成人呼吸道感染病毒病原学检测摘要: 目的了解哈尔滨医科大学附属第二医院成人呼吸道病毒感染的流行特征。
方法采用直接免疫荧光法（DIF），对2007年4月-2008年6月住院的399名16-87岁呼吸道疾病患者痰标本进行七种病毒检测。
结果399例患者中病毒检测阳性者54例，病毒总体阳性率13.53％。
首位病毒为呼吸道合胞病毒29例（7.27％）和流感病毒A型27例（6.77％），其次为副流感病毒3型17例（4.26％）、副流感病毒1型13例（3.26％）、腺病毒5例（1.25％）、流感病毒B型2例（0.50％）和副流感病毒2型2例（0.50％），混合感染22例（5.51％）。
64-87岁年龄组病毒检出率最高（18.12％），32-47岁年龄组病毒检出率最低（6.94％）。
肺炎、支气管炎、支气管扩张、哮喘、慢性阻塞性肺疾病（COPD）均有病毒检出，其中以COPD检出率最高（16.67％），其次是哮喘（15.38％）。
结论病毒在成人呼吸道感染中占有重要的地位，感染主要集中在48-87岁年龄阶段（15.38％），COPD 和哮喘病毒感染率最高，以呼吸道合胞病毒和流感病毒A型最为常见。
关键词呼吸道病毒感染；成人Abstract: Objective To understand the epidemiologic feature of respiratory tract viral infection in the adults of Harbin Medical University The Second Affiliated Hospital.Methods From April 2007 to June 2008, a total of 399 hospitalized adults were studied.Sputum were screened for virus by direct immunofluorescent (DIF) assay.Results Virus was identified in 54 patients ( 13.53%) .The most prevalent was respiratory syncytial viruses (RSV) (29, 7.27%) , followed by influenza A (27,6.77%) , parainfluenza 3(17,4.26%) , parainfluenza 1(13,3.26%) , adenovirus (5,1.25 %) ，influenza B (2, 0.50 %) , parainfluenza 2 (2, 0.50%) , and mixed viral infection(22, 5.51%).The highest virus detection rate (18.12%) occur in adults between 64 and 87 years, virus detection rate of the lowest (6.94%) exist in37-47-year-old.Pneumonia, bronchitis, bronchiectasis, asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD) have detected the virus, with the highest detection rate of COPD (16.67%), followed by asthma (15.38%).Conclusions Viruses still play an important role in respiratory tract infections in adults and was concentrated in the48-87 age group(15.38%), the infection rate of COPD and asthma was the highest. Respiratory syncytial virus and influenza A virus was the most common types.Key words Respiratory tract viral infection;Adults材料和方法1.研究对象2007年4月-2008年6月随机选择哈尔滨医科大学附属二院呼吸科住院病人399例。
其中年龄16岁-87岁，男性214例，女性185例。
2.设备及试剂荧光显微镜（TS100），离心机（TGL20LM），漩涡混合器（XH-B），37℃培养箱（SKP-02.500），直接免疫荧光试剂盒（3137，chemicon）。
3.病毒抗原检测标本收集和处理由专职护士将塑料导管经鼻腔插入7-8cm达到咽部以下诱导吸取1-2ml分泌物于10ml无菌离心管中[1]，-40℃冻存。
实验时取出标本，向离心管中加入4-8ml冷PBS,4℃放置3-4个小时，用漩涡混合器震荡3-5分钟后，标本液转移入1.5mlEP管中，1000-6000r/min离心5-10分钟，弃去上清液，如果有粘液也一并弃去。
沉淀物再加入1ml冷PBS震荡3-5分钟，1000-6000r/min离心5-10分钟，再次弃去上清液。
