后 摇 瓶一 次 ， 培养 ２ 如 此 活化 和 驯化 ， 其 生 长 化试 验 ．２ ２
下 分 别 培 养 ２ 、ｄ ４ 、 ｄ ６ ｄ ３ 、ｄ ５ 、ｄ测 得 的蛋 白酶 活 力 如
图２
１０ ４ 。）１ ０ ２
己 １０ ０
８ ０
分别 采用 不 同的培 养 温度 、 培养 时 间 、 养基 组 培 分 、 水 比 、 始 ｐ 进 行 单 因 素试 验 ， 后 再 以 培 料 初 Ｈ 然
养 温度 、 养时 间 、 皮 豆粕 比、 水 比为 ４个 因素 ． 培 麸 料
设 置 ３个 水 平 ， 行 Ｌ （ 正交 试 验 Ｅ。 进 ９３） ３ ４个 因 素 的 ］
产。 １１ ．． 培养 基 ５
姻
黼
皿
跚
图１ 培 养 温 度 对 酶 活 的 影 响
Ｆｇ１ Ｅ ｅ ｔｏ ｕｔ ｅ ｅａｕｅ Ｏ ｅ ｚ ｍｅ ａ ｔ ｉ ｉ． ｆ ｃ ｆｃ ｌ ｒ ｔｍｐ ｒｔ ｒ ｎ ｎｙ ｃｉ ｔ ｕｅ ｖｙ
马铃薯 蔗糖 培养 基 ［： 于菌种 活 化 。 ２用 ］ 麸 皮 培养 基 ： 于菌 种 驯化 和优 化试 验 。 用
ｗｈ ｃ ｈ ｄ ｎ ｒ ａ ｅ ｂ ５ ｉ ｈ ａ ｉ ｃ ｅ ｓ ｄ ｙ ４％ ．
Ｋｅ ｒ ｓ Ｍｕ ｏ ；ｐ ｏｅ ｓ ； ｅ ｚ ｍｅ ｒ ｄ ｃｉ ｎ ｃ ｎ ｉ ｏ ｙ ｗｏ ｄ ： ｃｒ ｒ ｔａ ｅ ｎ ｙ ｐ ｏ ｕ ｔ ｏ ｄ ｔ ｎ； ｏ ｔ ｚ ｔ ｎ ｏ ｉ ｐｉ ａｉ ｍｉ ｏ
Ｏｐ ｉ ｉａ ｉ ｎ ｏ ｈ ｏ ｕ ｉ ｇ Ｃｏ ｄ ｔ ｎ ｆ Ｅｎ ｙ ｅ ｆ ｒ Ｍ ｕ ｏ ｔｍ ｚ ｔｏ ｆ ｔ ｅ Ｐｒ ｄ ｃｎ ｎ ｉ ｏ ｓ ｏ ｚ ｍ ｏ ｉ ｃｒ Ｗ ｉ ｇ ｏ ｕ ｔｖ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ Ｈｉ ｈ Ｐｒ ｄ ｃ ｉ ｅ Ｐｒ ｔ ａ ｅ Ｓ ｒ ｉ ｈ
ＬＵ Ｆｎ Ｉ ａ ｇ， Ｃ ＡＯ ｎ ｚ ｉ ＹＯＵ Ｊａ － ｎ Ｘｉ－ ｈ ， ｉｎ ｍｉｇ， Ｌ Ｕ Ｃｈ ｎ ｍｉｇ Ｉ ｕ － ｎ
（ ｏｅ ｅｏ ｉ ｎ ｉｅｒ ｇ Ｓｃ ｕｎ Ｕ ｉ ｒ ｔ ｏ ｃ ｎｅ ａｄ Ｅ ｇｎｅｉ ，ｉｏｇ ６ ３ ０ ， ｈｎ ） Ｃ ｌｇ ｆ Ｂｏ ｇｎ ｅｉ ，ｉｈ ａ ｎｖ ｓｙ ｆ Ｓ ｉ ｃ ｎ ｎｉｅｒ ｇ Ｚｇ ｎ ４ ０ ０ Ｃ ｉａ ｌ ｅ ｎ ｅ ｉ ｅ ｎ
鋈
跚 ２ ０
０ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７
３个 水平 均 取单 因素试 验 的最 佳值 和 左 右值 ，初始 ｐ 为单 因素 试验 确定 的最 佳值 。 过测 定 酶活 力 的 Ｈ 通 大小 来 确定 最优 产酶 条 件 。
１ － 验证 试验 ．３ ２
间 ３ 。 化 后 蛋 白酶 活 力达 １ ０５ ９ ／ ， ｄ优 ８ ． Ｕ ｇ 比优 化 前提 高 了 ５ ％ 。 ２ ４
关 键 词 ： 霉 ； 白 酶 ； 酶 条 件 ； 化 毛 蛋 产 优 中 图分 类号 ：Ｑ ２ ￣ Ｔ ９ ５． ２ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ ４ ５ ６ ２ １ ） １０ ４ — ０ ４ １７ — ０ Ｘ（０ ２ ０ — ０ ０ ０ ０
２ ｏ 时 ， 活 力 最 高 ， 后酶 活 力 下 降 。 该 突变 菌 ８Ｃ 酶 此 故 株 产酶 的最 适培 养温 度为 ２ ℃。 ８
