华南农业大学实验报告
专业班次11农学一班组别201130010110题目植物组织中总糖和还原糖含量的测定姓名梁志雄日期
【实验目的】
1、掌握总糖和还原糖的提取方法；
2、掌握定量测定总糖和还原糖的原理和操作要点；
3、熟练地掌握分光光度法的操作技术。

【实验原理】
3,5-二硝基水杨酸是一种具有芳香环结构的分子。

还原糖与3，5-二硝基水杨酸在碱性条件下加热时，还原糖将3,5-二硝基水杨酸还原成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，而还原糖本身则被还原成糖酸。

在一定的浓度范围内，棕红色颜色的深浅与3-氨基-5硝基水杨酸的含量成正比，可用分光光度计在540nm波长下测定，利用系列浓度的葡萄糖测定后做成标准曲线，可以查出样品的还原糖的相应含量。

样品中的双糖、寡糖、和多糖需要用酸水解变成还原糖后再用此法测定。

【实验仪器和用品】
分光光度计、恒温水浴锅、电子天平、试管、三角瓶、容量瓶、量筒、滤纸、移液管。

【实验材料】
发芽水稻种子、3,5-二硝基水杨酸、标准葡萄糖溶液、氢氧化钠溶液、盐酸溶液
【实验步骤】
1、标准葡萄糖曲线的绘制取6支试管，编号1~6，按照下表1的顺序加入试剂
标准曲线的制作
管号123456
0.00.10.20.30.40.5
500ug/ml标准葡萄糖溶液
（ml）
蒸馏水（ml）0.50.40.30.20.10.0 DNS试剂（ml）0.50.50.50.50.50.5
沸水浴5min，冷却
蒸馏水444444
各管糖含量
050100150200250（ug）
A54000.0380.1200.1820.2450.295将各试管摇匀后，在分光光度计上把第一支试管调零，在540nm波长处分别读取各管的吸光值A540，分别填在表上，以表中“各管糖含量（ug）”一项数据为横坐标，以A540一项为纵坐标，做出标准曲线，曲线过原点。

2、样品中还原糖的提取在天平上称取去掉外稃后的水稻种子0.3g，放在研钵上，加蒸馏水3ml，加入少量的石英砂研磨成匀浆。

匀浆液转移到50ml的三角瓶中，用少许的蒸馏水清洗研钵，一并转入三角瓶中。

将三角瓶放在沸水浴中保温20min，取出冷却后，将匀浆液转移到501ml的容量瓶中，用少量的水荡洗三角瓶，一起转入容量瓶，用水定容到50ml，过滤，取滤液待测。

3、样品中总糖的水解和提取在天平中准确称取植物材料（发芽种子，去掉外稃）
0.2g，放入研钵中，加蒸馏水3ml，加入少许的石英砂匀浆，匀浆液转移到50ml的三角瓶中，用10ml的蒸馏水分2次清洗研钵，一并转入三角瓶中。

向三角瓶中加入
6mol/LHCL溶液10ml，摇匀，将三角瓶放在沸水浴中保温20min，取出冷却后，向三角瓶中加入6mol/LNacH溶液10ml，摇匀。

将瓶中匀浆液转移到100ml的容量瓶中，用少量水荡洗三角瓶一起转入容量瓶，用水定容到100ml，过滤。

取滤液1ml放入试管中，加蒸馏水2ml，摇匀待测。

4、样品中含糖量的测定取5支试管，分别编号1~5.按表2加入样品和试剂。

表二
试管编号12345
还原糖待测液
00.50.500
（ml）
总糖待测样品
0000.50.5（ml）
蒸馏水（ml）0.50000.5
DNS试剂（ml）0.50.50.50.50.5
沸水浴中加热保温5min，取出冷却
蒸馏水（ml）44444
A54000.4830.5680.0860.077
将各支试管摇匀后，在分光光度计中用第一支试管调零，在540nm波长分别读取各管的吸光值（A540），分别填在表二中，用各管的读数分别在标准曲线上查出相应的含糖量。

【实验数据处理】
根据表一可以做出下图
根据表二中的数据，查上图中的标准曲线可以得出
试管中还原糖待测样品
2号管为403ug ；
3号管为473ug ；
试管中总糖待测样品
4号管为72ug ；
5号管为64ug 。

根据下列公式
还原糖含量=
M ∗V
m ∗0.5∗100%
总糖含量=
M ∗V ∗0.9
m ∗0.5
∗100%
所以2
号管的还原糖含量==13.4%
403∗50
3000000∗0.5
∗100%
3
号管的还原糖含量==15.8%
473∗50
3000000∗0.5
∗100%
所以还原糖含量为（13.4%+15.8%）/2=14.6%
4
号管中总糖含量==19.4%
72∗300∗0.9
200000∗0.5
∗100%
5
号管中总糖含量==17.3%64∗300∗0.9
200000∗0.5
∗100%
所以总糖含量为（19.4%+17.3%）/2=18.35%
【实验总结】
本实验测得样品中总糖含量为18.35%，还原糖含量为14.6%，从上图中的标准曲线所得出的线性方程可知，其R2=0.9937，所以实验测得的数据可靠，误差较少。