讨论 金裳凤蝶的COI基因 基因 金裳凤蝶的
在昆虫的mtDNA中，COI的翻译起始都是一 个广泛讨论的话题。在昆虫纲编码蛋白中 ，COI的起始密码子通常要与一个不编码的 位点共同作用来进行启动。 在节肢动物中，COI的起始部分氨基酸序列是非 常保守的，一般认为，COI的起始信号可能是这 个保守区域上游的5-6个碱基。如在家蚕中COI 的起始序列是TTTTAG，在C. raphaelis中是 TTAG，在其他鳞翅目也报道过四碱基ATAA作为 COI的翻译起始信号；在金裳凤蝶中COI的起始 信号是ATTAGC。在整个后生动物中，为什么线 粒体基因COI如此高的保守，现在还不清楚。
基因和一个非编码的控制 区（D-loop）(见下表)。
金裳凤蝶mtDNA示意图 示意图 金裳凤蝶
实验结果
实验结果
实验结果
rRNA和 rRNA和tRNA
金裳凤蝶核糖体RNA（ rRNA）包括16S rRNA 和12S rRNA基因，两 种核糖体RNA以tRNAVal 间隔。
22个tRNA的的长度 从61bp到77bp不等 ，和其他无脊椎动 物一样都具备典型 的三叶草结构
讨论
讨论
可以扩增5kb以下的序列， 对5kb以上的序列有一定困难 使用新鲜标本，提取过程中在4℃ 下离心，离心速度不超过10,000g
long PCR 技术讨论
选取保守性好的位点设计特异性引物, 长度在18-23bp之间，以碱基T结尾 反应体系置于冰上操作， 使PCR反应从冷启动开始 减少PCR反应循环数，延伸温度 用68℃，使La Taq酶发挥最佳作用
二、金裳凤蝶线粒体基因组研究
金裳凤蝶（ 金裳凤蝶（Troides aeacus ）
DNA提取和PCR扩增 DNA提取和PCR扩增 提取和PCR 具体步骤同 1
实验结果
金裳凤蝶mtDNA全长 15,263bp，共37个基因： 13个编码蛋白基因(ATP6,
ATP8, COI-III, ND1-6, ND4L, Cytb), 2 个rRNA基 因 (12S和16S), 22 个tRNA
分子地理学 分 子 系 统 学 学
Text
分 子 遗 传
ห้องสมุดไป่ตู้
分
研究背景
较大的 变异率
无脊椎动物 mtDNA研究 的限制
A、T含 量较高
信 息 数据少
研究背景
金裳凤蝶（Troides aeacus）
实验过程
2.DNA 提取
3.引物 引物 设计
1.标本 标本 浸泡
实验流程
4.PCR 扩增
5.序列 序列 拼接
实验结果
tRNA结构图
实验结果
金裳凤蝶mtDNA编码区域和非编码区域 金裳凤蝶mtDNA编码区域和非编码区域 mtDNA
1 13个编码蛋白基因分别 是ND1-6，ND4L，COIIII，Cytb，ATP6和 ATP8，与鳞翅目其他昆 虫组成相一致，起始密 码子也是ATR。终止密 码子各不相同 2 非编码区域包括一些短序 列和控制区，有15段短 非编码区，共长129bp ，最长的非编码区短序列 长46bp。D-loop长 419bp，有着较丰富的A 、T含量。
基于PCR技术扩增无脊椎动物线粒体 基于PCR技术扩增无脊椎动物线粒体 PCR 基因组全序列和金裳凤蝶线粒体基 因组研究
报告人： 报告人：刘 刚
基于PCR PCR技术扩增无脊椎动物 一、基于PCR技术扩增无脊椎动物 线粒体基因组全序列 (以金裳凤蝶Troides aeacus为例 为例) 以金裳凤蝶
研究背景
5min
根据引物设定
mtDNA短片段PCR反应程序 mtDNA短片段PCR反应程序 短片段PCR
根据引 物设定
根据引 物设定
40s
mtDNA长片段 PCR反应程序 mtDNA长片段 long PCR反应程序
实验结果
金裳凤蝶mtDNA PCR扩增产物电泳图 金裳凤蝶mtDNA long PCR扩增产物电泳图
讨论
金裳凤蝶mtDNA控制区 金裳凤蝶mtDNA控制区 mtDNA
金裳凤蝶mtDNA控制区重复区段示意图
讨论
基于13种编码蛋白序列重建昆虫纲NJ系统发生树， 各个分支上的数字由Bootstrap为1000个循环的自举检验值。
讨论
基于13种编码蛋白序列重建昆虫纲MP系统发生树， 各个分支上的数字由Bootstrap为1000个循环的自举检验值。
谢 谢！
讨论 金裳凤蝶mtDNA结构特点 金裳凤蝶mtDNA结构特点 mtDNA
金裳凤蝶mtDNA的全长与已知鳞翅目其他种 类基本一致，没有出现基因重排或缺失现 象 在整个基因中，A+T=80.3℅>C+T=19.7℅， 这与无脊椎动物A+T在线粒体全基因中的比 率为69.5℅-84.9℅非常吻合 A、T含量最为丰富的区域是控制区，在这段区 域内A+T=89.7℅。在整个mtDNA中各个基因之间 共发生16次重叠，共39 bp。