・５０・垦竖垫墼堕堂垄查！！！！生！旦箜！！鲞箜！塑丛』！坐！！型！』竺！！！型垫！！！ｙ堕：！！：垒坠！・临床研究・流式细胞术检测体液Ｔ淋巴细胞亚群的临床应用莫扬１，许小东２（华中科技大学同济医学院附属裹樊医院检验科，湖北襄樊４４１０２１；２．卫生部北京医院流式细胞仪室１００７３０）【摘要】目的探讨胸水、腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群的榆测方法及临床价值。
方法采用流式细胞术检测良、恶性疾病患者的５０例胸水、４６例腹水、４７例肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中Ｔ淋巴细胞亚群的水平并分组进行比较。
结果１）胸水：结核性胸膜炎组胸水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（２７．３６±６．４１）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６７．９８±７．４１）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为２．６０±０．６４，肺部恶性肿瘤组胸水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６７．９７士４．２０）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３７．６１±４．８０）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．４７－４－０．１０，与结核性胸膜炎组比较，恶性组Ｔｈ、Ｔｈ／Ｔｓ比值显著Ｆ降（Ｐ＜０．０１）而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜０．０１）；２）肺泡灌洗液：肺良性疾病组肺泡灌洗液Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（４４．５４－４－９．５６）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（４９．２８－＋４－１２．８８）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为１．１３±０．２９，肺部恶性肿瘤组肺泡灌洗液Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６５．１１±７．７７）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３４．５７±６．６５）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．５４－４－０．１９，与良性病变组比较，恶性组Ｔｈ卜．降（Ｐ＜ｏ．０５），Ｔｈ／Ｔｓ比值显著卜．降（Ｐ＜０．０１），而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜０．０１）。
３）腹水：结核性腹膜炎组腹水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３３．１１±３．３４）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６６．６９±３．７８）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为２．０３士０．２８，恶性组腹水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（５６．６４±９．３４）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３５．８６士３．３０）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．６５±０．１０，与结核性腹膜炎组比较，恶性组Ｔｈ、Ｔｈ／Ｔｓ比值显著Ｆ降（Ｐ＜０．０１），而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜ｏ．０１）。
结论胸腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群检测可用于分析性质并有助于评估患者局部免疫功能状态。
【关键词】支气管肺泡灌洗液；流式细胞术；Ｔ淋巴细胞哑群中图分类号：Ｒ４４６．６１文献标识码：Ａ文章编号：１６７３—４１３０（２０１０）０１—００５０—０２ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎｆｌｕｉｄｏｆｔｈｅｐａｔｉｅｎｔｓｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙＭＯＹａｎｋｌ，ＸＵＸｉａｏ－ｄｏｎｇ２（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＡｆＪ’ｉｌｉａｔｅｄｘｉａｎｇＪａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴＤ竹ｇＪｉＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉａｎｇｆａｎ，Ｈｕｂｅｉ４４１０２１，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｆｌｏｗｅｙｔｏｍｅｔｒｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎｂｏｄｙｆｌｕｉｄｏｆｔｈｅｐａ—ｔｉｅｎｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＩｎｏｖｄｅｒｔｏｇｅｔＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｂｙ３－ｃｏｌｏｕｒｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｕｔｉｌｉｚｉｎｇＳＳＣ／ＣＤ３Ｐｅｒｃｐａｎｔｉｂｏｄｙ，４７ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄａｎｄ５０ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｅｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ１）ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（６７．９８±７．４１）％，Ｔｓ（２７．３６士６．４１）％ａｎｄＴｈ／Ｔｓ（２．６０±０．６４）ｉｎＢＡＩ。
Ｆｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ。
ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（３７．６１士４．８）％，Ｔｓ（６７．９７±４．２０）％，ａｎｄＴｈ／Ｔｓ（０．４７士０．１０）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ。
ａｎｄｔｈｅＴｈｃｅｌｌｓｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ（Ｐ＜０．０５）。
