2、实验操作
空白样操作步骤及要求：

①取2.5ml缓冲溶液加入试管中（记录）。 ②分别加入0.1ml酶液（记录），0.1ml显色剂（记录） 至试管中。 ③摇匀后于37℃放置15min（计时）。 ④加入0.1ml底物（记录）至试管中摇匀，此时检液起 显色反应，应立即放入仪器比色池中检测。 ⑤注意比色皿光面毛面的放置方向。按对照检测键， 3min后记录空白样的△AC值。
有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由 此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类 农药的存在。
2、酶抑制率法（分光光度法）
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆 碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度 呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物 （乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生 黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间 的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样 品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
农药残留快速测定技术
江阴市农产品质量检测中心 2013年5月
滥用“神农丹”种姜
2012年
2011年
2010年Βιβλιοθήκη 残快速测定方法及仪器介绍
一、农药残留简述
二、快速检测方法及相关仪器 三、农残速测仪介绍
一、农药残留简述
1、农药残留相关名词

农药分类
无机化合物（目前使用
较多的品种有硫悬浮剂、 波尔多液等。）
5、韭菜、生姜、葱、蒜、辣椒等刺激性气味蔬菜中，含 有对酶活性有影响的物质，容易产生假阳性。处理这 类样品时，可采取整株蔬菜浸泡。
6、避免交叉污染，每次取不同的样品，清洗采样器具。 7、先做对照检测，再做样品检测。对照样品吸光度值 △AC应该在如下区间：实验室温度在25 °C以上时在 0.3－0.8之间；实验室温度在10 °C以下时在0.2－ 0.8之间）。空白的作用除了对照作用之外，还可以判 断试剂是否失效，如果加入底物的时候比色皿中液体 立刻变成深黄，或者加入底物之后试剂不变黄，说明 试剂已经失效。
祝 工作愉快
身体健康
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3、结果的判定
结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。
当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，样品为 阳性结果农药残留超标。抑制率在50%左右为可疑样品， 超标样品、可疑样品需要重复检验2次以上。
4、注意事项
1、仪器开机之后最好预热10分钟以上。开机、关机之间 间隔1分钟以上。 2、配试剂需按照说明进行操作。 3、实验要求的蒸馏水可以用纯净水代替，但是不能用矿 泉水，天然饮用水。 4、酶液、显色剂与底物切忌长时间室温下放置，用后应 立即放入冷藏室内（0-4℃）。 5、提取液可以放置常温下保存。（从冰箱中拿出的酶液 要等他恢复到室温才能使用，不然会导致酶的活性不 够，酶的活性最适温度37摄氏度）。
I ——— 抑制率 A0 ——— 对照的吸光度值 At ——— 样品溶液的吸光度值
（三） GB/T 5009.199-2003方法介绍
1、配试剂 缓冲液、酶试剂、显色剂、底物均按照仪器自带 的使用说明书的要求配制而成（所用水为蒸馏水或纯 净水）。除缓冲溶液可常温放置，其他试剂配置后必 须0-4℃避光保存，使用前冷却至室温，保存期不宜过 长，一般现配先用。


样品样的操作步骤及要求：
取样步骤及要求： ①称取菜样1g〔要求一种菜样要从不同植株取样，从叶片 部位取（果实蔬菜用刀顺皮削下），剪成1cm左右见方碎 片，混匀后用镊子称取1g（记录），放入烧杯或提取瓶中 （编号）〕。

②取5ml缓冲溶液加入编好号的样品瓶中（记录）。
③用手或借助仪器振荡1-2min（计时）。
目前使用的快速检测仪器
仪器原理：酶抑制率法（分光光度法）
使用此方法的仪器有： 深圳安鑫宝WT系列农药残留速仪 长春吉大· 小天鹅GDYN-110SB农残速测仪 上海博纳CL-BIII八通道残留农药测定仪 等 特点：
精确度高、稳定性强
易于操作
三、农残速测仪介绍
（一）原理
农药对胆碱酯酶（检测试剂）的活性有抑制作用，这样 就抑制了胆碱酯酶催化显色剂水解发生显色反应，通过 对显色反应的测定来实现农药残留量的测量。由此可判 定果品蔬菜样品中的残留农药的含量。 正常情况：
有机氯类 有机磷类
矿物源农药
拟除虫菊酯类
氨基甲酸酯类 杂环类化合物
化学合成农药
有机合成化合物
动物源农药（如动物毒素、 昆虫性引诱剂等）
生物源农药
植物源农药（如植物内源激 素、植物源昆虫激素等 ） 微生物源农药（井冈霉素、 白僵菌、苏云金杆菌等）
其它（苯氧羧 酸类、脲类化 合物）




农药残留：农药使用后残存在生物体、农副产品 和环境中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物 和杂质的总称。以mg/kg、ug/kg、ng/kg表示。 农药残留的危害：农药若大量残留在农副产品表 面会引起人的神经传导阻碍、神经麻痹甚至引起 死亡。 最大残留限量：在农副产品中农药残留的法定最 高允许浓度，又称最高残留限量，以每千克农副 产品中农药残留的毫克数（毫克/千克）表示。 我国违禁农药：666DDT、毒鼠强、甲胺磷、甲基 对硫磷、对硫磷、久效磷、磷胺等高毒农药全面 禁止使用
2、国家农药残留速测检测标准

NY/T 448-2001 蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类 农药残毒快速检测方法 GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲 酸酯类农药残留量的快速检测

二、快速检测方法及相关仪器
1、速测卡法（纸片法）
胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与
靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶
底物+胆碱酯酶---水解→胆碱
胆碱+显色剂 →→→黄色溶液
（二）抑制率计算方法
通过测定果蔬中的残留农药使乙酰胆碱酯酶活性 变化的程度来测定样品果蔬中的此类残留农药毒性， 仪器测定的残留农药大小用“抑制率”来表示。抑制 率是农药对酶抑制程度的显示指标，其计算方式为:
I = ((A0-At)/A0)×100％
④振荡完成后静置3-5min（计时）。

⑤试管中加入2.5ml样品提取液。 ⑥再分别加入0.1ml（100ul）酶液，0.1ml显色剂至 各样品样的试管中。


⑦摇匀后于37℃放置15min（计时）。
⑧各样品样中加入0.1ml底物摇匀。 ⑨最后将每个试管中的样品液倒入比色皿中，迅速 放入仪器中，按样品检测键，3min后记录实验结果。