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目录 1：背景知识 2：法规 3：我们的技术方案和案例分享
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GMP要求
2）无菌原料药 3）无菌制剂
API GMP
制剂 GMP
GMP要求逐步提高 第一阶段 无菌 第二阶段 无菌
API 制造 原料 中间产物 药物物质
1）非无菌原料药
药物产品 无菌
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非无菌原料药 第二章 厂房与设施，第四条 质量标准中有热原或细菌 内毒素等检验项目的，厂房的设计应特别注意防止微生 物污染，根据预定用途、工艺要求采取相应控制措施。 第九章 质量管理，第四十条 按受控的常规生产工艺生 产的每种原料药应当有杂质档案。杂质档案应当描述产 品中存在的已知和未知的杂质情况
热原和内毒素去除技术 的应用探讨
Haojun Chen 2012 Biopharm Marketing
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G-细胞壁结构
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脂多糖结构
脂多糖的结构复杂，其脂质A是主要的内毒素成分
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热原控制 vs 除热原补救
水系统
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内毒素去除（控制）方法 酸碱化学处理 氧化 烷化 干热（180℃/4h，250 ℃/45min ） 湿热 （蒸馏） 电离辐射 深层滤板过滤 正电荷过滤器过滤 超滤 层析（离子交换、疏水）
•2010版新药典主推检测细菌内毒素。细菌内毒素检查品种约200品种以上（主要为静脉注射）， 约60余品种仍保留家兔法热原检查（不包括局标、标准品种、生物制品） •仍有数百种注射剂无相关检查项，2006年开始对近百个静脉注射用品种进行研究。 •《化学注射液安全性检查指导原则》：“静脉注射用注射剂，应设热原（或细菌内毒素）、异常 毒性、过敏反应物质、降压物质、溶血与凝聚等安全性检查项。”
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中药
《中药注射剂安全性再评价资料报送要求》
制备工艺：提供本品包括工艺参数在内的详细的现 行生产工艺规程（包括原料的前处理、提取、纯化、浓缩 、干燥、注射剂的处方、配制、灌装、无菌处理、包装等 工艺过程和工艺参数）及近期连续5批产品生产记录。 制备用溶剂、吸附剂、脱色剂、澄清剂等来源和标 准：提供本品生产过程中所用溶剂、吸附剂、脱色剂、澄 清剂等的来源、质控标准，如进行精制需提供精制后的内 控标准。 除热原研究：提供除热原工艺研究及验证资料。 去除高分子物质研究：提供除无效高分子物质研究 验证资料。
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热原 vs 内毒素 家兔法（药典附录XII D） < 0.6℃/只，3只总和< 1.4℃ : 无热原 > 0.6°C一只，8只总和< =3.5℃ : 无热原 > 0.6°C一只，复检 鲎试剂法（药典附录XII E） 凝胶法 光度测定法
– 浊度法 – 显色基质法
1 Level of 0.125 EU/ml 0.1 0.010.001 Nhomakorabea0
25 50 Temperature (°C)
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75
SIP和微生物负荷 对NFZ正电荷滤芯的影响 SIP或微生物堵塞情况下，滤出液< 0.125 EU/ml
10 Endotoxin Concentration in Filtrate (EU/ml) 1 Level of 0.125 EU/ml 0.1 SIP，121℃/15 min Brevundimonas diminuta (107/cm2)，随后121℃/15 min Control Filter
pH
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数据分享----生理盐溶液
检测限度： 0.25 EU/ml
8 7 Log Endotoxin 6 Retention 5 Capacity(EU) 4 3 2 1 0
>1x108 >1x107
>1x104
Distilled Water
0.9% NaCl
Ringer’s Solution USP
5 4 3 2 1 0
0.2 micron sterilizing grade N6,6 double layer membrane with positive charge
% Amino Acids
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0
5
10
15
Detection Limits: At 3.5% Amino Acids Solution, 0.5 EU/ml At 10% Amino Acids Solution, 1.0 EU/ml
0.2 micron sterilizing grade N6,6 double layer membrane with positive charge
60
% Glucose
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数据分享----酸、碱缓冲溶液
检测限度： 0.25 EU/ml
8 7 6 Log Endotoxin 5 Retention Capacity (EU) 4 3 2 1 0
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数据分享----葡萄糖溶液
检测限度： 0.25 EU/ml
>1x108
8 7 6
>1x108
>1x108 High Purity Water 20% Glucose 50% Glucose
Log Endotoxin 5 Retention 4 Capacity (EU)
3 2 1 0 0 10 20 30 40 50
0 1 2 3 4 5 6 7 8 Sodium Chloride Concentration (%) 9 10
Endotoxin Retention (EU)
Detection Limits: At 0.9% Sodium Chloride Concentration, 0.1 EU/ml At 2.0% Sodium Chloride Concentration, 0.4 EU/ml At 5.0% Sodium Chloride Concentration, 3.0 EU/ml
0.2 micron sterilizing grade N6,6 double layer membrane with positive charge
>1x108
>1x108
>1x108
High Purity Water pH 6.4
100mm 100mm Sodium Tris-HCI Buffer Acetate-Acetic pH 8.0 Acid Buffer pH 4.6
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水溶液pH 对NFZ正电荷滤芯的影响
适用范围： pH3~10，滤出液< 0.125 EU/ml
10
Endotoxin Concentration in Filtrate (EU/ml)
1
Level of 0.125 EU/ml
0.1
0.01
0.001 0 2 4 6 8 10 12
过滤前热原水平
10,000 1,000 Endotoxin Concentration (EU/ml) 100 10 1 0,1 0,01
0.2 micron sterilizing grade N6,6 double layer membrane with positive charge
过滤后热原水平 检测限度 0 1 2 3 4 5
>1x108
>1x107
>1x103
0 High Purity Water KCl NaCl CaCl2 Ref: Hunter, Jander & Wickert, Pall SLS
150 mM Concentration
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数据分享----PBS溶液（100mM）
检测限度： 0.125 EU/ml
适合于产品
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全流程应用方案
水系统
工艺
1 2 3
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深层滤板对热原的控制
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直接过滤除热原----正电荷滤板EK1P
吸附拦截能力> 105EU/cm2
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深层滤板对热原的控制 EK1P，EKS80P正电荷滤板应用案例 血制品，WFI、产品的过滤（EK1P） 多糖疫苗，粗多糖样品的过滤（EK1P） API，抗生素除活性炭澄清过滤（EKS80P） 中药注射液，QKL、XNJ除活性炭、热原过滤（ EKS80P）
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正电荷滤芯对热原的控制
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正电位除菌级过滤器级别与内毒素去除效率
Positively Charged ‘N66’ ‘Posidyne’ Filters NTZ NFZ NIZ NAZ
Log 8 10 内毒素截留 (EU) 107 106 105
Sterilising Grades
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数据分享----氨基酸溶液
检测限度： 0.5~1 EU/ml
>1x108 >1x108 8
Log Endotoxin 7 Retention 6 Capacity (EU)
>1x108 High Purity Water 3.5% Amino Acids 10% Amino Acids