（） ２ 培养 时 间对酶 活 的影 响 麸 皮 １ｇ豆 粕 ４ ， ６， ｇ 料水 比 ｌｌ 自然 ｐ 于 ２ ℃ ：， Ｈ， ８
菌 锅 内 ，２ ℃湿 热 灭 绝 ２ ｍ ｎ ，８ 恒 温 培 养 ，ｄ １１ ０ ｉ ）２ ℃ ２
（ 四川 理 工 学 院 生 物 工 程 学 院 ， 四川 自贡 ６ ３ ０ ） ４ ０ ０
摘 要 ： 经 紫 外 线诱 变 选 育 的 毛 霉 高产 蛋 白 酶 菌 株 进 行 产 酶 条 件 优 化 ， 酶 活得 到 进 一 步 提 高 。 因素 试 验 和 正 交 对 使 单
试 验 得 该优 良 突 变 菌 株 的 最 优 产 酶 条 件 为 ： 养 基 初 始 ｐ ．， 皮 豆粕 比 ７３ 料 水 比 １１ ， 养 温度 ２ ℃ ， 养 时 培 Ｈ ７０ 麸 ：， ：． 培 １ ８ 培
一
紫 外 可见 分 光光 度 计 Ｔ ６新 世 纪 ，北 京 普 析 通用 仪
器有 限责任公 司 ； 试管 、 培养皿 、 角瓶 、 种环 等均 三 接 为微 生 物实 验室 常规 仪器 。
１１ ．． 实验 药 品 ４
］
琼 脂条 ， 学纯 ， 建省 石狮 市琼 脂副 食 品加工 化 福 厂 ； 酸二氢 钠 、 磷 磷酸 氢二 钠 、 酪氨 酸 、 酸 、 酸钠 、 盐 钨 钼 酸钠 、 酸锂 、 硫 溴水 、 蛋 白 、 氧化钠 、 氯 乙酸 、 酪 氢 三 碳 酸钠 等均 为 分析 纯 ．由成 都市 科龙 化工 试 剂厂生
ｓ ｙ ｅ ｎ ｍｅ ｌ ａ ｉ ｆ ｍａｅ ｉ ｌ ａ ｄ ｗａｅ ， ｃ ｌ ｒ ｅ ｅ ａｕ ｅ， ｃ ｌ ｒ ｉ ｏ ｈ ｓ ｘ ｅｌｎ ｔ ｎ ｓ ａ ｎ ｔ ｒ — ｏ ｂ ａ ａ ，ｒ ｔ ｏ ｔｒ ｎ ｔｒ ｏ ａ ｕ ｔ ｅ ｔ ｍｐ ｒ ｔ ｒ ｕ ｕｔ ｅ ｔ ｕ ｍｅ ｆ ｒ ｔ ｉ ｅ ｃ ｌ ｔ ｍｕ ａ ｔ ｔ ｉ ｏ ｐ ｏ ｅ ｒ ｄ ｃ ｐ ｏ ｅ ｓ ｗｅ ｅ ． ７： １： ． ２ ￣ ， ３ ． Ｔ ｅ ｔ ｉ Ｓ ｒ ｔａ ｅ ｃｉ ｉ ｗａ １ ０ ５ ９ ／ ａｔ ｒ ｐ ｉ ｚ ｔ ｎ， ｕ ｅ ｒｔ ａ ｅ ｒ ７ ０， ３， １１， ８ Ｃ ｄ ｈ ｓ ａ ｎ’ ｐ ｏｅ ｓ ａ ｔ ｔ ｒ ｖｙ ｓ ．２ Ｕ ｇ ｆ ｏ ｔ ８ ｅ ｍｉａｉ ｏ
优化 试 验 ， 旨在 进一 步 提高 酶活 。
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ．
冰 箱 Ｅ １ ， 庆 电 冰 箱 总 厂 组 装 ； 物 洁 净 Ｒ一 ７ 重 生
工作 台 Ｚ Ｊ 一 １ ２ 上 海智 城 分 析 仪 器 制作 有 限公 Ｈ Ｈ ２ １， 司 ； 压 灭 菌 锅 ＹＸ ８ Ｂ上 海 三 申 医疗 器 械 有 限公 高 ２０ ， 司： 电热 恒 温培 养 箱 Ｘ 一 ５ Ｃ， ＭＴ １ ２ 重庆 市 永生 实 验仪 器 厂 ： 温 培 养 摇 床 Ｔ 一 ０ 上 海 一 恒 科 技 有 限 恒 ＨＺ １０， 公司 ； 力搅拌器 ７Ｈ 磁 ８ Ｗ— ， 坛 市 医 疗 仪 器 厂 ； ｌ金 恒
ｄ ｉ１ ． ６ ￣ｉ ｎ１７ — ０ Ｘ２ １．１０ ０ ｏ ：０３ ９ ．ｓ．６ ４ ５ ６ ． ２ — １ ９ ｓ ０ ０
