主要内容
本标准方法规定了转基因产品检测的核酸定 性PCR方法，适用于种子、饲料、食品和环境 样品中转基因成分的定性检测。从以下五个方 面进行介绍： A.方法简介 B.检测目标物 C.检测体系 D.结果判定 E.结果表述
A.方法简介
• 普通PCR+电泳方法 原理 聚合酶链式反应（PCR）在反应缓冲液中，脱氧 核糖核酸、寡核苷酸引物在DNA聚合酶的作用下经循
• PVP法提取DNA、 CTAB法提取DNA
利用高浓度去垢剂在高温（55～65℃）条件下裂解细胞， 蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度 的方法使蛋白质及多糖杂质沉 淀，得到水相中的核酸。
• 硅土法提取DNA
利用硅土对核酸的吸附作用，分离核酸。
转基因产品的检测策略 Strategy for GMO Detection
1.核酸提取纯化方法 2.定性检测方法 3.定量检测方法 4.可能产生误差的原因及消除 5.案例分析
1.核酸提取纯化方法
使用标准方法 GB/T 19495.3-2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法
核酸提取纯化方法
A B C 酚-氯仿法提取DNA PVP法提取DNA
（Polyvinylpyrrolidone,聚乙烯吡咯烷酮）
CTAB法提取DNA
（Cetyltrimethyle Ammonium Bromide,十六烷基三乙基溴化 铵）
D E •
硅土法提取DNA 胍-氯仿法提取DNA 建议使用商业试剂盒
核酸提取纯化方法
• 酚-氯仿法提取DNA、胍-氯仿法提取DNA
利用酚和胍使蛋白质变性，释放出核酸,同时抑制了DNase 的降解作用，保护核酸。 利用氯仿加速有机相与液相分层。
2
3 4 5 6 7 8
GB/T19495.2-2004
GB/T19495.3-2004 GB/T19495.4-2004 GB/T 19495.5-2004 GB/T19495.6-2004 GB/T19495.7-2004 GB/T19495.8-2004
二、以核酸为基础的检测方法介绍
主要内容
启动子
Promoter
增强子
Enhancer
基因Gene 转基因 transformation
终止子 Terminator
筛选 检测 Screen detection
筛选 检测 Screen detection
植物基因组Recipient genome
重组产生GMO
Recombinant Plant
第一批标识管理的转基因生物
（5大类17种）
大豆 玉米
油菜
棉花 番茄
种子，豆粒，豆粉，豆油， 豆粕 种子，玉米粒，玉米粉，玉 米油，玉米面 种子，油菜籽，菜籽油 种子 种子，新鲜番茄，番茄酱
转基因检测国家标准
序 号
1 标准号 GB/T19495.1-2004 国家标准名称 转基因产品检测 通用要求和定义 转基因产品检测 实验室技术要求 转基因产品检测 核酸提取纯化方法 转基因产品检测 核酸定性PCR检测方法 转基因产品检测 核酸定量PCR检测方法 转基因产品检测 基因芯片检测方法 转基因产品检测 抽样和制样方法 转基因产品检测 蛋白泳方法依据DNA分子 长度的不同加以分离。
A.方法简介
• 缺点：
作物种属检测 Taxon detection
Plant genome
Plant genome
品系特异性检测 Event Specific Detection
结构特异性检测 Construct Specific Detection
使用标准方法
GB/T 19495.4-2004
转基因产品检测 核酸定性PCR检测方法
2 0 0 9 年 不 同 国 家 转 基 因 作 物 种 植 面 积
1996年到2009年美国转基因作物的种植百分率
巴西、加拿大、中国、印度 转基因作物占作物种植面积的比例
从2008年的65%增加到2009年的71% 从2008年的86%增加到2009年的93%
棉花种植量减少，但仍为68%
从08年的80%增长到09年的87%
种植国家不断增多
25 25 21 20 13 12 9 10 6 17 22 23
商业化种植： 美洲、亚洲、 大洋洲、 欧洲、非洲 25国
15
5
0 1996 1998 1999 2000 2004 2005 2006 2008 2009
9
转基因作物种植比例
油 菜, 5 棉 花, 13
大 豆, 57 玉 米, 25
质检系统实验室技术能力培训教材
食品中转基因成分、真伪鉴别和过敏原及其成分检测
主要内容
• 食品中转基因成分检测 • 食品中过敏原及其成分检测 • 食品真伪鉴别（动物源性成分检测）
第一部分 食品中转基因成分检测
一、全球转基因作物种植情况 和有关法规介绍
全球转基因作物种植面积（1996-2009）
智利、挪威
韩国、马来西亚
日本、中国台湾、泰国
中国香港、美国、加拿大、阿根廷
自愿性标 识
5%
《农业转基因生物安全管理条例》
• 2001年5月23日，国务院发 布了第304号令《农业转基 因生物安全管理条例》
《农业转基因生物标识管理办法》 2002年颁布实施
标识的标注方法
转基因动植物（种子、种畜禽、水产苗木）和微生物， 直接标注“转基因××”。 转基因农产品的直接加工品,标准为“转基因XX加工品 （制成品）”或“加工原料为转基因XX” 用农业转基因生物或用含有农业转基因生物成份的产品 加工制成的产品，但最终销售产品中已不再含有或检测 不出转基因成分的产品标注为“本产品为转基因XX加工 制成， 但本产品中已不再含有转基因成分”或“本产品 加工原料中、 有转基因XX，但本产品中已经不再含有转 基因成分”
2009年
10
非转基因油菜
喷施草甘膦前
抗草甘膦油菜RT73
喷施草甘膦后
中国培育的转基因抗虫水稻Bt63介绍
母本对照
Bt63
转基因产品标识制度
标识类 别 标识阈 值
0 0.9% 强制性标 识 1% 2% 3% 5%
国家/地区 中国、印度、菲律宾、印度尼西亚 欧盟、爱尔兰、以色列
澳大利亚、新西兰、巴西、南非、斯洛文尼 亚、克罗地亚、捷克共和国、瑞士、俄罗 斯、沙特阿拉伯