中国人血液淋巴细胞免疫表型参考值调查来源:时间:2007-10-06 字体:[大中小] 收藏我要投稿文章出处：朱敏转载请注明出处【摘要】目的建立健康中国成人血液淋巴细胞免疫表型分析参考值。
方法用Simultest IMK-Lymphocyte试剂盒的荧光抗体对102例健康中国成人血液进行染色，以FACSort流式细胞仪进行分析，Simulset程序获取数据并分析结果，SPSS软件进行统计。
结果18～65岁健康中国成人淋巴细胞参考值范围CD+3细胞是50%～84%（955～2 860/μl），CD-3CD+19细胞为5%～18%(90～560/μl)，CD+3CD+4细胞为27%～51%(550～1 440/μl)，CD+3CD+8细胞为15%～44%(320～1 250/μl)，CD-3、CD+16和/或CD+56细胞为7%～40%(150～1 100/μl)，CD+3CD+4/CD+3CD+8比值为0.71～2.87。
随着年龄增长CD+3CD+4细胞略有升高，CD+3CD+8细胞略有降低。
NK细胞在大年龄组女性低于男性，且有统计学差异(P＜0.05)。
与高加索人和美国人相比，中国人的CD+3CD+8细胞和NK细胞(CD-3，CD+16和/或CD+56)的相对值(百分率)与绝对值均高，CD-3CD+19细胞和CD+3CD+4细胞仅相对值较低，但绝对值不少。
CD+3CD+4/CD+3CD+8比值向低值漂移。
结论种族、性别、年龄和环境因素可影响健康人淋巴细胞表型分布。
Reference values on blood lymphocyte immunophenotype in healthy Chinese adult Zhu Lihua, Wang Jianzhong, First Hospital, Beijing Medical University, Beijing,100034 【Abstruct】Objective To establish the reference values on blood lymphocyte immunophenotype in healthy Chinese adults.Method Staining whole blood with fluorescein-conjugated monoclonal antibodies supplied by simultest TM IMK lymphocyte kit, we analyzed 102 healthy Chinese residents (age range 18～65 years) by FACSort flow cytometer, acquired results by Simultest programme, and performed statistical analysis by SPSS software.Results The 95% reference ranges in absolute counts per microliter of whole blood (percentage of lymphocytes) for CD+3, CD+3CD+4, CD+3CD+8, CD-3CD+19, CD-3/CD+16 and/or CD+56 cells were 955 to 2 860 (50% to 84%), 550 to 1 440 (27% to 51%), 320 to 1250 (15% to 44%), 90 to 560 (5% to 18%), 150 to 1 100 (7% to 40%) respectively. The CD+3CD+4/CD+3CD+8 ratio was 0.71 to 2.87. CD+3CD+4 cells increased and CD+3CD+8 cells decreased slightly with age. Women were compared to men in old age group, NK cells (CD-3/CD+16 and/or CD+56) were lower (P＜0.05). Compared with Caucasians and Americans, Chinese had higher percentage and absolute numbers of CD+3CD+8 and NK cells, but had lower percentage of CD-3CD+19 and CD+3CD+4 cells without absolute number change. So CD+3CD+4/CD+3CD+8ratio skew to the lower values.Conclusion The race, age and environment could influence the reference value of lymphocyte immunophenotype. 【Key words】Lymphocyte immunophenotype Reference value Flow cytometry 淋巴细胞免疫表型分析在原发或获得性免疫缺陷病、自身免疫性疾病的辅助诊断和移植免疫的监测中具有重要作用。
