∆ ε αρτ εντ οφ Χλινιχαλ Πηαρ αχολογ ψ Ξ ινθιαο Η οσ ιταλ Τ ηιρδ Μ ιλιταρψ Μ εδ ιχαλ Υ νιϖερσιτψ Χηονγ θινγ
Α βστραχτ
Ε ξ α ινατιον ∆ ε αρτ εντ Τ ηιρδ Μ ιλιταρψ Μ εδ ιχαλ Υ νιϖερσιτψ Χηονγ θινγ
∗ 汤建林 周世文 翁鹭娜等 药学学报

∗ ∗
袁 成 孙成春 曹晓芝等 中国医院药学杂志
∗
期
汤建林等 高效液相色谱法分析人血清中硫唑嘌呤和巯嘌呤的浓度
∆ ετερ ινατιον οφ Αζατηιο υρινε ανδ -Μ ερχα το υρινε ιν Σερυ βψ Ρ εϖερσεδ -Πηασε Η ιγ η Περφορ ανχε Λιθυιδ Χηρο ατογ ρα ηψ
第 卷第 期 年月
色
谱
高效液相色谱法分析人血清中硫唑嘌呤和巯嘌呤的浓度Ξ
汤建林 周世文 黄林清 黄永平
张惠静
第三军医大学新桥医院临床药理基地 重庆
第三军医大学检验系分析化学教研室 重庆
提 要 建立了用
同时测定人血清中硫唑嘌呤
和 巯基嘌呤 浓度的方法∀ 血清样品经乙
腈除蛋白后在常压和 ε 下用氮气吹干 残余物用 Λ 洗脱液溶解 离心后上清液直接进样∀ 以
的特点 是一种良好的临床治疗药物质量浓度监测
方法∀
实验部分
仪器和试药
高效液相色谱仪
≅
不锈钢柱 大连依利特公司
标
准对照品
标准对照品
甲硝
唑
为 级 乙腈 磷酸二氢
钾为 级 水为重蒸水 乙腈和水经 Λ 微孔
滤膜过滤脱气∀
标准溶液配制
储备液 精确称取
对照品
置于
烧杯中 用
Ù
溶解并定容于
量瓶中 质量浓度为
∀ ΛÙ和
∗
Λ Ù∀
结果
回收率试验
取正常人血清
加入 种不同量
和 标准液及 Λ
按 节步骤制备不
同浓度的溶液 各测定 次 结果见表 ∀
精密度试验
取
和 标准液各一份 质量浓度均为
Λ Ù 加入内标后 分别于一天内测定 次
干扰试验
临床上常与
合并应用的药物有环孢素
强的松 甲基强的松龙和维生素 等 分别取它们的
固定相 采用梯度洗脱 从 ς 乙腈 Β ς
Ù 磷酸二氢钾 Β 经
时变为 Β
后
再变为 Β 检测波长开始为
后为
甲硝唑
为内标∀ 和 平均回收率
分别为
和
最低检出质量浓度均为 Λ Ù ∀ 所建方法简便 灵敏 准确∀
关键词 高效液相色谱法 硫唑嘌呤 巯嘌呤 血药浓度
分类号
Ù
前言
硫唑嘌呤
作为免疫抑制剂
重要意义∀ 目前 国内外对体液中
和 质
量浓度分别检测的方法较多 ∗ 但要同时检测却
由于二者性质上的较大差异而存在一定的难度∀ 国
外
等人 采用 Ν 乙基顺丁烯二酰亚胺衍
生 使其与
一同被乙酸乙脂提取后在
处检测 虽可同时检测
和 灵敏
度也较高 但每次洗脱需
以上和前处理需
的衍生过程∀ 国内袁成等人 采用三氯醋酸沉淀蛋
固定相 脱 ς 乙腈 Β ς
Λ 流动相 梯度洗
Ù
Β开
始
时为 Β
时为 Β 至
Ξ 本文收稿日期
修回日期

色
谱
卷
流速
Ù 检测波长开始为
后为
柱温 ∗ ε ∀
样品处理
取服药者上肢静脉血
离心 取血清
置于
离心试管中∀加
Λ 和乙腈
Λ 混旋
离心
Ù
将上
清液移至另一离心试管中∀ 对残余物再加乙腈
Λ 混旋离心 合并上清液 常压和 ε 下用氮气吹
干∀ 残渣加 Λ 的 ς 乙腈 Β ς
Ù磷
酸二 氢 钾
Β 混旋
离心
Ù
∀用上清液直接进样 进样量 Λ 色谱
图见图 ∀
以确定日内重复性 另一份于冰箱中 ε 下保存 每
日测定一次 连续测定 天 以确定日间重复性∀ 实
验结果显示 和
和 日 内 Ρ Σ∆ 分 别 为 日 间 Ρ Σ∆ 分 别 为 和
Ù 冰箱浓度的
标准溶液∀
储备液 精确称取 对照品
置
于
烧杯中 用
Ù
溶解并定容
于
量瓶中 质量浓度为
Ù 冰箱中
ε 下保存∀测定时以此为母液配制各种质量浓度的
标准溶液∀
内标液 精确称取
置于
烧杯中 用重蒸水溶解并定容于
量瓶中 质
量浓度为
Ù∀
色谱条件
白 上清液直接进样 在
处同时检测 虽前处
理过程简单 洗脱时间短 但
和 的检测
灵敏度分别仅为 Λ Ù 和 Λ Ù ∀本文采用乙
腈除蛋白梯度洗脱 使样品和内标在
内有效
的分离 且不存在干扰∀ 同时 由于采用变波长 使
和 均在最大吸收波长处测定 提高了分
析的灵敏度 从而使本法具有简便 快速 灵敏 准确



Ù Κ εψ ωορδσ
ε
Λ
Λ




对照品加入正常人血清中 按 节方法处理后进
样 它们的 τ 值分别为
和
均不干扰
和 的测定∀
最低检出质量浓度
按 倍信噪比计算
和 最低检出质
量浓度均为 Λ Ù ∀
参考文献
徐叔云主编 临床药理学 北京 人民卫生出版社 ∗


安登魁主编 药物分析 济南 济南出版社
Ρ Σ∆
Ρ Σ∆
图 色谱图
Φιγ Χηρο ατογ ρα σ


混合标准溶液 空白血清中加
入

∀



标准曲线的制作
取健康人血清
分别加入
和
标准液
Ù
Λ及
Λ 按 节操作∀ 以
和
与内标峰面积比 Ρ 对其浓度 Χ 和 Χ 回归 得标准
曲线方程分别为 Χ
Ρ
ρ
Χ
Ρ
ρ
和 的线性范围分别为 ∗

其中
的质量浓度从第 天开始逐渐下
降 至第 天共下降了 ∀
表 ΑΖΠ 和 -Μ Π 回收率和精密度实验结果 Ταβλε Πρεχισιονσ ανδ ρεχοϖεριεσ οφ ΑΖ Π ανδ -Μ Π ιν ηυ αν σερυ βψ Η ΠΛΧ ροχεδυρε Ξ Σ∆ ν
ΛÙ
ΛÙ
Ρ Σ∆
广泛用于器官移植 组织存活和自身免疫性疾病的
治 疗∀
的免疫抑制机理目前虽然还未完全清
楚但
在体内降解为 巯基嘌呤

而起作用 ∀
毒副作用的个体差
异较大 若血液浓度过低而降低其抗免疫和抗炎作
用 则治疗剂量通常为 ∗
Ù
∀ 所以
建立同时快速准确检测
和 血药浓度 对
于了解
在体内的代谢 指导临床合理用药具有