试验方法：规定的范围内，至少用九次测 定结果评价，如制备高，中，低三个不同浓度 样品各测三次。
准确度
试验方法（中药） 同一样品，制备相同浓度的6份供试品（样品 取样量减半，以1：1比例加入对照品） 同一样品，制备三个浓度的供试品，每个浓度 分别制备三份供试液，对照品的加入方式有三 种方式。
对照品的加入方式
系统适用性试验参数的设置需根据被验证 方法类型而定。
系统适用性试验
含量测定方法可接受的标准 主峰的峰面积的相对标准差应不大于2.0%，主 峰保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另 外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂 质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应 符合质量标准的规定。
方法在验证
目测法（直观评价，非仪器分析） 用已知浓度的被测物，试验出能被可靠的检测出符合准确度
和精密度要求的最低浓度或量 信噪比法 一般以信噪比（S/N）为10：1时相应的浓度或注入仪器的量进
行确定。
检测线和定量限试验时应注意
A： 应以实验中得到的浓度分析，而不能靠推 算。 B:应以定量浓度限为依据确定对照溶液浓度 （一般扩大20—50倍）
准确度
定量方法 测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用回收
率%表示。 原料药
已知纯度的对照品或供试品 已知准确度的另一种方法比较 制剂 配置回收试验法 加样回收试验法 已知准确度的另一方法比较 杂质
准确度
对于中药 a. 以经典方法的测定值作为真值，建立方法的
测定数据与之比较（该法适用于化学单体药物） b. 以加入对照品测定的回收率表示，一般有空
白回收（制剂空白）和加样回收的测定方法（中药 材，复方制剂等）
准确度
回收试验：测定值（M），空白，已知量A 的 对照品测定
M-空白
回收率：R= A 100% 加样回收试验：测定值（M），背景值（P）
，已知量的加入的对照品（或标准品）的值
（A） 回收率：R= M-P （M,P为均值） A
100%
准确度
范围
范围是指达到一定精密度，准确度和线性条件下，测 试方法是用的高，低限量浓度或量的区间。
范围应根据分析方法的具体应用和线性，准确度，精 密度结果和要求确定。
原料药和制剂含量测定范围为80%-120% 制剂含量均匀度范围为70%-130% 杂质测定应为被测杂质限度的-20%到+20% 溶出度应为测定范围的-20%到+20%，释放度因规定
专属性
含量测定和杂志测定
色谱法和其他方法：附带表性图谱说明专属性 表明各组分的位置，分离度是否符合要求 杂质或辅料可获得的情况下，试样中可加入杂志或辅料，考察测
试结果是否受干扰 对于杂质测定也可相试样中加入一定量的杂质，考察杂质间是否
得到分离
色谱峰纯度试验（二极管阵列，其他检测器，质 谱）
专属性
破坏性试验
高温，高湿，光照，酸破坏，碱破坏，氧化破坏
注意观察降解产物生成情况，分离度是否符合 要求
注意掌握破坏条件，应使主成分峰保留大约 90%
检测限
在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度 或含量
目视法（直观评价，非仪器分析） 可用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法，用已知浓度的被
质，无机杂质。 限度检查 定量检查
需要验证的检测项目
限度检查 各种无机离子检查等
定量检查 定量测定： 干燥失重，水分，有关物质， 残留溶剂及其他特定检测项目 等。
需要验证的检测项目
3.含量测定 除主成分外，也包括检查项下的防腐剂，溶
出度等的含量测定等。
验证内容
准确度 精密度（重复性，中检精密度和重现性） 专属性 检测线（LOD） 定量限（LOQ） 线性 范围 耐用性
专属性
通常是通过分析含有加了杂质，降解产物，有 关化学物质或安慰剂成分的样品，将所获的分 析结果与未加前述成分之样品的测试结果进行 比较，两组测试结果只差即为专属性。
专属性
鉴别反应 应能与可能共存的物质或结构相似化合物区别 不含被分析的样品，以及结构相似或组分 中的有关化合物均应呈负反应
中间精密度：同一实验室，不同时间有不同的分析人 员用不同设备所得结果的精密度（三人三机）
重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果的精密 度。以SD，RSD表示。
专属性
专属性只有其他成分（杂质，降解物，辅 料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定 出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时 对供试液准确而专属的测定能力，是指该法用 于复杂样品分析时是否受相互干扰程度的度量。
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检测限
