CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT
GAATTCCGTAGAATTCGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA
CTTCATG GAAGTACTTAA
AATTCCCTAA GGGATT
思考： 目的基因、运载体质粒经DNA连接酶处
理，可能有几种产物？
1、目的基因与目的基因结合；
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11、以我独沈久，愧君相见频。。21.3.406:36:3706:36Mar-214-Mar-21
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12、故人江海别，几度隔山川。。06:36:3706:36:3706:36Thursday, March 04, 2021
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13、乍见翻疑梦，相悲各问年。。21.3.421.3.406:36:3706:36:37March 4, 2021
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14、他乡生白发，旧国见青山。。2021年3月4日星期四上午6时36分37秒06:36:3721.3.4
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15、比不了得就不比，得不到的就不要。。。2021年3月上午6时36分21.3.406:36March 4, 2021
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16、行动出成果，工作出财富。。2021年3月4日星期四6时36分37秒06:36:374 March 2021
白质。下列叙述不正确的是
B
A．常用相同的限制性内切酶处理的基因
和质粒
B．DNA连接酶和 RNA聚合酶是构建重组质粒 必需的工具酶
C．可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中 是否导入了重组质粒
D．导入大肠杆菌的目的基因不一定能
成功表达
练习
1.有关基因工程的叙述中，错误的是 （ A ）
A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性核酸内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶
2）聚合酶链式反应 即PCR技术
PCR技术扩增
氢键断裂，形成单链DNA。
引物与DNA模板结合， 形成局部双链。
在酶的作用下，不断延 伸，合成双链DNA。
多次循环，获得大量 双链DNA分子。
步骤2、重组DNA分子的形成：
质粒
DNA分子
同种限制酶
一个切口
两个切口
两个黏性末端 获得目的基因
DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒）
第二节 基因工程的原理和技术
• 基因工程的原理：
•
基因重组
• 基因工程的目标：
• 让人们感兴趣的基因在宿主细 胞中稳定和高效表达。
基因工程的基本操作步骤：
1）获得目的基因； 2）形成重组DNA分子； 3）将重组DNA分子导入受体细胞； 4）筛选含有目的基因的受体细胞； 5）目的基因的表达。
步骤1：获得目的基因
思考：
• 干扰素是一种抗病毒药物，其化学本 质是蛋白质，假如现在要用大肠杆菌 来生产抗病毒干扰素，如何操作？
剪切 载体质粒
外源DNA插入
从人的淋巴细胞中提取 干扰素基因，转移到大肠 杆菌质粒中，再导入到其 体内。(画图讲解)
A 外源DNA片段
引入宿主细胞
选出含有重组DNA 的细胞扩增
巩固练习
1 用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋
Gene II
GGATCC
目的基因
GATC
CCTAGG
CTAG
注：GeneI 和GeneⅡ 表示两种标记基因 表示限制酶仅有的识别序列放大
• 谢谢
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9、静夜四无邻，荒居旧业贫。。21.3.421.3.4Thursday, March 04, 2021
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10、雨中黄叶树，灯下白头人。。06:36:3706:36:3706:363/4/2021 6:36:37 AM
将目的基因导 入受体细胞
将受体细胞 进行扩增
1.将目的基因导入植物细胞
农杆菌转化法 基因枪法ห้องสมุดไป่ตู้
2.将目的基因导入动物细胞 显微注射技术（最多、最有效） 3.将目的基因导入微生物细胞 Ca2+处理，以增加细菌细胞壁的通透性。
采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目
的基因的做法正确的是：( Ｃ )
①将毒素蛋白注射到棉受精卵中
②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精 卵中
③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组， 导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进 行组织培养
④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重 组，注射到棉的子房并进入受精卵
A.①② B.②③ C .③④
D.④①
步骤4、筛选含有目的基因的受体细胞
抗四环素基因
2、质粒与质粒结合；
3、目的基因与质粒结合。
步骤3、将目的基因导入受体细胞
• （1）常用的受体细胞：
大肠杆菌、 枯草杆菌、 土壤农杆菌、 酵母菌、 动植物细胞等。
（2）导入方法： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径
（3）导入过程：
受体细胞：细菌 CaCL2
细胞壁的通透性增大
重组质粒进入受体细胞
目的基因随受体细胞的繁殖而复制
目的基因：是人们所需要转移或改造的基因
如人的胰岛素基因、干扰素基因、白细 胞介素基因、植物的抗病基因、抗虫基因、 抗除草剂基因、种子贮藏蛋白的基因等。
获得目的基因的方法：
已知序列
化学方法合成 利其序列 • 已知其mRNA 的序列 • 已知其翻译产物的氨基酸序列
• B. 每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶 识别位点
• C. 每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一 个ada
• D. 每个人的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分 子
如下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制 造“工程菌”示意图（ ）
GATC CTAG
Gene I
GGATCC CCTAGG
2．有关基因工程的叙述正确的是
( D)
A.限制性内切酶只在获得目的基因时才用 B.重组质粒的形成在细胞内完成 C.质粒都可以作为载体 D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料
• 6、将ada（腺苷酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b
导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙
述错误的是
C
• A. 每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒
重组DNA
四环素
生长被抑制
四环素
正常生活
步骤5、目的基因的表达
1、特定性状的产生与否； 2、是否产生特定的产物。
2．利用外源基因在受体细胞中表达，可生产 人类所需要的产品。下列各项中能说明目的基
因完成了在受体细胞中表达的是（ D ）
A．棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因 B．大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNA C．山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列 D．酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白