抗心肌缺血药物的药效学观察
Observating the Effect of Antimyocardial Ischemia Drugs
【目的和原理】掌握建立心肌梗死（myocardial infarction）模型的方法，了解myocardial infarction时ECG、血清酶学等指标的变化。

结扎犬左冠状动脉（left coronary artery）前降支可引起myocardial infarction，结扎冠状动脉后血流动力学（hemodynamics）和心肌代谢的改变与冠心病病人严重心肌缺血（myocardial ischemia）及心肌梗死时有某些相似之处。

且梗死发生快，缺血范围大致固定，并可进行hemodynamics、ECG、组织染色检查和血清酶学指标测定等。

因此，结扎冠状动脉引起的急性心肌梗死模型可用于antimyocardial ischemia drugs的筛选或药效学观察。

【实验动物】 杂种犬，体重13～15kg，雌雄不限。

【实验器材和药品】 RM-6000四道生理记录仪， MFV-3200电磁流量计、生化分析仪、血液粘度计、手术台、手术灯、常规手术器械、注射器、脱脂棉球、台秤、自动离心机、电动呼吸机、恒温水浴箱、电子称、电子天平、吸尘器、开胸器、缝合针、缝合线、寸带。

3%戊巴比妥钠（sodium pentobarbital）、盐酸利多卡因注射液（lidocaine hydrochlorate injection）、0.2%肝素生理盐水、0.5%硝基四氮唑蓝（NBT）或1%氯化三苯基四氮唑（TTC）、saline、测试药盒（AST、CPK、LDH、SOD、MDA）、抗心肌缺血药。

【实验步骤和观察项目】
1.取健康杂种犬，称体重后，用3% sodium pentobarbital溶液（1ml/kg）于犬前肢头静脉注射麻醉。

麻醉后仰位固定于手术台，于颈部正中、左前胸、右腹股沟等处剪毛。

2. 气管插管（trachea cannula）：颈部正中切开皮肤，用止血钳钝性分离出气管， 在气管上剪倒T型开口行气管插管并固定。

开胸时连接电动呼吸机，呼吸量在2～4kPa，呼吸频率20～30次/分。

3. 股动、静脉插管：在腹股沟附近分离双侧股动脉，一侧股动脉插管以备在各时间点放血。

另一侧股动脉进行心室内插管（需在开胸术后）；行股静脉插管建立静脉输液通路，以备静脉补液或静脉给药。

4.开胸术：沿左侧第4肋间切开皮肤，分离出第4肋骨剪掉。

用开胸器牵拉肋骨，暴露心脏，提起心包膜，沿膈神经走行剪开心包膜造心包床；分离主动脉根部，放置适宜直径的电磁流量计卡式探头，测量主动脉流量；分离冠状动脉前降支下部、中部以备结扎；将针式电极插入四肢皮下，测量心电图（标Ⅱ导联）
5.心室内插管：预先估计由股动脉到左心室的距离，然后进行心室内插管。

6.复制心肌缺血模型 预先静脉给予lidocaine hydrochlorate injection 2～4ml/只，预防心律失常的发生。

然后依次结扎冠状动脉前降支下部和中部，相隔时间为5～10min。

结扎后20min开始给药。

记录结扎前，结扎后、给药0、10、30、60、90、120、180、240、360min心电图、动脉压、心室内压、左室舒张末压、±dp/dt的变化。

7.对照及治疗 将3只犬分为3组，分别为空白对照组，给saline；治疗组给予抗心肌缺血药；阳性药组给予川芎嗪（ligustrazine）。

给药容积均为6.2ml/kg，缓慢静滴。

8. 需观察的各项指标
（1）主动脉流量（aorta flow） 记录时间为冠状动脉结扎前，结扎后10、20、30、60、90、120、180、240、360min。

（2）ECG 一般在结扎后2h ，ECG显示ST段出现升高或降低，T波低平或倒置。

（3）Hemodynamics测定 分别于结扎前，结扎后1、3、6h取动脉血（4.5ml动脉血+1% heparin 0.5ml），测定全血粘度、血浆粘度和RBC压积。

（4）梗死面积的测量
①实验后将心脏取下，用saline将心脏内残血洗净，并剔除血管、脂肪等非心肌组织，用吸水纸吸去水分，称全心湿重。

②沿冠状沟切除心房，留下心室，称心室重。

顺房室沟从心尖到心基部平行将犬心室切成0.3～0.5cm厚的心肌片，用saline冲洗干净。

③将心肌片放于0.05%NBT或1%TTC溶液中，在37℃下温孵10min使之染色， 染色过程中不断摇动染色液使之与心肌充分接触。

染色后立即用水冲洗掉多余的染料。

梗死区不着色，非梗死区被NBT染为蓝色，被TTC染为红色。

④剪去各心肌片被染色的非梗死区心肌，将未被染色的梗死心肌称重，计算梗死区心肌重量与全心重或心室重的百分比。

也可以用面积法求出心肌梗死面积占心室面积的百分比。

（5）血清酶学的测量
分别在冠状动脉结扎前和结扎后1h、3h、6h取动脉血10ml，2500rpm离心10min，吸取上清进行酶学检测，包括肌酸磷酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、天冬氨酸转氨酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）等。

【注意事项】
1.用3% sodium pentobarbital溶液麻醉犬时，前2/3药液推注速度稍快，后1/3药液缓
慢推注。

2.开胸术前，由第12肋向上记数肋骨至第4肋，反复核对，并在第4肋上作标记。

3.开胸前，将呼吸机各参数调好备用，一旦将胸膜腔打开，立即将气管插管与呼吸机
相连。

4.每次由动、静脉放血时，需将插管前端含heparin的血液弃去不用。

5.每次由动、静脉放血后，将插管内打入少量heparin（0.2-0.3ml），目的是防止血
液在插管中凝固，但heparin一定不要过量，以免影响血液流变学各指标的测定结
果。

6.为了防止手术中犬过量失血，采用电烙铁切割皮肤和肌肉组织等，使用电烙铁者务
必小心，一方面不要伤及周围同学，另一方面注意仪器的导线和地面，每次使用后放于固定处。

7.使用RM-6000四道生理记录仪记录ECG时，注意不要碰肢体导联的心电电极，以免
损坏记录笔。

【思考题】
Antimyocardial ischemia drugs的作用机制是什么？
(李晶、刘芬、赵丽娟、刘洁)。