毛细管色谱法测定洛美沙星中的有机溶剂残留量来源: 作者:王国成,陈莹,徐波摘要：目的:建立毛细管气相色谱法测定洛美沙星中的有机溶剂残留量。
方法: 用INNOWAX 毛细管气相色谱柱,FID检测器, 以22戊酮为内标进行测定。
结果: 乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈的线性范围分别为0～80μg/m l ( r =0.999 7)、0～11.52μg/ml( r=0.9996)、0～80μg/ml( r=0.9997) , 0～6.56 μg/ml( r= 0.9996);平均回收率分别为100.5%、100.1%、101.2%、100.1%; RSD 分别为1.30%、0.9%、1.18%和1.23% (n = 9)。
结论: 本方法简单、准确、灵敏度高、重现性好, 适用于洛美沙星中有机溶剂残留量的测定。
关键词洛美沙星,毛细管气相色谱法,有机溶剂残留量药物生产过程中残存的有机溶剂均有不同程度的毒性, 不仅对人体有害, 而且这些溶剂与药物的治疗作用无关, 原则上应愈少愈好。
洛美沙星为第三代喹诺酮类广谱抗菌药, 是由日本北陆株式会社研制的第一代口服长效抗菌药。
该药物在合成过程中采用了乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈等有机溶剂, 故对此4种有机溶剂加以检测有利于药物质量控制。
本试验采用毛细管色谱法测定洛美沙星原料药中有机溶剂的含量,方法简便,结果准确可靠。
1 仪器与试剂Agilent6890 增强型气相色谱仪, Agilent6890 工作站。
乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈均为分析纯(上海化学试剂公司) , 22戊酮(内标物) 为色标试剂(天津化学试剂一厂) , 1-甲基-2-吡咯烷酮, 溶解样品用溶剂为化学纯(上海化学试剂公司)。
2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱: Agilent HP-NNOWAX (固定液为键合聚乙二醇, 30m×0.53mm,1.0μm) 毛细管柱; 气化室温度: 220℃; 程序升温: 起始温度为40℃, 保持10min, 然后以20℃/min 升温至220℃,保持4 min;载气为氮气;分流比:1∶1; 进样量2μl; 检测器温度: 氢焰离子化检测器(FID) , 240 ℃。
2.2 溶液及试样制备2. 2. 1 内标溶液的制备精密量取色标试剂2-戊酮124.0μl (约相当于100mg) , 置100ml 量瓶中, 用1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀; 精密量取1m l, 置10ml容量瓶中, 用1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀, 作为内标溶液。
2. 2. 2 对照溶液的制备精密量取乙酸乙酯111. 1μl (约相当于100mg) , 乙醇126.6μl(约相当于100mg) 置100ml 量瓶中, 用1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度,摇匀,作为对照贮备液A; 精密量取四氢呋喃162.2μl(约相当于144m g) , 乙腈105.0μl (约相当于82mg) 置100ml量瓶中, 用1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀, 作为对照贮备液B。
精密量取对照贮备液A 10ml 与对照贮备液B 1ml 置同一100ml 量瓶中, 用1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀,作为对照贮备液。
精密量取对照贮备液5ml, 置10ml 量瓶中,精密加入内标溶液1ml, 加1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀, 即得对照溶液。
2. 2. 3 供试品溶液的配制取本品约0.1g, 精密称定, 置10ml 量瓶中, 精密加入内标溶液1ml, 加1-甲基-2-吡咯烷酮适量, 振摇使溶解并稀释至刻度, 摇匀,作为供试品溶液。
2.3 系统适用性试验精密量取对照品溶液2μl, 注入气相色谱仪, 记录色谱图, 测定各有机溶剂的分离度及柱效。
结果表明, 以上各有机溶剂计算的理论塔板数均达到2500 以上, 相邻溶剂的分离度均符合要求。
2.4 线性关系精密量取对照贮备液0.5、1. 0、2. 0、4. 0、5. 0、6.0 和8.0ml 分别置10ml量瓶中,各精密加入内标溶液1ml, 加1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀。
分别精密量取上述各浓度溶液2μl, 注入气相色谱仪,测定。
分别以乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈对照液的峰面积与22戊酮(内标) 峰面积的比值为纵坐标( Y ) , 以乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈的浓度为横坐标( X ) , 进行线性回归。
结果表明, 四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、乙腈在相应的线性范围内线性关系良好。
2.5 回收率试验分别取本品约0.1g, 精密称定, 置10 ml量瓶中(共10份) , 精密加入对照贮备液4ml(3份)、5ml(3 份)、6ml(3 份),另取1份不加贮备液, 作为空白, 再精密加入内标溶液1ml, 加1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀(共10份)。