ａｎｄｔｈｅＴｈ／ＴｓｒａｔｉｏｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｗｈｉｌｅｔｈｅＴｓｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＢＡＬＦｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ（Ｐ＜０．０１），ｅｏｍｐａｒｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ；２）ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（３５．７６＋－７．７１）％ａｎｄＴｓ（６４．３１士７．３７）％ａｎｄＴｈ／Ｔｓ（０．５７土０．１８）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（４９．２７土１２．８８）％，Ｔｓ（４４．５４士９．５６）ｏＡ，ａｎｄＴｈ／Ｔｓｉｓ（１．１３±０．２９）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ．ＴｈｅＴｈｃｅｌｌｓｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅＴｈ／ＴｓｒａｔｉｏｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒａｎｄｔｈｅＴｓｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＢＡＬＦｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ（Ｐ＜０．０１）ｃｏｍｐａｒｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ；３）ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（３５．７６士７．７１）％，Ｔｓｉｓ（６４．３１±７．３７）％ａｎｄＴｈ／Ｔｓａｒｅ（０．５７士０．１８）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（４９．２７土１２．８８）％，Ｔｓｉｓ（４４．５４±９．５６）％，ａｎｄＴｈ／Ｔｓｉｓ（１．１３±０．２９）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ．Ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅＴｈｃｅｌｌｓｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅＴｈ／Ｔｓｒａｔｉｏｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗ—ｅｒａｎｄｔｈｅＴｓｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＢＡＬＦｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ（Ｐ＜０．０１）ｃｏｍｐａｒｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅｂｅｎｉｇｎｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｏｒｄｅｒ．Ｃｏｎ‘ｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｉｍｍｕｎｉｔｙｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ．ＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｉｅａｐｐｒｏａｃｈｉｓｖａｌｕａｂｌｅｉｎａｎａｌｙｚｉｎｇＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎＢＡＩ。
Ｆ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ；Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓ恶性浆膜腔积液确诊的金标准是在积液巾找到肿瘤细胞。
然而在临床上，常有高度怀疑为恶性积液但未能找到肿瘤细胞的情况，从而影响到诊断的最终判断。
笔者通过对患者胸水、腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群的分析判断其性质，为临床恶性积液的诊断提供了一种检测指标，现报道如下。
资料与方法１．标本来源病例为２００６年６月至２００７年１２月在襄樊市巾心医院及卫生部北京医院呼吸科、消化科、肿瘤科住院治疗的相应疾病患者。
１）胸水来源：肺癌２０例（均经病理最终证实），年龄３１～６９岁，男１７例，女３例。
组织学分型：鳞癌１４例。
腺癌４例，小细胞癌２例；结核性胸膜炎３０例，年龄２６～６８岁，男１８例，女１２例。
刷检见结核杆菌（抗酸染色阳性）确诊。
２）肺泡灌洗液来源：肺癌组２５例（男１５例、女１０例），均经病理证实，年龄３９～７１岁；肺部良性疾病组２２例（男１５例、女７例），年龄２８～７０岁，其中肺结核８例、肺炎ｌｌ例、肺结节病３旦堕焦墅垦堂壅查垫！！芏！旦箜！！查箜！塑迪』逊丛笪：』竺坚型垫！！：∑堕！！！№！例。
３）腹水来源：２８例，平均年龄４８岁，其中肝癌１０例、胃癌１１例，结肠癌５例，卵巢癌２例，均经病理最终证实。
２．仪器试剂采用美国ＢＤＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ流式细胞仪，ＣＤ４ＦＩＴＣ／ＣＤ８ＰＥ／ＣＤ３ＰｅｒＣＰ■色荧光抗体及同型对照、红细胞裂解液、荧光校准微球均购自ＢＤ公司。
３．方法１）样晶的制备：肺泡灌洗液经尼龙布过滤去掉杂质和痰液，胸水腹水以肝素抗凝采集，标本以１５００ｒ／ｒａｉｎ离心５ｍｉｎ，弃上清液，ＰＢＳ洗涤。
计数并调节细胞数为２×１０６／ｍＬ／管，加入ｃＤ４ＦＩＴＣ／ＣＤ８ＰＥ／ＣＤ３ＰｅｒＣＰ荧光抗体２０弘Ｌ，窀温避光孵育２０ｍｉｎ，加１：９配制的红细胞裂解液２ｍＩ。
，避光１０ｍｉｎ，１５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃上清液，ＰＢＳ缓冲液２ｍＩ．离心洗涤，０．５ｍＬＰＢＳ缓冲液重悬细胞。
同时另一管做同型对照。
２）流式细胞仪测定：以荧光微球ｃａｌｉｂｒｉｔｅ３－ｃｏｌｏｕｒ校准仪器光路使其分辨率达到最佳工作状态，采用ｃｅｌｌｑｕｅｓｔＰｒｏ软件获取与分析数据。
调节电压、阈值、补偿使细胞在图中分布在合适的位置，在ＦＳＣ／ＳＳＣ图中圈出淋巴细胞群为（Ｒ１），ＳＳＣ／ＣＤ３图中以ＣＤ３＋细胞群圈『Ｊ（Ｒ２）以排除巨噬细胞、碎片及其他成分的干扰，建立ＣＤ４／ＣＤ３、ＣＤ８／ＣＤ３散点图并设置为显示Ｇ３＝ＲＩ×Ｒ２门内的细胞，获取细胞总数１００００个，根据Ｉ司型对照设十字门分析Ｔｈ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋）和Ｔｓ（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）的表达情况。
同时计算出Ｔｈ／Ｔｓ比值。
３）统计分析：两组数据统计以孑－４－＿ｓ表示，应用Ｅｘｃｅｌ统计软件进行统计学分析，两组间比较采用￡检验，Ｐ＜ｏ．０５为差异有统计学意义。
结果１．结核性胸膜炎与肺癌患者胸水Ｔ淋巴细胞亚群比较，见表１。
肺癌组与结核性胸膜炎组相比Ｔｈ显著减少（Ｐ＜０．０１），Ｔｓ显著增高（Ｐ＜０．０１），Ｔｈ／Ｔｓ比值显著减低（Ｐ＜０．０１）。
表１胸水Ｔ淋巴细胞亚群在结核胸膜炎及肺炎患者的表达注：与结核性胸膜炎组比较。