随着流式细胞仪的广泛应用，采用流式细胞术进行淋巴细胞免疫表型分析已逐渐成为临床检验的常规工作之一。
各国的流式细胞术实验室均建立了自己的参考值，并对其种族、性别、年龄等影响因素进行了探讨。
目前我国还没有用流式细胞术、采用双染色分析淋巴细胞免疫表型参考值的报告。
为此我们对102例健康成人进行了淋巴细胞免疫表型分析，现报告如下。
材料和方法一、研究对象102例标本均取自于无免疫性疾病、无现症、不吸烟、体检健康、血细胞计数及肝、肾功能检查正常的成人。
年龄18～65岁，其中男性54人，女性48人。
首先按男女性别分为两大组，每组中又以40岁为界，≤40岁者为小年龄组（男24人，女19人），＞40岁者为大年龄组（男30人，女29人）。
二、实验方法静脉取血2～3 ml，以15 IU/ml肝素抗凝，立即送检。
抗凝血在0.5～1小时内以CA570型血细胞计数仪进行白细胞计数与分类。
在6小时内行荧光抗体染色。
所用荧光抗体为Simultest IMK-Lymphocyte试剂盒（美国Becton Dickinson产品）。
每份标本同时做6管，即IgG1/IgG2a，CD45/CD14，CD3/CD19，CD3/CD4，CD3/CD8，CD3/CD16、CD56。
分别加入相应荧光抗体试剂20 μl和100 μl混匀的抗凝血于各试管底部，彻底混合后置室温暗处孵育30分钟，然后加入1×溶血液（FACS溶解液）2 ml迅速于混旋器上混匀，再置室温暗处孵育10分钟后，300×g离心5分钟。
吸去上清，留下50 μl的残液，以免沉淀中细胞丢失。
于混旋器彻底混匀沉淀物后，加入PBS2 ml洗涤，并以200×g离心沉淀5分钟。
吸去上清，混匀细胞后加入0.5 ml 1%多聚甲醛，彻底混匀后置2～8℃冰箱中待检。
流式细胞分析一般在染色后24～48小时内进行，采用FACSort流式细胞仪（Becton Dickinson公司产），以Calibrite TM荧光微球校正光电倍增管（PMT）电压，建立荧光补偿，检查仪器灵敏度，使流式细胞仪处于最佳工作状态，然后用Simulset软件按顺序测定6管的光散射及荧光信号并同时分析结果。
三、统计学分析全部数据输入电脑，采用SPSS软件包进行统计分析。
结果首先分两个年龄组，在组内进行男女性别间的比较。
结果显示，除大年龄组男、女NK细胞的百分率及绝对值有显著性差异外（P＜0.05），其他各项指标的组间差异均无统计学意义（P＞0.185～0.866）。
进一步观察大年龄组男、女NK细胞计数的频数分布图，发现女性的NK细胞计数值（绝对值均数413/μl，相对值均数17.5%）略低于男性（绝对值均数599/μl，相对值均数23.3%），但分布基本落在男性的频数范围内，固将二者仍合并统计。
将性别合并后再次进行大、小年龄组的比较，所有指标的组间差异均无统计学意义（P＞0.156～1.000）。
最后将大、小年龄组合并统计，结果见表1。
以百分位数法获得中国人淋巴细胞表型95%参考值范围见表2。
表1102例中国健康成人淋巴细胞表型分析统计学参数项目均数标准差中位数最小值最大值白细胞(个/μl) 7 250 141 7 100 4 400 10 500淋巴细胞相对值(%) 34.4 5.42 35.0 20.0 43.0绝对数(个/μl) 2 479 594 2 484 1 488 4 483CD+3细胞相对值(%) 68.0 9.65 68.0 43.0 85.0绝对数(个/μl) 1 686 490 1 593 948 3 138CD-3，CD+19细胞相对值(%) 10.0 3.90 10.0 3.0 21.0绝对数(个/μl) 261 132 243 63 897CD+3，CD+4细胞相对值(%) 38.0 6.73 39.0 23.0 55.0绝对数(个/μl) 972 341 939 521 2 877CD+3，CD+8细胞相对值(%) 28.0 8.30 27.0 13.0 53.0绝对数(个/μl) 699 282 635 253 1 605CD-3，CD+16和/或CD+56细胞相对值(%) 20.0 9.60 19.0 2.0 46.0绝对数(个/μl) 498 272 410 35 1 433CD+3，CD+4/CD+3，CD+8 1.51 0.55 1.44 0.43 3.00表2中国人淋巴细胞表型参考值项目相对值 (%) 绝对数 (个/μl)T+B+NK 95～105 1 530～3 700总T细胞(CD+3) 50～84 955～2 860总B细胞(CD-3，CD+19) 5～18 90～560辅助/诱导T细胞(CD+3，CD+4) 27～51 550～1 440抑制/细胞毒T细胞(CD+3，CD+8) 15～44 320～1 250NK细胞 (CD-3，CD+16和/或CD+56) 7～40 150～1 100辅助/抑制T细胞比值 (CD+3，CD+4/CD+3，CD+8) 0.71～2.78 0.64～2.85讨论由于淋巴细胞免疫表型参考值受到生态环境、社会经济因素如种族、性别、年龄、精神状态、吸烟与否、每日变异等影响，故不同的地域和种族应建立自己的参考值。