iTRAQ 结构
iTRAQ包括三部分：报告部分、肽反应部分、平 衡部分。 1、报告部分：有八种，因此iTRAQ可同时标记8 组样品。 2、肽反应部分：能与肽N端及赖氨酸侧链发生共 价连接而标记上肽段，几乎可以标记所有蛋白质。 3、平衡部分：保证iTRAQ标记的同一肽段的质荷 比相同。
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2：蛋白质组学研究内容
2.1：蛋白质的表达模式 （1）生理、病理或不同发育状态下蛋白质组表达差异蛋白质信息库。 （2）蛋白质及其组成质点的分离、分析、鉴定。 2.2：蛋白质的功能模式 （1）蛋白质结构分析。 （2）蛋白之间相互作用，翻译后修饰，细胞定位等。
3: 化学标记法—iTRAQ
简介：
iTRAQ试剂是可与氨基酸末端氨基及赖氨酸侧链氨基连接的胺标记同重元素。在质谱图 中，任何一种iTRAQ试剂标记不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。 在串联质谱 中，信号离子表现为不同质荷比(113-119，121)的峰，因此根据波峰的高度及面积，可以 鉴定出蛋白质和分析出同一蛋白质不同处理的定量信息。

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1：双向电泳
基于2D-PAGE 的经典定量分 析方法。 1、样品准备 和定量：抽提 对照组和各种 不同实验组的 蛋白质。 2、蛋白质分 离：蛋白质经 过2D-PAGE分离 后染色（银染、 考染等）。 3、蛋白质的 定性与定量分 析：通过与对 照组相Image Master 7.0分 析出实验组中 差异点，质谱 鉴定差异点蛋 白质,同时应用 软件分析出其 表达量的变化。
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1：蛋白质组学定义及研究意义
1.1：蛋白质组学定义（proteome) 一个基因组，一个细胞或组织，一种生物在一定时间，一定条件 下所表达的全部蛋白组成，存在形式，活动方式及时空动态。 1.2：为什么除基因组学外还要研究蛋白质组学： （1）蛋白质是功能的执行者。 （2）基因组与蛋白质组不一样：转录后的选择性剪切，翻译后的 修饰等等，导致蛋白质组远比基因组复杂。 （3）与基因组相比，蛋白质组具有以下特点：多样性，无限性， 动态性，相互作用，时空变化，需要多种技术，组学间的互助
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2：DIGE
DIGE荧光定量方法流程图. 1、样品准备：提取对照组和 不同实验组的蛋白质,定量,cy3 和cy5交叉标记，同时将所有实 验组与对照组的样品等量混合后 cy2标记，作为内标。 2、蛋白质分离：等量混合三 种荧光素标记后的蛋白质，2DPAGE电泳分离，荧光显色。 3、蛋白质定量分析：Image Master 7.0（DIGE)分析同一蛋 白质不同处理后的表达量变化。
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2.1：蛋白质组学研究内容
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2.3：蛋白质组学研究策略（本公司提供的服务）


2.3.1：比较蛋白质组学研究方法。 （1）：经典双向电泳方法 （2）：DIGE （3）：SILAC （4）：iTRAQ 2.3.2：蛋白质翻译后研究内容。 （1）：磷酸化修饰分析 （2）：糖基化分析 （3）：二硫键分析 （4）：其他
2：DIGE
简介： DIGE — 双向荧光差异凝胶电泳，利用荧光染料（Cy2, Cy3, Cy5） 能与蛋白质赖氨酸的氨基反应而使蛋白质被标记，标记后蛋白质的等电 点和分子量基本不受影响，等量混合标记好的蛋白质后进行双向电泳， 蛋白质表达量的变化则通过不同荧光的强度来体现。 技术优势： 1：高效性，同一块凝胶上可以电泳两个样品，减轻了工作量； 2：与常规银染相比灵敏度更高； 3：检测动态范围更大； 4：定量精确, 采用内标而消除了胶与胶之间的实验误差； 5：统计学分析，ImageMaster7.0（DIGE）软件可以得到统计学 可信的结果，降低了操作者之间的偏差。
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1：常规双向电泳

一、双向电泳概述： 双向电泳(Two-dimensional electrophoresis)的基本原理是利用 蛋白质的等电点（pI)和分子量(Mr)不同而分离蛋白质：第一向电泳—— 等电聚焦（Isoelectric Focusing，IEF）根据蛋白质的等电点不同将蛋 白质分离，第二向电泳——十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳 （Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis, SDS—PAGE）利用蛋白质的分子量大小不同将蛋白质分离。 双向电泳一次可以从细胞、组织或其它生物样本中分离上千种蛋白 质，凝胶上的斑点都对应着样品中的蛋白质，且各种蛋白质的等电点，分 子量和含量的信息都能通过质谱鉴定和软件分析获得。因此其在蛋白质组 分析、疾病标志物检测、细胞差异分析、药物开发、癌症研究等领域都得 到了广泛的应用。 二：双向电泳分离蛋白质混合物具有以下优势： 1、经典方法、应用范围广、适用于各类材料； 2、经济实惠，可大规模多个样本筛选和分析。
蛋白质组学
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蛋白质组学内容
1：什么是蛋白质组学，为什么研究蛋白质组学 2：蛋白质组学研究内容 3：蛋白质组学研究策略（本公司提供的服务） 3.1：比较蛋白质组学研究方法。 3.2：蛋白质翻译后研究方法。 4：蛋白质组学在疾病，植物，动物等方面的的应用
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3: 化学标记法—iTRAQ
与传统基于双向电泳定量分析相比，iTRAQ具有以下技术优势： 1：灵敏度高，检测限低，可检测出低丰度蛋白；

2：分离能力强,分析范围广,iTRAQ可以对任何类型的蛋白质进行 鉴定，包括高分子量蛋白质、酸性蛋白和碱性蛋白，膜蛋白和不 溶性蛋白。 3: 高通量：同时对8个样本进行分析，提高了实验通量，可同时 对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析；