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定量限
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线性
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范围
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耐用性
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分析方法验证注意要点
空白样 空白样是指根据样品的特性，配方和工艺
过程，制备除了不含被测物外其他组成与样品 完全一致的模拟样品 预验证
预验证是指在正式验证前进行的试验，目 的是收集证据，已初步证实该检验方法可达到 预期要求，同时确定各个项目单位可接受标准。
了限度范围，应为下限的-20%到上线的+20%，例如 缓释片1h<20%，7h>70%，则验证范围定为0-90%
耐用性
耐用性又称粗放度，是指测试条件稍有变动时，结果 不受影响的承受程度。失衡连试验室和工作人员之间 的正常情况下试验结果重现性的尺度，如方法易受分 析条件的影响，或要求苛刻，应注明
取相同量样品9份（一般为样品取样量的一半），设计三个浓度， 按不同比例加入对照品。中间浓度一般按1；1比例加入，低，高 浓度可选0.5：1，1.5：1的比例，加入对照品的量要适当，保证 供试品溶液的浓度（或量）在考察的线性范围内。
取3种不同量的样品个三份，每个取样量分别按1：1比例加入对 照品，中间浓度已选定正常浓度，其他两个浓度可以结合范围测 定项目选择低，高浓度。
含量测定方法验证的可接受标准
准确度 各浓度下的平均回收率应在98.0%-102.0%之间，9个回收率
数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。 中药一般应满足以下规定：回收率计算值在95%-105%范围，
相对标准偏差（RSD%）薄层扫描法<5%
精密度 1.重复性：6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0% 2.中间精密度：相对标准差应不大于2.0%
含量测定方法验证的可接受标准
专属性 空白对照应无干扰，主成分与各有关物质
应能完全分离，分离度不得小于2.0 检测限

定量限
含量测定方法验证的可接受标准
线性 回归线的相关系数（R）不得小于0.998，Y轴 截距应在100%响应值的2%以内，响应因子的 相对标准差应不大于2.0%。
耐用性 主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰的杂质峰 必须达到基线分离，各条件下的含量数据 （n=6）的相对标准差应不大于2.0%
方法验证的目的 目的是判断采用的分析方法是否科学，合
理，是否有效控制产品的内在质量。
需要验证的检测项目
1.鉴别 目的在与判定被分析物是目标化合物而非
其他物质。 共存，相似的化合物要分开。要考察其他
成分和辅料的干扰，空白试验一定要成阴性。
需要验证的检测项目
2.杂质检查 主要用于控制住成分以外的杂质，如有机杂
化学分析方法验证
化学分许方法验证成功的前提
能够研究建立一个有水准的分析方法的能力 有化学分析方法验证的知识和水平
化学分许方法验证成功的前提
有水平，经过培训的实施人员 仪器性能已经得到确认（校准，验证，校准在
有效期内） 可靠的对照品（法定机构提供的或有水平自己
建立的） 质量可靠的实验试剂
存在问题
主要表现在： 方法设计不科学 方法没有充分的研究，优化 验证的目的性不明确，验证不充分 实验过程不规范，验证通不过的处理方法错误 验证数据不合理 忽视方法在验证
什么时候分析方法需验证
符合下列情形之一的，应对检验方法进行验证： 1.建立或采用新的检验方法 2.分析对象或检验方法变更了 3.采用中国药典未收载的检验方法 4.法规规定的其他需要验证的检验方法
线性
线性是指再设计范围内，测试结果与试样中被 测物浓度直接呈正比例关系的程度。
线性应在分析需要的范围内进行评价 一般以最小二乘法处理数据求的回归曲线的斜
率来表示，必要时可对响应信号进行数字转换。 数据要求：至少需要五个浓度考察线性，需提
供相关系数，Y截距，应列出回归方程数和线 性图。
什么时候分析方法需验证（续）
对不需要进行验证的的检验方法，应进行方法 确认，以保证检验数据准确可靠。
2005版药典中分析方法验证指导原则（附录 XIX A）只规定了项目和基本方法而没有合格 标准，ICH和USP类似。
方法学验证
对分析方法的科学性，准确性和可行性进行验 证，充分表明分析方法符合测试项目的目的和求。
分析方法的确认
方法确认是一种简化了的方法验证，目的 是为了确认药典方法或其它已经验证的方法是 否适用于实际使用的环境。 各国药典和行业法规收载的检验方法 从外部引入的已经检验的检验方法 以往老产品的检验方法，原厂无力或无法进行 方法传递。