1.2.5 总黄酮含量的测定 配取定量试液和不同浓度的芦丁溶液分别同步做与硝
酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等的显色反应，然后以芦丁作为标 准 溶 液 ，用 紫 外 分 光 光 度 计 在 510 nm 处 测 定 吸 光 度 ，按 回 归 方 程 计 算 样 品 液 中 总 黄 酮 的 含 量 （mg/g）。
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取率下降。 因此，提取时间 40 min 的提取效果最好。 2.1.3 温度对荷叶总黄酮提取率的影响
在提取时间 40 min 和 固 液 比 1:25 的 条 件 下 ，用 95%乙 醇按试验步骤分别处理 温 度 为 ：60、65、70、75、80 ℃，用 紫 外 分光光度 计在 510 nm 处 测 定 吸 光 度 ，计 算 总 黄 酮 类 化 合 物 的含量，结果如表 4 所示。
研究表明，黄酮类化合物中的大豆异黄酮可以显著促进 动物生长、提高动物繁殖能力、增强机体免疫力、降低饲料成 本、是安全高效的绿色饲料添加剂，在饲料中有很大的发展 前景，本试验对汉中荷叶总黄酮的提取工艺条件进行优化， 为荷叶保健食品的开发利用提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料
荷 叶 于 2013 年 7 月 中 旬 采 集 于 陕 西 省 汉 中 市 汉 台 区 。
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醇提法提取荷叶中总黄酮工艺条件研究
李万林 钟姣姣
（陕西理工学院化学与环境科学学院）
［中 国 分 类 号 ］R284.2
［文献标识码］ B
［文 章 编 号 ］1002-8358 （2014 ）04-35-3
摘 要：为研究荷叶中总黄酮的最佳提取工艺，本试验 通过正交设计用乙醇提取荷叶中总黄酮。 结果表明，荷叶中 总 黄 酮 最 佳 提 取 工 艺 为 ：温 度 75 ℃、固 液 比 1:30、提 取 时 间 为 40 min。 在 最 佳 提 取 条 件 下 所 提 取 总 黄 酮 含 量 为 2.1329%。
准 确 称 取 干 燥 至 恒 重 的 芦 丁 20.30 mg， 加 适 量 75%乙 醇 ，微 热 使 之 溶 解 ，置 100 mL 容 量 瓶 中 定 容 ，自 然 冷 却 ，得 标 准 芦 丁 乙 醇 溶 液 。 取 溶 液 0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分 别置于 50 mL 容 量 瓶 中 ，加 5% NaNO2 1.5 mL，摇 匀 ，放 置 6 min， 加 10% Al （NO3）3 1.5 mL， 摇匀， 放置 6 min， 加 4% NaOH 20 mL 再加 75%乙醇至 刻度，摇匀，放置 13 min，用紫 外分光光度计在 510 nm 波长下测定吸光度值， 结果如表 1 所示。
基金项目：（陕西理工学院大学生科技爱好者协 会— ——大学生创新实验项目，项目编号 UIRP13001）。
在 1991 年 11 月 我 国 卫 生 部 〔卫 监 发 〕第 45 号 文 件 中 ，荷 叶 被列入第 2 批“既是食品又是药品”的名单。 荷叶中除了含 有碳水化合物外，还含有生物碱、黄酮、挥发油、有机酸、皂 苷、甾体等有效成分，能有效抑制高胆固醇血症和动脉硬化， 具有降脂减肥、抗病毒、抗菌和抗惊厥等药理作用，药食两 用，深受人们青睐，近几年对荷叶的研究也越来越深入。
K3
1.7701
1.9696
1.8062
R
0.1152
0.2788
0.0848
因素主次顺序
B>A>C
优水平
A2
B3
C2
优组合
A2B3C2
通过正交试验结果分析得出，各因素对荷叶中总黄酮提取 率的影响顺次为：B＞A＞C，即固液比＞提取温度＞提取时间。 从表 6 可知， 荷叶中总黄酮提取工艺的最佳提取方案是 A2B3C2，即 提取温度为 75 ℃、固液比为 1:30、提取时间 40 min。
把 荷 叶 烘 干 粉 碎 ， 将 5.0 g 荷 叶 与 乙 醇 按 一 定 比 例 （1: 10、1:15、1:20、1:25、1:30） 混 合 ， 在 一 定 温 度 下 （60、65、70、75、 80 ℃）浸 取 一 定 时 间 （20、30、40、50、60 min），将 混 合 液 自 然 冷却，用水循环真空泵抽 滤 该 混 合 液 ，再 将 滤 液 用 95%乙 醇 定 容， 然后准确量取适量定容后 的 溶 液 ， 加 5% NaNO2 1.5 mL，摇匀，放置 6 min，加 10% Al（NO3）3 1.5 mL，摇匀，放置 6 min，加 4% NaOH 20 mL 再 加 95%乙 醇 至 刻 度 ，摇 匀 ，放 置 10 min，用紫外分光光度计在 510 nm 波长下测定吸光度值。 1.2.4 标准曲线制备
