核酸提取方案
一、DNA提取
1.向离心管中加入200μl样品, 200μl消化液,涡旋震荡15秒
2.加入蛋白酶K 10μl混匀(RnaseA根据需要决定是否添加)
3.56℃孵育15分钟,短暂离心,将管壁上的溶液收集到管底
4.加入250 μl无水乙醇,涡旋震荡15秒,室温放置5分钟,短暂离心,将管壁上的溶液收集到管底
5.将步骤4中所得溶液加入到已装入收集管(RNaseFree Tube 2 ml)的吸附柱(RNaseFree Column RS)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入,8,000 rpm离心1分钟6.向吸附柱中加入500 μl洗液(使用前检查是否已加入无水乙醇),8,000 rpm 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中
7.向吸附柱中加入500 μl无水乙醇,8,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中
8.12,000 rpm(13,400×g)离心3分钟,倒掉收集管中的废液。
将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干
9.将吸附柱置于一个新的收集管(RNaseFree Tube 1.5 ml)中,向吸附柱膜的中间部位悬空加入20-150 μl Buffer RE或灭菌水,室温放置2-5分钟,10,000 rpm离心1分钟,收集核酸溶液
二、RNA提取
1.向离心管中加入200μl样品,加入500μl裂解液,充分混匀,静置3~5min(有杂质离心)
2.将吸附柱套入收集管,样品处理液转入吸附柱中(尽量不要吸到颗粒杂质,以免堵塞柱子),4℃条件下12000rpm,离心1min
3.弃去收集管中液体,加入500μL洗液,4℃条件下12000rpm,离心1min
4.重复步骤3;
5.弃去收集管中液体,瞬离除去残液;
6.将吸附柱转入新的无RNA酶的1.5ml EP管中,向柱中央加入20-30µL洗脱液,室温静置2min溶解RNA, 4℃条件下12000rpm,离心1min,管中液体即为模板RNA。