邻苯三酚自氧化法测定sod活性及含量
一、实验原理:
邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2-，生成带色的中间产物，中间物的积累在滞留30～45s后，与时间成线性关系，一般线性时间维持在4min的范围内，中间物在420nm波长处有强烈光吸收。

当有SOD存在时，由于
它能催化O2-与H+结合生成O
2和H
2
O
2
，从而阻止了中间产物的积累，因此，通过
测定光吸收即可求出SOD的酶活性。

二、实验试剂：
大宝sod蜜、冷丙酮、磷酸缓冲液（PH7.8，0.05mol/L)、氯仿-乙醇混合液、邻苯三酚、浓盐酸、天平、石英砂、研钵、冷冻离心机、50mL离心管 8个、紫外-可见分光光度计、250mL三角瓶8个、玻璃棒8根、试剂瓶250mL 3个、500mL 3个、250mL烧杯16个、试管带胶塞80根、移液管各5根
这个液体貌似是不能研磨的，而且本身就是酶，正常的生物体内的酶不都是可溶的？研磨是为了破碎细胞的。

我觉得应该是通过加水——打碎胶体，把抗氧化剂全都搞到水中（这个拜托查下）——分液——乙醇-氯仿沉淀（用来鉴别是带Mn还是CuZn）（不知道会不会有另外两种抗氧化剂干扰）——透析（去离子电泳用）
乙醇-氯仿的浓度比
酶的保存问题：测一下大宝pH应该可以作为参考，但是这个酶种类太多了，要点就是pH至少不能小于6，关于最适合pH是否也要测量？还是说我们是为了测量大宝里面SOD的活性所以就按照大宝的pH保存。

还有一个小小的想法就是。

这部分是1次做完还是两次做完？
EDTA二钠：几乎不溶于乙醇、乙醚，其水溶液pH值约为5.3。

用于络合金属离子和分离金属。

干扰物，但是没有氧化性
三、实验步骤：
（1）SOD提取：
取大宝sod蜜加入15mL的PH7.8 0.05mol/L的磷酸缓冲液，研磨搅拌20分钟，使SOD充分溶解，6000rpm离心，弃去沉淀，得上清液。

(留出1mL备用，准确量取剩余上清液体积，记录)
（2）除杂蛋白：
提取液加入1/4体积的氯仿-乙醇混合液搅拌10min，6000rpm离心15min去沉淀，得粗酶液。

（取1mL粗酶液备用,精确测量剩余粗酶液体积）
（3）SOD酶的沉淀分离：
剩余的粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min，6000rpm离心15min，得到SOD酶沉淀。

将沉淀先加2mL磷酸缓冲液，溶解后再加3mL混匀。

6000rpm 离心15min，取上清得到SOD酶液。

取1mL备用，其余量取体积。

（4）粗酶液活性测定：
提取液、粗酶液、酶液中SOD活力检测，具体步骤如下。

加入邻苯三酚后迅速混匀，准确计时4min，加一滴浓盐酸停止反应，420nm测吸光值。

（5）溶液中可溶性蛋白含量测定：
分别从1mL备用的提取液、粗酶液、酶液各取0.3mL按以下倍数稀释，260nm/280nm测定吸光值，按公式计算蛋白质浓度。

提取液稀释：50 ×
粗酶液稀释：20 ×
酶液稀释：10 ×
四、实验数据：
五、实验结果及数据处理：
（1）酶活力单位
提取液酶活力单位：=2（OD
1-OD
2
）×5/0.1=
粗酶液活力单位：=2（OD
1-OD
2
）×5/0.1=
酶液活力单位：=2（OD
1-OD
2
）×5/0.1=
（2）总活力
提取液总活力U=活力单位×总体积=
粗酶液总活力=活力单位×总体积=
酶液总活力=活力单位×总体积=
（3）比活力
提取液酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度= 粗酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
（4）纯化倍数
粗酶液纯化倍数=粗酶液比活力/提取液比活力= 酶液纯化倍数=酶液比活力/提取液比活力= （5）回收率
粗酶液回收率=粗酶液总活力/提取液总活力=
酶液回收率=酶液总活力/提取液总活力=。