二、概述Байду номын сангаас二、概述
• 抗原上那部分可以引起机体产生抗体的分子结构 ，叫做抗原决定簇。一个抗原上可以有好几个不 同的抗原决定簇，因而使机体产生好几种不同的 抗体，最终产生出抗体是浆细胞。只针对一个抗 原决定簇起作用的浆细胞群就是一个纯系，纯系 的英文为Clone，音译就是克隆。由一种克隆产生 的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目 标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就象导 弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一 个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来 产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为 多克隆抗体。 • 多克隆抗体又简称多抗。与之相对应的叫单克隆 抗体，简称单抗。
（一）抗原制备 • Ig 是免疫球蛋白，对异种动物而言，是良 好的抗原物质。可以刺激异种动物产生抗 Ig 血清， • 经适当提取后，产生抗 Ig 抗体，又叫第二 抗体或抗抗体。在多数的间接标记反应中， 均需制备 • 抗 Ig 抗体。
（二）材料与试剂
1．提取的动物 Ig 2．弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂 3．青霉素和链霉素 4．实验动物 兔 5．其它材料及试剂
（2）皮下多点注射法：
A、家兔两侧掌（跖内各注射含有完全佐剂抗 原 0.10ml（IgG 含量5mg/ml） ； B、7～10 天后，脊柱两侧多点（颈、胸、腰 椎各两点、共 6 点）皮下注射含不完全佐 剂5的抗原，每点 0.50ml； C、7～10 天后，脊柱两侧重复注射一次； D、7～10 天后试血。不合格者重复步骤D。
（二）抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质 的识别能力。抗体的特异性高，它的识别能力就 强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉 反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原 和近似抗原分别做竞争抑制曲线，计算各自的结 合率，求出各自在 IC50时的浓度，并按下列公式 计算交叉反应率。 如果所用抗原浓度IC50浓度为 pg/管，而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无 穷大时，表示 这一抗血清与其他抗原物质的交叉 反应率近似为 0，即该血清的特异性较好。
（3）多途径联合注射法： A、两侧掌（跖）内侧皮下注射含完全佐剂抗原 0.50ml（IgG 量为 5mg/ml） ； B、14 天后，多点皮下注射含有不完全佐剂抗原； C、7 天后，耳静脉注射不含佐剂的抗原 2ml； D、测定血清抗体效价，不合格者重复步骤C，并适 当递增 IgG 量。
2、效价 采用琼脂扩散法。 （1） 将血清倍比稀释，加入外周孔。 （2） 中间孔加动物 Ig。 （3） 37℃湿盒琼扩 24 小时，观察结果。
3、结果判定 （1）抗 Ig 的效价测定 琼脂扩散效价达 1﹕16 或
1﹕32 者为合格。 （2）纯度鉴定 采用琼扩法。中间孔加抗 Ig 血清， 外周孔加 Ig 和标准品 Ig。在抗 Ig 与 I抗原上那 部分可以引起机体产生抗体的分子结构，叫做抗原 决定簇。一个抗原上可以有好几个不同的抗原决定 簇，因而使机体产生好几种不同的抗体，最终产生 出抗体是浆细胞。只针对一个抗原决定簇起作用的 浆细胞群就是一个纯系，纯系的英文为Clone，音译 就是克隆。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克 隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗 原决定簇结合，就象导弹精确地命中目标一样。另 一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可 以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗 体混杂物，称为多克隆抗体。
• 抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并 分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免 疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就 是抗体。 • 抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇 刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称 之为单克隆抗体（Monclone antibody）。由多种抗原决 定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这 些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生 的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外， 同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD等五类抗体。
（三）抗体的亲和力 是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的 高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点 与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有 助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键 、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华 力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示，K的 单位是L/mol，通常K的范围在 108 ～1010 /mol ，也有多达 1014 /mol。抗体亲和力的测定对抗 体的筛选，确定抗体的用途，验证抗体的均一性 等均有重要意义。
• 定义2：对特定抗原所产生的一组免疫球蛋 白混合物，每种免疫球蛋白能识别抗原分 子上的一个表位。 • 所属学科：生物化学与分子生物学（一级 学科）；总论（二级学科）
• 定义3：多种抗原表位刺激机体免疫系统后 ，机体产生的针对不同抗原表位的混合抗 体。 • 所属学科：细胞生物学（一级学科）；细 胞免疫（二级学科）
四、鉴定
（一）抗体的效价鉴定 不管是用于诊断还是用于治疗，制备抗 体的目的都是要求较高效价。不同的抗原 制备的抗体，要求的效价不一。鉴定效价 的方法很多，包括有试管凝集反应、琼脂 扩散试验、酶联免疫吸附试验等。常用的 抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效 价的方法，以资比较。如制备抗抗体的效 价，一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。
（三）操作方法 1、免疫方法 • 可以采用以下各种方法之一进行免疫。 （1）淋巴结注射法： A、在兔的两后足跖部皮下（或皮内）注射活卡介苗 50mg（每 侧约0.30ml） 。7～10 天后，兔跖及腘肌淋巴结肿大； B、于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG 乳化抗原 0.50ml(含 IgG 5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml)； C、必要时，14 天后，重复步骤B一次； D、再过 7 天后，于两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的 IgG 乳化抗原0.50ml（含IgG5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉 素 1 000μg/ml） ； E、5～7天后，耳静脉采血。测定血清效价。
三、多克隆抗体制备 三、多克隆抗体制备
多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤： 1、制备抗原。 2、选择实验动物。 3、动物免疫。 4、试取血进行测试，看看是否成功免疫。 5、如果成功免疫，杀死实验动物，采集全部 血清。 • 6、纯化出抗体。 • 7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。 • • • • • •
多克隆抗体
简述多克隆抗体的定义、制备及鉴 定等相关知识
一、定义
• 中文名称：多克隆抗体 • 英文名称：polyclonal antibody • 定义1：由多个B细胞克隆所产生的抗体，可与不 同表位结合且免疫球蛋白类别各异。 • 所属学科：免疫学（一级学科）；免疫系统（二 级学科）；免疫分子（三级学科）