检测方法
一 般 使 用 ELISA或者间接免疫荧光法， 一般使用直接免疫荧光法，几乎没有
有非特异性荧光
非特异性反应，敏感性较差
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• IgM • IgG
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• 机体产生IgM一般需要一周左右的时间，而有免疫缺陷或免疫系 统不健全的个体如儿童，特别是3岁以下的小孩，其产生抗体往 往需要更久，且抗体产生的水平也较低
• 这些病原体变异快，传播广，由于不易形成长期免疫力而难以预 防和控制
流感病毒 副流感病毒病毒 呼吸道合胞病毒 腺病毒
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呼吸道病原体检测
现有的主要方法： • 病毒分离培养 • 抗原检测 • 抗体检测 • 分子生物学方法等
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检测方法的比较
检测方法 病毒分离培养 抗原检测
直接免疫荧光法
优点 特异性高，金标准
简便、快速、灵敏度和特异性均较高 且可用于疾病的早期诊断
缺点 培养条件要求高、灵敏度低，标 本中病原体量少时，易致假阴性。
需要特异性抗体、荧光
灵敏度、特异性较高
对疾病早期诊断没有太大帮助
酶联免疫吸附法
较快速，批量筛查
特异性不高，假阳性多
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呼吸道病原体
• 病毒，包括鼻病毒、冠病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流 感病毒、腺病毒等
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呼吸道病原体
• 支原体、衣原体感染导致的呼吸道感染与其它病原体感染的早期 临床表现类似。可能在2-3天后咳嗽的症状会表现比较突出。在 小于30岁的年轻人中，肺炎支原体是最重要的下呼吸道病原体
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呼吸道感染
• 呼吸道感染是指病 原体感染人体的鼻 腔、咽喉、气管和 支气管等呼吸系统
• 分为上呼吸道感染 和下呼吸道感染
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上呼吸道感染
• 常见急性上呼吸道感染，指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是 呼吸道最常见的一种传染病
• 常见病因为病毒，少数由细菌引起。患者不分年龄、性别、职业 和地区。不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症
分子生物学方法
灵敏度和特异性均很高
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操作繁琐，价格昂贵
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抗体、抗原检测的比较
抗体IgM检测
检测最佳时间 一般在感染一周左右
临床意义
回顾性诊断， 适用于疾病中后期的诊断，
病原体抗原检测
病毒感染出现症状后即可检测出
可用于疾病早期诊断， 对患者的治疗有重要指导意义
检测灵敏度
将包被有不同基质的生物薄片固定在一个反应区中，可同时检测多种抗不同病 原体的抗体
• 据统计，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起 • 一种病原体可引起多种临床症状，同一临床表现可由多种病原体
引起
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呼吸道病原体
• 细菌：细菌引起呼吸道感染的机会比病毒少。一旦感染，症状多 较严重，定位比较明显，如扁桃体炎、中耳炎、鼻窦炎等。由细 菌引起的儿童肺炎往往是流感嗜血杆菌、肺炎链球菌或金黄色葡 萄球菌
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非典型呼吸道病原体
• 是指除肺炎链球菌以外的病原体，包括嗜肺军团菌(LP)、肺炎支 原体(MP) 、肺炎衣原体(CP) 、Q热立克次体(贝纳柯克斯体) 、腺 病毒(ADV) 、呼吸道合胞病毒(RSV) 、流感病毒(IFV)和副流感病毒 (PIV)等
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非典型呼吸道病原体
• 若检测的是IgG，则不能很好地区分既往感染和急性感染
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• 因此，抗原检测的方法对婴幼儿和儿童的呼吸道感染的病因诊断、 鉴别诊断和临床用药指导比抗体法更有优势
• 检测抗体IgM比IgG更有临床意义
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采样
抗原检测
• 拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻腔伸入。 伸入 距离为从耳垂部到鼻尖长度的一半，一般针对两周岁以下儿 童，伸入距离约为拭子绒毛头的长度两倍
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试剂盒组成
组分 载玻片
成分和用途
检测的物理载体，覆有聚四氟乙烯并包被有针对 检测物的特异性抗原，
质控品
吸附剂 羊抗人IgG用来吸附人IgG避免干扰IgM 检测
FITC结合 荧光素标记的抗人免疫球蛋白结合物，和抗原抗 物 体复合物反应，并显色
封闭介质 甘油缓冲液，便于观察
磷酸盐缓 用于洗涤步骤，从反应介质中除去未结合的免疫
冲液(PBS) 球蛋白和结合呼吸物道病原体检测
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实验步骤1
• 样本的稀释：血清标本与PBS按1:1比例稀释 • 稀释后的血清加入吸附剂中，彻底混匀。处理后的血清要离心
10-15分钟除去沉淀，以防干扰检测
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实验步骤2
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结果判断
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阴性结果荧光图谱
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九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测
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检测原理
• 间接免疫荧光法（IFA） 是基于待测样本中的抗 体与吸附在载玻片上的 抗原发生的反应。样本 中存在的特异性抗体和 抗原反应，未与抗原结 合的免疫球蛋白在洗涤 步骤中除去。在下一步 骤中，抗原-抗体复合物 与荧光素标记的抗人球 蛋白反应，用免疫荧光 显微镜观察结果
• 军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光；支原体、腺病毒、甲型 和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色
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阳性结果荧光图谱
• 腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的 1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光；军团菌、 衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对 阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光
• 拭子伸入后要轻轻捻动拭子转3圈。 取样后在一小时之内洗 脱到生理盐水中，12小时内送检
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抗原检测采样
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采样
抗体检测
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抗原检测的劣势
• 采样对结果影响较大 • 非典型感染多为干咳，无痰/少痰 • 阳性率低（标本问题，病毒颗粒小） • 抗原在体内存在时间短
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下呼吸道感染
• 包括急性气管/支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等 • 由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治
应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确 引起感染的病原体以选择有效的抗生素
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呼吸道病原体
• 常见的呼吸道病原体主要有病毒、细菌、支原体、衣原体和立克 次体等