毛 霉 常用 于 生 产 蛋 白酶 、 糖化 酶 、 淀粉 酶 、 一 脂 肪 酶 、 胶酶 、 乳 酶 等 口， 果 凝 ］在其 发 酵产 酶 过程 中 ， 除 了选择 性 能优 良的产 酶菌 株 外 ，还必 须进 行产 酶 条 件 的优 化 控制 ，以满 足 细胞 生长 、繁 殖 和产酶 的需 要 。本课 题 组 曾采用 紫 外线 诱 变从腐 乳 中选 育 出一
１２ 方 法 ．
培 养温度 对 微生 物 的生长 繁殖 和发 酵产 酶有 重
要影 响 ． 只有 在一 定 的温 度范 围 内 ， 微生 物才 能 正常 生长 、 繁殖 和维持 正 常 的新 陈代 谢 。 图 １可 知 ， 由 随
着 培 养 温 度 的升 高 ，酶 活 力 增 大 ，当 培 养 温 度 为
第４ ８卷 （ 第 １７期 ） 总 ６
刘 芳 等 ： 霉 高 产 蛋 白酶 菌 株 产 酶 条件 的优 化 毛
４ １
温水 浴 锅 Ｈ Ｓ 江 苏省 金坛 市 正基 仪 器 有 限公 司 ； Ｈ— 。
１ ｇ 豆 粕 ４ ， 水 比 ｌ１ 自然 ｐ ， 不 同 温 度 下 ６， ｇ料 ：， Ｈ） 于 培养 ４ ｄ测得 的蛋 白酶 活力 如 图 １ 。
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓ ｒ ｃ ：Ｔ ｅ ａ ｔ ｌ ｔ ｄ ｅ ｈ ｒ ｄ ｃｎ ｏ ｄ ｔ ｎ ｆ ｅ ｚ ｍｅ ｆ ｒ Ｍｕ ｏ ｔ ｉ ｈ ｐ ｏ ｕ ｔ ｅ ｐ ｏｅ ｓ ｔ ｉ ｈ ｔ ｈ ｒｉ ｅ ｓｕ ｉ ｄ ｔ ｅ ｐ ｏ ｕ ｉ ｇ ｃ ｎ ｉ ｏ ｓ ｏ ｎ ｙ ｏ ｃ ｒ ｗｉ ｈ ｇ ｒ ｄ ｃｉ ｒ ｔ ａ ｅ ｓｒ ｎ ｔ ａ ｃ ｉ ｈ ｖ ａ
食
品 与 发 酵 科 技
０ ｎ ｅ ｍｅ ｔｔ ｎ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｄ ａ ｄ Ｆ ｒ ｎａ ｉ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｏ
第 ４ ８卷 （ １期 ） Ｖ １ ８， ｏ 第 ｏ． ， ． ｖ
毛霉高产 蛋 白酶菌株产 酶条 件 的优化
刘芳 ， 新 志 ， 见 明， 春 明 曹 游 刘
时 间 ／ ｄ
图２ 培 养 时 间对 酶 活的 影 响
Ｆｇ． Ｅｆｃ ｆｃ ｌ ｒ ｉ ｎ ｎ ｍｅ ｃｉｉ ｉ２ ｆｅｔ ｏ ｕｔ ｅ ｔｍｅ ｏ ｅ ｚ ａ ｔ ｔ ｕ ｙ ｖｙ
微 生 物 的生 长 繁 殖 和 产 酶 都 有 着 自己 的 最 适
培 养 时 间 。 图 ２可 知 ， 着 培 养 时 间延 长 ， 活 由 随 酶
ｗ ｓ ｉ ｄ ｃ ｄ ｍｕ ａｉ ｎ ｂ ａ ｎ ｕ ｅ ｔ ｔ ｙ ＵＶ．Ｔｈ ｐ ｒ ｏ ｅ ｗ ｓ ｔ ｍｐ ｏ ｅ ｅ ｚ ｍｅ ａ ｔ ｉ ｕ ｔ ｅ ．Ｔ ｅ ｒ ｓ ｌｓ ｏ ｉ ｇｅ ｆ ｃｏ ｘ ｅ — ｏ ｅ ｕ ｐ ｓ ａ ｏ ｉ ｒ ｖ ｎ ｙ ｃｉ ｔ ｆ ｒｈ ｒ ｈ ｅ ｕ ｔ ｆ ｓ ｌ ａ ｔ ｒ ｅ ｐ ｒ ｖｙ ｎ
Ｌ Ｍ一 Ｃ 毛霉 Ｍ ，由本 课 题组 经 紫 外 线诱 变 选 育
并 试管 斜 面保存 。
１１ 实 验原 料 ．２ ．
马铃 薯 ， 皮 ， 麸 豆粕 均 为市 售 。
１１ 实 验设 备及 仪 器 ．． ３
株 毛霉 高 产 蛋 白酶 菌 株 Ｌ Ｍ一 霉 Ｍ，为确 保 此 优 Ｃ 毛 ， 良突变 菌株 得 到最 佳 的表现 ，现对其 产 酶条 件进 行