Plate Layout
RQ vs sample
HRM


高分辨率熔解（High Resolution Melting，HRM）分析技术是基于核 酸的物理性质，通过饱和的插入染料监控DNA熔解曲线变化而进行分 析的一种技术。 扩增子的熔解曲线完全取决于DNA碱基序列。只要一个碱基发生了突 变，就会改变DNA链的解链温度。HRM可以区分单碱基差异。
实验注意事项

仪器20分钟左右开启，预热。
配制PCR体系时，加样一定要准确 加每个样品一定要更换枪头，防止交叉污染



样品板上的膜一定要封好
样品上机之前一定要离心，避免气泡影响实验结果

问题……?
谢谢！
厂家简介

Illumina公司是一家集开发，制造及销售用于分析遗传变 异和生物功能的综合系统的高科技公司。1998年成立， 2005年进入中国，并以惊人的速度不断发展，于2007和 2009年两次入选福布斯杂志评出的美国年度成长速度最快 的高科技公司，同时亚太地区也是Illumina全球增长最快 的区域。 2010年Illumina并购Helixes公司。
该设计从根本上消除了热不均一性和边缘效应 精准的温度控制和卓越的温度均一性提高了数据质量和实验重复性
创新技术

光学系统--光路
CCD Array
Two sets of 48 high-power fixed LEDs for excitation
Series of four band pass filters (upgradeable to 5)

操作软件
Quantitation High Resolution Melting
GG CC
DEL TT AA
14 series of 2 fold serial dilution B-Actin Fam labeled Taqman probe chemistry
Genotyping 5 distinct clusters observed
Absolute Quantification
用于分析某未知样本中个某一核酸分子的绝对量值， 即通常所说的拷贝数。
应用：
病原微生物或病毒含量的检测 转基因动植物转基因拷贝数的检测 RNAi基因失活率的检测
Plate Layout
Standard Curve
Relative Quantification
HRM检测不受突变碱基位点和种类的局限，无需使用序列特异性探 针，具有高灵敏度、操作简单、高通量、成本低等优点 HRM应用主要基于两种技术的进步：


பைடு நூலகம்
具有精确控温装置和高密度数据采集的仪器（解链温度差异极小，零点几摄氏度， 使用高分辨率的仪器才可以检测） 双链DNA嵌入型饱和荧光染料如LC Green
用于测定一个测试样本中目标核酸序列与校正样本中 同一序列表达的相对变化。校正样本可以是一个未经 处理的对照或者是在一个过程研究中处于零时的样本。 应用： 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如 药物处理、物理处理、化学处理等 ) 特定基因在不同时间的表达差异 cDNA芯片或差显结果的确证
产品简介

Eco 结构
仪器状态指示灯 固定的光学系统 安全的热盖 高性能反应模块 安全门锁 安静的通风系统
32 cm
34.5 cm 32 cm
体积：32×34.5×32 cm；重量：约16 Kg
创新技术
马达 搅拌浆

精准的控温系统 导热元件是一个中空银槽，中空 银槽是密闭的，内含一种特殊液 体导热介质。在PCR循环过程中， 液体导热介质通过两个反方向搅 拌装置驱动，在中空银槽中快速 流动，使热量从半导体均匀传递 到整个银槽。
BeadXpress
Accuracy, versatility and flexibility for molecular testing
Eco
Gold-standard qPCR made accessible
内
容



产品简介 创新技术 操作界面 应用
产品简介

Eco实时荧光定量PCR系统由1975年诺贝尔生理学和医学奖获得者 David Baltimore博士和世界著名光子与微细加工专家Axel Scherer 博士共同研发
Any Sequencing project within reach
Genome Analyzer IIx
Most widely adopted NGS platform
HiScanSQ
Unique combination of sequencing and arrays
HiScan
Speed, quality and versatility for arrays
HRM
原始曲线 随着DNA熔解，Sybr Green被释放，荧光 信号骤降
分 析 过 程
HRM
导出图 “速率”曲线的最高 峰是分离速率最大的 点，即等于熔解温度
HRM
应用： 突变发现/筛查/扫描 SNP 基因分型/等位基因区分 物种鉴定 表观遗传学/DNA甲基化 微卫星分析
Genotyping
Eco™ Real-Time PCR System
基因有限公司
张振华
厂家简介
Illumina的产品服务
新一代测序技术平台 基因芯片技术平台
Sequencing
实时PCR技术平台
qPCR
Arrays
HiSeq2000
Redefining the trajectory of sequencing
HiSeq1000
产品优势

开放的平台：支持实时PCR的全部应用，包括最具挑战性的高分辨熔 解（HRM）曲线分析 性能卓越：灵敏的精密控制的光学技术；精准的温度控制技术和极佳 的温度均一性；Cq值重复性高，数据准确性高， 4色荧光检测：同类产品荧光通道最多 标准化：出厂时已对SYBR、FAM、HEX、VIC、ROX和 Cy5等荧光染料进 行校正，遵循MIQE指导原则 软件：以图标驱动的软件界面，实验设计和设置简单，简洁明了的操 作流程只需3个步骤 通量：48孔反应板，满足绝大多数用户的需求 微量：5~20μl 反应体系，节约成本 快速：40个循环＜40分钟 小型：结构紧凑、体型小巧，适合个人使用 便宜：同类产品价格最低
48 Blue array
48 Green array
创新技术

光学系统--控制过程
Eco 独特的校准优化数据质量
操作软件
独特的图标驱动用户界面，大大简化了实验设计和设置
操作软件
简捷的样品类型设置
操作软件
直观的循环界面
应用
1. 绝对定量分析 2.相对定量分析--基因表达差异分析 3.HRM分析 4.基因分型