1
2
3
4
5
时间/min 20
30
40
50
60
含量/% 1.2721 1.7647 1.9542 1.8568 1.6023
在 乙 醇 体 积 分 数 95%、提 取 温 度 75 ℃、固 液 比 1:25 的 条件下，比较不同提取时间对荷叶中总黄酮提取率的影响。 结果显示（表 3）：随着提取时间延长，荷叶中总黄酮得率开 始增加， 但 40 min 以后总黄酮 得率略有下降。 这可能是因 为，刚开始时间过短，黄酮类物质还未充分溶解出来；随着时 间延长，荷叶中有效成分容出量逐渐增大，故而总黄酮提取 率增加；继续延长时间，荷叶中黄酮类物质可能分解导致提
表 1 芦丁标准曲线
序号
1
2
3
4
5
6
V/mL 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
C/（mg/mL） 0.000 0.00812 0.01624 0.02436 0.03248 0.0406
A
0.000 0.323 0.376 0.423 0.496 0.552
对表 1 数据做回归处理得回归方程： A=7.38916 C+0.256 R2=0.91095
表 2 固液比对荷叶黄酮提取率的影响
1
2
3
4
5
固液比 1:10
1:15
1:20
1:25
1:30
含量/% 1.0935 1.5211 1.8514 1.9421 1.9425
在乙醇体积分数 95%，采取温度 75 ℃，提取时间 40 min 的条件下， 比较不同固液比对荷叶中总黄酮提取率的影 响，结果显示（表 2）：随着固液比提高，总黄酮提取率呈上 升趋势。 这可能是因为随着乙醇所占固液比比例越大，荷 叶中黄酮类物质容出量越大，总黄酮提取率增加。 当固液 比达到一定程度时，再增大固液比，总黄酮提取率趋于稳 定，即一定比例的溶剂已经将有效成分基本溶出。 综合考 虑总黄酮得率、溶剂用量和能源消耗等因素，选用固液比 1:25 提 取 效 果 最 好 。 2.1.2 时间对荷叶总黄酮提取率的影响
仪器：722-E 型紫外分光光度计 （上海精密仪器科学有 限 公 司 ）、GR -200 型 单 盘 电 子 分 析 天 平 （AD company， limited.Made in Japan）、SHZ-3 型水循环真空泵（河南巩义市 杜甫仪器厂）、DOB20005 型电热干燥箱（中 国 重 庆 银 河 试 验 仪器有限公司）、JJ-2 型 组 织 捣 碎 机 （金 坛 市 城 西 春 兰 实 验 仪器厂）。 1.2 试验方法 1.2.1 提取剂的选择
饲 料 广 角 ·35
科技视野 HORIZON OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
将荷叶烘干，过 40 目 筛 粉 碎 ，即 得 荷 叶 粉 ，放 入 干 燥 箱 中 备 用。
试剂：芦丁（上海源叶生物科技有限公司）；无水乙醇、无 水三氯化铝、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠（以上均为分析 纯）。
2
70（1） 1:25（2）
40（2）
1.7052
3
70（1） 1:30（3）
50（3）
1.9163
4
75（2） 1:25（2）
30（1）
1.7539
5
75（2） 1:30（3）
40（2）
2.1329
6
75（2） 1:20（1）
50（3）
1.7431
7
80（3） 1:30（3）
30（1）
1.8678
关键词：荷叶；总黄酮；提取工艺；正交试验
荷，又称莲、芙蕖、芙蓉等，为睡莲科睡莲属，是具有膨大 根茎的多年水生草本植物，荷叶呈圆形盾状，叶面为绿色，有 蜡质感，背面色淡，我国园林中常用其美化水面。 荷叶在我 国资源丰富、分布广泛，主产于湖南、江西、江苏、湖北、浙江 等地，具有清暑利湿、升发清阳、清心去热、止血利水的活性。
根 据 单 因 素 试 验 结 果 ，选 用 L9（33）正 交 设 计 表 ，以 总 黄 酮提取率为考察指标， 以影响荷叶总黄酮提取率的因素， 提取温度（A）、固液比（B）、提取时间（C）为影响因素，每 个 因素设计 3 个水平，共计 9 个试验点，以确定荷叶总黄酮 提取的最优工艺组合。 确定每个因素的 3 个水平为:提取温 度 70、75、80 ℃ ， 固 液 比 1:20、1:25、1:30， 提 取 时 间 30、40、 50 min，采 用 L9（33）正 交 表 进 行 正 交 试 验 ，试 验 设 计 及 结 果 见表 5-6。
游离黄酮类化合物一般难溶于水，而溶于甲醇、乙醇、乙 酸乙酯、乙醚等有机溶剂。 而黄酮甙一般易溶于热水，还能 溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、吡啶等有机溶剂。 荷叶中的黄酮 类化合物属于甙类，故可用热乙醇提取。 1.2.2 提取总黄酮的工艺流程
风干荷叶→烘干粉碎→用乙醇提取→过滤→测量吸光 度→计算总黄酮含量。 1.2.3 操作步骤