分别精密量取上述各浓度溶液2μl, 注入气相色谱仪, 记录峰面积,计算回收率。
2. 6 精密度试验精密量取对照溶液2μl, 按上述测定法操作, 重复进样6次, 四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇和乙腈RSD 分别为0.40%、0.59%、0.60% 和0.63%。
2. 7 最低检出限的测定取对照品溶液逐步稀释进样, 测得乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈的最低检出限为50.3.6.25和102.5 μg/ml。
2. 8 样品测定按“2. 2. 3”项制备供试品试样, 按“2.2.2”项制备对照品试样, 分别测定, 记录色谱图, 按内标法以峰面积计算各溶剂含量。
3 讨论3.1 色谱柱的选择4种有机溶剂中乙醇和乙腈较难分离, 试验采用DB2624 气相色谱柱不能达到基线分离, 选用Agilent HP-NNOWAX 毛细管柱, 在本试验条件下,各物质均可达到有效分离,4种有机溶剂和内标的出峰顺序依次为四氢呋喃(2.142min)、乙酸乙酯(2.455min) , 乙醇(3.233min)、2-戊酮(4.118min)和乙腈(5.074min) , 整个分析过程在20min内完成,快速简便。
3.2 内标物的选择内标物的选择应在分析的样品中间出峰, 且不干扰被测成分的物质, 采用内标法测定有机溶剂含量, 可以减少仪器及实验者的操作误差。
经过多种有机溶剂的筛选, 选择22戊酮为内标可以和这4种有机溶剂达到有效分离,无干扰,方法学验证得到满意结果, 精密度符合中国药典要求(RSD< 5%) ,因此该方法应用于有机溶剂的含量测定准确、可信。
3.3 柱温的选择柱温升高可使有机溶剂的出峰时间提前, 但升高温度不利于此4种有机溶剂的分离, 因此初始柱温选择40℃, 在此温度下, 溶剂1-甲基-2-吡咯烷酮的出峰时间保留时间过长, 在保证有机溶剂和内标得到有效分离的情况下, 利用程序升温使溶剂峰快速出峰, 缩短分析所用时间。
参考文献1 周海钧, 金少鸿. 人用药品注册技术规范国际协调会( ICH)-质量的技术要求. 中国药学杂志, 1996, 31 (11) : 6942 中国药典.2000. 二部. 附录64高效毛细管气相色谱法测定保心安油中(一)-薄荷酮、薄荷脑和桂皮醛的含量来源: 作者:郑纯;曾洁摘要：目的：采用高效毛细管气相色谱法同时测定保心安油中(一)-薄荷酮、薄荷脑和桂皮醛的含量。
方法：采用HP-INNOWAX毛细管柱 (Crosslinked Polyethylene Glycol，0.25μm×0.25 mm×30m)，GC-MS分离鉴定保心安油10种成分，3种成分的含量采用内标法测定，用HP-FFAP毛细管柱(Crosslinked Polyethylene，0.25μm×0.25 mm×30m)，柱温：115℃→155℃→230℃（4min），分流进样，分流比40：1；进样口温度：180℃；检测器：FID，温度：250℃。
结果：3种成分均达到良好的分离，(一)-薄荷酮、薄荷脑和桂皮醛线性范围分别为0.83～4.16μg(r=0.9999)，2.52—12.60μg (r=0.9999)，0.20～1.00μg (r=0.9999)；重现性均小于1.5％，平均回收率分别为(一)-薄荷酮：99.18％，RSD=1.4％；薄荷脑：99.92％，RSD= 1.1％；桂皮醛：99.22％，RSD=1.4％。
关键词：保心安油毛细管气相色谱气质联用分离定量(一)-薄荷酮薄荷脑桂皮醛Capilary Column Gas Chromatography Determination of(一)-Menthone，Menthol，Cinnamic Aldehyde in Po Sum On Oil保心安油由薄荷油、肉桂油、细辛、黄芩、血竭等数10味药组成的进口中成药。
具镇痛、驱风、通窍、消肿等功效，主治伤风鼻塞、感冒头痛、蚊叮虫咬、跌打损伤、肠胃不适等症。
本文采用HP-INNOWAX毛细管柱GC-MS分离、鉴定该制剂10种主要活性成分，用FFAP毛细管柱内标法测定了(一)-薄荷酮、薄荷脑和桂皮醛的含量。
本法快速，准确，可靠。
1 仪器与材料气相色谱／质谱系统HP-5973；气相色谱仪HP- 6890型；色谱工作站：HP-Chemstation；毛细管色谱柱：HP-INNOWAX(Crosslinked Polyethylene Glyco1)，0.25μm×0.25mm ×30m；HP-FFAP(Crosslinked Polyethylene)，0.25μm×0.25mm×30m；HP-5(Crosslinked 5％PH ME Siloxane)，0.25μm×0.25mm×30m；对照品：(一)-薄荷酮，Aldrich Chemical Company，Inc．；(一)-薄荷脑、桂皮醛、萘(内标物)均为美国Sigma公司产品。
所用试剂均为分析纯。
2 实验部分2． 1 GC-MS鉴定油中主要化学成分 GC-MS色谱条件：GC-MS接口温度280℃；载气：氦气；分流比：10：1；色谱柱：HP-INNOWAX(Crosslinked Polyethylene Glycol，0.25μm ×0.25mmx30m)；柱温：60℃(通过3℃/min)→110℃(2min) (通过3℃/min) →150℃(1min) (通过100℃/min)→ 230℃(1 min)；MS条件：离子源温度300℃，电子能量7OeV，倍增电压1.6kV，扫描速度：1s／dec，检测质荷比范围m／z：40—425，检索谱库DATABASE／NIST98L，对保心安油进行GC-MS分析，结果鉴定1O个主要化学成分。