沉淀物中加入适量PBS，调节细胞浓度到含纤毛柱状上皮细胞1.0×106/ml。
细胞片制备微量加样器吸取上述纤毛柱状上皮细胞悬液20ul，点于预先用4℃丙酮浸泡过的载玻片上。
室温下空气干燥后4℃丙酮浸泡固定10分钟。
3.3 免疫荧光染色用Chemicon直接免疫荧光试剂盒对所有标本进行直接免疫荧光检测。
筛查试剂中含有7种混合单克隆抗体,即腺病毒（ADV）、流感病毒A(IFVA)、B型(IFVB)、副流感病毒1、2、3型(PIV1、2、3)及呼吸道合胞病毒(RSV)单克隆抗体。
当筛查试验为阳性时,再用单一特异性单克隆抗体对标本进行鉴定检测。
按试剂盒说明一滴混合单克隆抗体或单一单克隆抗体置于标本上,37 ℃孵育，筛查为15分钟，鉴定为30分钟后,用PBS 洗片3次，每次3-5分钟，风干后封片。
封片剂由试剂盒提供。
在荧光显微镜下观察。
所有标本均涂两张载玻片，一张上面涂一个样点用于筛查,另一张载玻片上面涂七个样点，如筛查为阳性,则用涂有七个样点的载玻片进行鉴定实验。
3.4 阳性结果判定及对照设定荧光显微镜下读片，放大倍数为200倍。
如果样点中含有>=20个细胞,则认为此片是可以评价的。
筛查实验阳性：在荧光显微镜200倍视野下有>=2个柱状纤毛细胞呈明亮黄绿色荧光即为筛查实验阳性，否则为阴性。
鉴定实验阳性：在荧光显微镜下呼吸道合胞病毒及副流感病毒显示细胞浆染色,流感病毒及腺病毒为核染色或细胞浆内染色，否则为阴性。
由试剂盒提供阳性及阴性对照片作对照。
4.数据处理采用SPSS统计软件进行数据处理。
结果1.呼吸道病毒种类分布399例入选病人中病毒检测阳性者54例，男27例，女27例，病毒感染率13.53％。
其中腺病毒感染5例（1.25％），呼吸道合胞病毒感染29例（7.27％），流感病毒A型感染27例（6.77％），流感病毒B型感染2例（0.50％），副流感病毒1型感染13例（3.26％），副流感病毒2型感染2例（0.50％），副流感病毒3型感染17例（4.26％），混合感染22例（5.51％）。
2.病毒检出率与年龄的关系表1 呼吸道病毒检出率与年龄的关系年龄组例数检出数检出率（％） ADV RSV IFVA IFVB PIV1 PIV2 PIV3 混合感染16-23 22 3 13.64 1 2 2 0 0 0 0 124-31 19 2 10.53 0 2 1 0 1 0 1 232-39 27 2 7.41 0 2 0 0 1 0 0 140-47 45 3 6.67 0 1 1 0 0 0 2 148-55 52 7 13.46 1 4 5 0 1 0 1 356-63 96 12 12.50 2 5 7 0 3 0 2 464-71 70 16 22.86 1 8 8 0 5 0 7 771-79 48 4 8.33 0 2 0 0 0 1 1 080-87 20 5 25.00 0 3 3 2 2 1 3 33.呼吸道病毒种类的季节分布表2 呼吸道病毒的年份、季节分布季节例数检出数检出率（％） ADV RSV IFVA IFVB PIV1 PIV2 PIV3 混合感染07春季 33 2 6.06 0 2 1 0 0 0 0 107夏季 91 20 21.98 0 10 11 0 5 0 2 707秋季 99 11 11.11 2 6 4 0 3 1 3 307冬季 73 8 10.96 1 5 5 0 2 0 4 508春季 93 13 13.98 2 6 6 2 3 1 8 608夏季 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 04.不同疾病的病毒检出情况表3 几种常见疾病的病毒检出情况常见疾病例数检出数检出率（％） ADV RSV IFVA IFVB PIV1 PIV2 PIV3 混合上呼吸道感染 4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 肺炎 117 12 10.26 1 7 7 1 4 0 5 5 支气管炎 38 5 13.16 0 5 1 0 2 0 1 2 支气管扩张 35 3 8.57 1 1 2 0 0 0 1 1 哮喘 13 2 15.38 1 0 2 0 0 0 1 1 COPD 60 10 16.67 1 4 4 1 0 2 2 2 5.混合感染检出情况表4 七种病毒的混合感染情况例数 ADV RSV IFVA IFVB PIV1 PIV2 PIV3单独感染 1 14 9 0 2 1 5混合感染 4 15 18 2 11 1 12总数 5 29 27 2 13 2 17讨论直接免疫荧光技术检测病毒的抗原快速而准确，与间接免疫荧光相比，减少了非特异性反应而提高了特异性。
Chemicon呼吸道病毒的诊断方法经过WHO3个参考中心审评，结果可靠。
本文采用直接免疫荧光法检测痰标本中的病毒抗原，399例病人中，病毒检出率为13.53％，已有报道RSVIgM抗体的测定结果多在8.1％-46.2％，虽然方法不同，但本次结果与该报道接近，且本次研究检测痰标本，易被患者接受。
在所检测的呼吸道病毒中，首位病毒为呼吸道合胞病毒和流感病毒A型，分别占总阳性例数的53.70％和50％，其次为副流感病毒3型、副流感病毒1型、腺病毒、流感病毒B型和副流感病毒2型。