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高中生物实验:过氧化氢酶活性的测定

高中生物实验:过氧化氢酶活性的测定原理
过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中,能将过氧化氢分解为氧和水,可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。

测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。

用氧电极法测量放氧速度,方法灵敏而快速。

放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。

仪器药品
氧电极仪记录仪
50mmol/L磷酸缓冲液,pH7.0(见附表2)。

50mmol/L过氧化氢溶液:取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。

标准过氧化氢酶溶液:称取过氧化氢酶(Sigma)1.0mg(110U/mg),溶于50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)11ml中,使酶浓度为10U/ml。

仪器的标定
按实验88步骤进行仪器的标定,以求得记录纸上每小格相当的含氧量。

绘制酶活性标准曲线
在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液,开启电磁搅拌器搅动10分钟,插入电极,吸去溢出在电极外面的溶液,调节移位旋钮,使记录笔位于满刻度的10─20%左右,使记录纸走动,1─2分钟后温度达到平衡,记录笔画出直线。

用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶,立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。

根据上述同样步骤,注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(例如浓度为20、30、40、50U/ml等),记录氧释放曲线。

样品测定
在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟,插上电极,待记录为一直线后,注入10μl合适浓度的待测酶液样品,立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。

根据样品的放氧曲线,计算得到每分钟的放氧量,在标准曲线上查得酶活性大小。

如果没有标准的过氧化氢酶,不能计算酶活性单位时,也可以用每分钟的放氧量相对地表示酶的活性大小。

颜色反应、染色类
试剂实验名称发生颜色变化的物质或结构颜色变化或现象斐林试剂检测生物组织中的还原糖还原糖蓝色→棕色→砖红色双缩脲试剂检测生物组织中的蛋白质蛋白质蓝色→紫色苏丹Ⅲ/Ⅳ检测生物组织中的脂肪脂肪橘黄/红色碘液检测生物组织中的淀粉淀粉蓝色甲基绿观察DNA和RNA在细胞中的分布DNA绿色吡罗红观察DNA和RNA 在细胞中的分布RNA红色溴麝香草酚蓝水溶液探究酵母菌的细胞呼吸方式CO2蓝色→绿色→黄色重铬酸钾溶液探究酵母菌的细胞呼吸方式酒精橙色→灰绿色龙胆紫(醋酸洋红溶液)观察根尖分生组织细胞有丝分裂染色体深色健那绿(活性染料)用高倍显微镜观察线粒体
线粒体蓝绿色台盼蓝
死细胞蓝色N-1-萘基乙二胺盐酸盐泡菜制作中测定亚硝酸盐的含量亚硝酸盐(经酸化、重氮化)玫瑰红酚红分离土壤中分解尿素的细菌的检测氨红色刚果红分解纤维素的微生物的分离纤维素红色二苯胺DNA的粗提取与鉴定DNA(水浴加热)变蓝冲洗、漂洗类
实验名称冲洗、漂洗试剂作用检测生物组织中的脂肪体积分数95%的酒精洗去苏丹Ⅲ/Ⅳ的浮色观察DNA和RNA在细胞中的分布蒸馏水洗去盐酸,利于染色观察根尖分生组织细胞有丝分裂清水洗去解离液,防止过度解离低温诱导植物染色体数目变化体积分数95%的酒精洗去卡诺氏液使用酒精的实验
实验名称浓度作用检测生物组织中的脂肪体积分数50%的酒精洗去浮色绿叶中色素的提取和分离无水乙醇溶解并提取绿叶中的色素观察根尖分生组织细胞有丝分裂体积分数95%的酒精与15%的盐酸按1:1比例制成解离液,使组织中的细胞相互分离低温诱导植物染色体数目变化体积分数95%的酒精与15%的盐酸按1:1比例制成解离液,使组织中的细胞相互分离土壤中小动物类群丰富度的研究体积分数70%的酒精保存收集的小动物DNA粗提取与鉴定体积分数95%的酒精(冷却)使DNA析出,与蛋白质分离使用盐酸的实验
实验名称浓度作用观察DNA和RNA在细胞中的分布8%盐酸改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞;使染色质中DNA与蛋白质分离,利于DNA与染色剂的结合影响酶活性的条件5%盐酸设定酸性条件观察根尖分生组织细胞有丝分裂15%盐酸与体积分数为95%
的酒精按1:1比例制成解离液,使组织中的细胞相互分离低温诱导植物染色体数目变化15%盐酸与体积分数为95%的酒精按1:1比例制成解离液,使组织中的细胞相互分离沃泰默、斯他林和贝利斯实验刺激小肠腔引起分泌促胰液素,发现人体中第一种激素:促胰液素使用NaOH溶液的实验
实验名称浓度作用检测生物组织中的还原糖0.1g/mlNaOH形成Cu(OH)2检测生物组织中的蛋白质0.1g/mlNaOH创造碱性环境影响酶活性的条件5%NaOH设定碱性条件探究酵母菌的细胞呼吸方式10%NaOH吸收空气中的CO2,排除对实验结果的影响使用NaCl 溶液的实验
实验名称浓度作用观察DNA和RNA在细胞中的分布0.95NaCl(生理盐水)保持人口腔上皮细胞正常形态DNA粗提取与鉴定2mol/L NaCl溶解DNA0.14mol/L NaClDNA的溶解度最小,DNA析出
植物芳香油提取
增加盐浓度,易于分层使用清水的实验
实验名称作用体验制备细胞膜使细胞吸水涨破观察根尖分生组织细胞有丝分裂漂洗,洗去解离液,防止过度解离植物细胞质壁分离和复原保持植物细胞正常形态,观察洋葱鳞片叶外表皮细胞中紫色中央大液泡大小,及原生质层位置其他试剂
试剂种类实验名称作用30%蔗糖溶液植物细胞质壁分离和复原植物细胞失水后发生质壁分离现象30%KNO3植物细胞质壁分离和复原植物细胞失水后发生质壁分离和自动复原现象35%FeCl3比较过氧化
氢酶在不同条件下的分解过氧化氢分解过程中的无机催化剂,与过氧化氢酶的作用进行相互对照SiO2绿叶中色素的提取和分离充分研磨CaCO3绿叶中色素的提取和分离防止叶绿素被破坏层析液(汽油)绿叶中色素的提取和分离分离绿叶中的四种色素卡诺氏液低温诱导植物染色体数目变化固定细胞形态秋水仙素
诱导染色体加倍;
诱导基因突变看看网友们都有什么想法
网友1
实验原理:
原理一:新鲜肝脏中含有过氧化氢酶,Fe3+是一种无机催化剂,它们都可以催化过氧化氢分解成水和氧。

分别用一定数量的过氧化氢酶和Fe3+催化过氧化氢分解成水和氧,可以比较两者的催化效率。

原理二:新鲜的肝脏中的过氧化氢酶和新鲜的唾液淀粉酶都具有生物催化作用,但新鲜的肝脏中的过氧化氢酶只能对过氧化氢进行催化分解,而新鲜的唾液淀粉酶则不起催化作用。

分别用一定数量的过氧化氢酶和淀粉酶催化过氧化氢分解,可以说明酶的催化作用具有专一性。

网友2
唾液酸苷酶+白细胞酯酶+,一般也不需要治疗,2个+号以上才需要治疗
如用药,用药期间是不能同房的,否则用药没作用。

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