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但是腺病毒载体还存在许多不足,故在第一、第二代腺病毒载体的基础上发展了第三代腺病毒载体,通常称为辅助病毒依赖型腺病毒或无肠腺病毒或具有高包装能力的腺病毒(high2capacity or gutted or help2dependent Adenovirus,HD2AdV),现将第三代腺病毒载体的特性研究进展作一综述。

【关键词】　第三代腺病毒载体;辅助病毒;Cre/loxP 作者单位:310018浙江理工大学生命科学院 第一代腺病毒载体具有稳定、滴度高、高效率转导目的基因、低致病性、不但可以转染分裂期细胞而且可以转染静止期细胞等优点使得第一代腺病毒载体成为基因治疗中重要的载体之一。

目前已有很多研究报道了腺病毒载体在许多种类疾病基因治疗上的应用。

但该载体存在许多不足之处:①载体的包装容量较小,仅能转导8Kb的外源性基因片断。

②尽管病毒E1基因已被剪切,但仍有少数病毒基因表达从而引起宿主的免疫应答和细胞毒性反应,限制了病毒载体的给药剂量和给药次数,从而导致了载体转导的基因在体内表达的短暂性。

第二代重组腺病毒载体是将病毒基因组中的E2或E4区剪切或使其失活,而缺失的功能由更为复杂的容许细胞株补充。

腺病毒载体经这种方法修饰剪切处理后虽然提高了外源基因表达的时效,降低了机体免疫应答。

但这种修饰仍存在争议,仍没有能解决机体免疫和载体包装能力等问题。

为了消除抗原特异性宿主免疫反应、外源基因表达的长时效性、提高载体的包装能力和降低细胞毒性反应等缺点,在第一代、第二代腺病毒载体的基础上建立了第三代腺病毒载体———辅助病毒依赖型腺病毒(HD2Ad)载体。

一、H D2Ad载体第三代腺病毒基因组通常包括病毒基因组两端的ITRs及末端结合蛋白、病毒包装信号序列、表达序列盒和填充DNA等。

由于缺失了病毒编码序列,HD2Ad载体的包装能力可达到36kb,因此可以同时表达多个基因以及一些大分子蛋白的cDNA等。

腺病毒载体基因组存在最小包装限制性(约25kb),Parks等证实了为达到有效和稳定的扩增病毒载体,HD2Ad载体的基因组大小最终需定格在27～36kb之间[1]。

因此,如果这些载体所携带的基因不足27kb,为了达到最佳包装容量,通常是在基因组中插入一段填充非编码DNA,最好是人类非重复间隔DNA(non2repetitive human spacer DNA)。