实验四微生物染色
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2.显微镜使用和保护
(1)低倍镜的使用法 (2)高倍镜的使用法 (3)油镜的使用法
3.目测微尺,物测微尺及其使用方法
(1)目测微尺 (2)物测微尺 (3)目测微尺的标定 (4)菌体大小的测量 4.细菌,放线菌和蓝细菌个体形态的观察
(四)实验报告
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实验三 微生物直接计数法
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•2培养基的制备 A步骤 1）配制溶液 取一定容量的烧杯盛入定量无菌盐水，按培养 基配方逐一称取各成分，加水溶解，可加热促进，不断搅拌 以防原料在杯底烧焦。 2）调pH值 测定培养液的pH, 按要求以10%HCl or 10%NaOH 调至所需pH。 3）过滤 用纱布、滤纸、棉花均可，若杂质少可省略
每样品重复三次，取平均值，计算每1ml菌液中所含的酵母 菌数。
（五）试验报告
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实验四 微生物的染色
目的
学习微生物涂片染色的操作技术,掌握微生物的普 通染色法(单染色法)和革兰氏染色法
实验仪器和材料 实验步骤
单染色 革兰氏染色
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▪涂片 ▪干燥 ▪固定 ▪染色 ▪水洗 ▪吸干 ▪镜检
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▪ 取大肠杆菌和枯草杆菌芽孢杆菌(均以无菌操作) 分别做涂片,干燥,固定.方法同单染色法 ▪ 用草酸铵结晶紫染色1min,水洗. ▪ 加革氏碘液媒染色1min,水洗 ▪ 斜置载玻片于一烧杯上,滴加95%酒精脱色,至流 洗出的酒精不呈现紫色时,立即用水冲净酒精,脱色 时间约20min,或视涂片厚薄而略有差异 ▪ 用番红(或称沙黄)染液染色1~2min,水洗 ▪ 吸干,置于显微镜下观察,阳性者为紫色,阴性者 为红色 ❖ 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程 度.如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱 色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌 ❖ 菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长, 或已死亡及部分菌自实行验四溶微生解物染了色 ,都常呈阴性反应
细胞数／ｍｌ＝80小格内的细胞数＊4＊10＊1000＊稀释倍数
／80
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四）操作步骤
（1）稀释样品 使每格约5个细胞 （2）取干净的血球计数板，用厚盖玻片盖住中央的计数室， 用移液管吸取少许充分摇匀的待测菌液于盖片的边缘，菌液则 自行渗入计数室，5～10min即可计数 （3）将血球计数板置于载物台上，用低倍物镜找到小方格网 后换用高倍镜观察计数
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（二）、实验内容
1.显微镜的结构 （ 1）. 机械部分 （2）.光学部分
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（2）光学部分
a.目镜 b.物镜: 低倍物镜 高倍物镜 油镜 物镜的性能由数值孔径决定 数值孔径=n*sina/2 显微镜的性能还依赖于物镜的分辨力 分辨力:能分辨两点之间的最小距离的能力 增大数值孔径来 提高分辨力. 物镜 N.A.1.25,100*,”OI”,160/0.17,16mm---- N.A.1.25数值 孔径 100*放大倍数 ”OI”油镜 160镜筒长 0.17要求盖 玻片的厚度 16mm焦距 C.聚光器 d.反光镜 f.滤光片
第十章 微生物的实验
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实验一 显微镜的使用及细菌,放线菌和蓝细菌个 体形态的观察
(一)目的 (1)掌握显微镜的结构,原理,学习显微镜的操作方法和保养. (2)观察细菌,放线菌和蓝细菌的个体形态,学会生物图的绘制. (二)实验器材 (1)显微镜,目测微计,物测微计,擦镜纸,香柏油,二甲苯. (2)示范片 大肠杆菌 小球菌 蓝藻等
(一)目的
（1）明确显微镜计数的原理．
（2）学习使用血球计数板进行微生物计数的方法
（二）仪器与材料 显微镜 血球计数板 移液管 酵母菌液
（三）血球计数板的结构
细胞数／ｍｌ＝125小格内的细胞数＊400＊10＊1000＊稀释倍 数／125
（2）25＊16的计数板计算公式
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B 营养琼脂培养基的制备
1）培养基配方：牛肉膏0.75g，蛋白胨1.5g，氯化钠0.75g，琼脂 3g，蒸馏水150ml，pH7.6 。0.1Mpa下灭菌20min.
2）操作： a取300ml烧杯一个，装150ml蒸馏水。
b 在药物天平上一次称取配方中各成分，水中溶解，带待琼 脂完全溶解后停止加热，补充水分，用10%NaOH调pH =7.6，省 略过滤，培养基分装五支试管中，余入250ml锥形瓶，塞上棉塞， 包炸好待灭菌
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4）分装 将培养基分装在试管或锥形瓶中（放置培养基玷污 管口，避免浸湿棉塞引起杂菌污染），装入试管的量视1试管 的大小定，一般斜面培养基时为其高度的1/4~1/3 5）斜面培养基的制作 将装有琼脂培养基的已灭菌的试管趁 热取出，斜置于木棒上，使其斜面长度为试管的1/3~1/2， 代培养基凝固后即成斜面
实验五 培养基的制备及灭菌
一 目的 1玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作 2掌握培养基的配制方法 3会干热灭菌和高压蒸汽灭菌的操作方法 二 实验材料 三 实验内容 1玻璃器皿的洗涤剂包装
A洗涤 培养皿、试管、锥形瓶等可用去污粉或肥皂， 自来水冲净。移液管用实洗验四液微生浸物染泡色 在水冲净。干燥。
B包装 1）培养皿牛皮纸包装 2）吸管的吸端塞棉花约1~1.5cm，(防细菌吸入口中，避免 细管吹入)，松紧适宜。用包装纸包移液管尖端。 3）试管和锥形瓶等的管口均堵棉塞，并用牛皮纸 包裹。
•3无菌水制备
1）取250ml锥形瓶装90ml蒸馏水，赛棉塞，包扎，待灭菌
2）取5支18mm*18mm试管，分装9ml蒸馏水………
•4灭菌 杀死全部微生物的营养细胞和它们的芽孢或孢子
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•灭菌方法 过滤除菌，化学药品消毒，利用酚、甲醛 等是细菌蛋白质变性灭菌；高温，紫外线等物理方法 加热灭菌是主要的：干热灭菌，高压蒸汽灭菌（湿热 灭菌）。后者在121oC灭菌15~30min,效果好。 1）干热灭菌法：用于培养皿等玻璃仪器。包装好的上 述物品放入恒温箱中，160oC维持2h，旋钮调至零，到 50oC可取 2）高压蒸汽灭菌：微生物试验所需仪器培养基，皆可 用高压灭菌锅灭菌
