， 每处理设3～5个重复，每重复采样数因测 定对象而定：如某种杀虫剂对小菜蛾的毒 力测定，每处理可用30～50头3龄幼虫。
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• 4．统计分析试验结果
• 运用生物统计分析原理，总结归纳实验数据， 化繁为简，找出规律，科学地反映出农药与 病虫害间的内在联系，给出结果。主要用显 著性测定（方差分析，t值或F值测定）。
• （二）设计步骤 • 1．选择合适的试验对象 • 2．确定药剂的用量（浓度）及用法（点滴、 浸渍、喷雾、药膜等） • 3．确定试验结果的观察方法，如LD50、 ED50、LC50等指标 • 4．确定试验设计方案 • 5．试验的实施 • 试验结果的生物统计分析
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生物测定的基本原理
• 利用生物体对农药的反应性质和程度来鉴 别和测定农药的生物活性及其相关性，即 对昆虫、病原菌杂草及高等动物毒性、作 用方式、作用程度，用以比较毒力或药效。
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主要研究内容主要研究内容
• 综合其在农药研究和植物化学保护应 用中的作用，生物测定包括：室内毒 力测定、田间药效试验和微量毒物的 定量生物分析。
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第九章 农药的生物测定
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一、生物测定的基本原理和内容
概念
• 农药生物测定是指用活体生物对农药的毒 效、毒性进行的测定评价。是测定药剂有 无生物活性的基本方法。
• 农药生物测定与室内毒力测定一般没有严 格区别，多半是指在室内进行的测定。
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• 包括利用标准供试生物对农药有效成 分含量的测定 • 农药在室内外对病虫草药的测定 • 农药在动、植物体内残留量的测定 • 对病虫草抗药性的测定。
• 主要的研究内容包括： • （1） 测定杀虫剂对昆虫的效力。 • （2） 筛选新农药及探索新化合物的化学结构与毒效 关系的规律（即构效关系的研究，较多地运用于计算 机辅助开发新农药的过程）。如溴氰菊酯有8种异构 体，但只有右旋顺式体对昆虫的毒效最高。六六六的 8种异构体中，也只有丙体666的毒效最高。 • （3） 研究杀虫剂的理化性状与毒效的关系及鉴定加 工剂型的质量。 • （4） 研究目标昆虫的生理状态及外界条件与药效的 关系。 • （5）测定不同杀虫剂混用的效力以及寻找增效剂等。
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• 1 移取试虫的方法 • 毒力测定时，首先应将试虫从饲养缸（笼） 中快速移出，且不能损伤虫体。根据毒力 测定所用的昆虫种类、个体大小、生活习 性和特点不同，以及移取的工具和方法的 差异可分为机械法，化学法和趋光法。
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• 1.1机械法 • 对于菜青虫、斜纹夜娥等活动能力不大或 有假死性的试虫，可采用最简单的取虫工 具，如镊子来移取。而一些体型小、体软 或易碰伤的试虫，如蚜虫、红蜘蛛、小菜 蛾等，可用毛笔移取。 • 一些活动能力不大、微小或易受机械伤害 的目标昆虫（如杂拟谷盗、米象、蚜虫和 虫卵等）。此类试虫用上述方法移取困难， 费时或易造成伤害，可用真空或喉管空气 注射吸虫法移取，既方便又快速。
二 、供试昆虫的准备
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为了使毒力测定的结果可靠稳定，除了严 格控制每次试验过程中的条件外，杀虫剂 毒力测定要求所用试虫群体质量的均匀一 致，除饲养的试虫外，从野外采集的田间 试虫，应进行分离和严格挑选，如虫期、 龄期、性别等，使之达到群体质量均匀， 尽可能地减少试验误差，保证获得满意的 结果。移虫前应该净手及消毒，避免药剂 或有害病菌污染虫体；操作时要细心，不 要碰伤虫体。
A 室内毒力测定
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• 1、活性化合物的筛选（初筛/复筛），主要 研究大量化合物的活性筛选。 • 2、有害生物的抗性研究 • 研究农药的作用机理及生理效应，以 及农药对植物的生理作用等。 • 3、测定农药的有效含量及残留量。 • 4、研究农药理化性质和剂型与毒效的关系。 • 5、农药复配的共毒系数测定。
四 、杀虫剂毒力测定的常见方法
• 杀虫剂对不同种类的害虫毒力程度各异， 且致毒的方式也不一样，毒力测定的方法 也很多，根据杀虫剂的作用方式可分为四 种：胃毒作用、触杀作用、内吸作用和熏 蒸作用的毒力测定。
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• 1．胃毒作用(stomach action)的毒力测定 • 利用害虫的贪食性，使杀虫剂随食物一起被目标昆虫吞 食进入消化道而发挥毒杀作用。常用的有叶片夹毒法、液 滴饲喂法和口腔注射法三种 • （1） 叶片夹毒法（sandwich method） • 此法适用于植食性、取食量大的咀嚼式口器的昆虫，如鳞 翅目幼虫、蝗虫、玉米螟等。 • 基本过程是用两张叶片，中间均匀地涂上一定量的药剂饲 喂目标昆虫，然后由被吞服的叶片面积推算出吞服的药量。 此法最大的优点是可以减少目标昆虫与药剂的接触，避免 发生触杀作用，操作方便，结果比较精确，仍然是目前较 理想的胃毒剂毒力测定方法。但是准备夹毒叶片、计算吞 服面积等需大量的人力物力，每次处理的样品不能太多。
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• （b）配制方法 大豆粉蒸熟。将甲醛、棉油 和苯甲酸钠放在占总水量10％的水中，再 加入玉米粉等其他成分搅拌；加另外90％ 的热水，以溶解琼脂，冷至70℃时与上述 组分混合搅拌；饲料均匀平铺在瓷盘上， 厚度0.5—1.0cm，冷却后切成重5g左右小块， 分装于养虫管中备用。
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第二节杀虫剂室内毒力测定
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• 杀虫剂的室内毒力测定是不断地开发新的 有效杀虫剂，改善和提高现有杀虫剂的使 用效果，减少环境污染的必要手段。测定 所得结果是安全、合理、经济、有效的使 用杀虫剂的依据；可有效监测害虫的抗性 动态，有利于克服害虫抗药性以及保持自 然环境的生态平衡。
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• 1．相对控制环境条件 • （1） 室内生物测定多属单因子试验。如： 控制施药剂量，靶标生物的死亡率，控制 试验的温湿度条件等。 • （2） 田间试验多因子试验设计，对于大面 积的试验区难以形成人工控制的条件，仅 能对土肥、病虫分布、长势等进行小区控 制。加强田间管理，尽可能避免与试验无 关因素的影响