9第18卷 第5期 2016 年 5 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 18 No. 5 May，2016川贝母中西贝母碱提取工艺优选王道东1，邵珠德2，刘元涛2（1.山东中医药大学附属医院，山东 济南 250355；2.山东中医药大学，山东 济南 250355）摘 要：目的：优选川贝母中西贝母碱的酸水温浸提取工艺。
方法：以川贝母中西贝母碱提取率为指标，采用单因素试验考察提取方法，选取药材粉碎粒度、温浸温度、溶剂倍量、药液pH、提取时间、提取次数为考察因素，通过正交试验优选西贝母碱的提取工艺。
结果：最佳提取工艺为粉碎过20目筛，加入6倍量pH 为1的盐酸水溶液，60 ℃动态温浸提取3次，每次1 h。
最佳提取工艺的西贝母碱提取率为89.29%。
结论：该方法灵敏度高，稳定性和准确性良好，且优选的工艺稳定可行，川贝母中西贝母碱提取率较高，适用于工业大生产。
关键词：川贝母；西贝母碱；提取率；提取工艺中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2016) 05- 0009- 03收稿日期：2015-10-11基金项目：国家“重大新药创制”科技重大专项项目（2013ZX09103002-015）作者简介：王道东（1978-），男，山东聊城人，主任药师，学士，研究方向：药剂学。
Optimization Extraction Process of Sipeimine in Fritillaria CirrhosaWANG Daodong 1，SHAO Zhude 2，LIU Yuantao 2（1.Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，Shandong，China；2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，Shandong，China）Abstract：Objective ：To optimization the acid water soaking extraction process of sipeimine in Fritillaria cirrhosa . Methods ：To adopt the extraction rate of sipeimine in Fritillaria cirrhosa as index. Single factor test was used to investigate the extraction method，select the medicinal powder granularity，soaking temperature，solvent volume，extraction time，solution pH，extracting times as factors，orthogonal test for optimization of extraction process by means of sipeimine. Results ：The optimum extraction process is to ground through a 20 mesh sieve，adding 6 times amount of water solution of hydrochloric acid of pH for 1，60 ℃ dynamic temperature soaking and extracting for 3 times，each time1 hours. The extraction rate of the best extraction process of sipeimine as 89.29%. Conclusion ：The method has high sensitivity，good stability and accuracy，and theoptimization process is stable and feasible，and extraction rate of sipeimine in Fritillaria cirrhosa is higher，and is applicable to industrial production.Keywords：Fritillaria cirrhosa ；sipeimine；extraction rate；extraction process 川贝母系百合科植物川贝母（Fritillaria cirrhosaD.Don）的干燥鳞茎[1]。
具有清热润肺、化痰止咳、散结消痈等功效[2]，临床主要用于虚劳咳嗽、肺热燥咳、瘰疬、乳痈、肺痈。
现代研究表明，川贝母具有镇咳、祛痰、平喘、镇静、抗菌等作用，其主要活性成分为西贝母碱等生物碱类成分[3]。
目前对川贝母总生物碱的提取工艺研究报道较少，该药材经提取后常因得膏率高、杂质成分多，导致不能合理应用。
本实验采用酸水提取法通过正交试验优选川贝母中西贝母碱的提取工艺，为川贝母中西贝母碱的提取和工业化生产提供实验依据。
1 仪器与材料1.1 实验仪器LC-2010A 型高效液相色谱仪（日本岛津公司），包括蒸发光散射检测器、CLASS-VP 工作站；METTLER TOLEDO AB135-S 型电子天平；UV1100型紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；PHS-3C 型PH 计（上海雷磁仪器厂）；PK-S24型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；KQ-250型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 实验材料色谱纯乙腈（美国 DNK 公司），色谱纯磷酸（天津孚赛瑞公司），其余试剂均为分析纯；西贝母碱对照品（质量分数≥98%购自上海源叶生物科技有限公司，批号20120802）。
川贝母药材购自济南建联中药店，经山东中医药大学药学院万鹏教授鉴定为百合科植物川贝母（Fritillaria cirrhosa D.Don）的干燥鳞茎。
2方法与结果2.1 西贝母碱含量测定2.1.1 色谱条件与系统适应性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%三乙胺溶液（65∶35）为流动相；体积流量1.0 mL·min -1；柱温30 ℃；选用蒸发光散射检测器，漂移管温度100 ℃；载气流速2.6 mL·min -1，增益1，撞击器关[4]，进样量5μL。
理论板数按西贝母碱峰计算应不低于2000。
结果见图1~图2。
图1 西贝母碱对照品HPLC 图谱DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2016.05.002辽宁中医药大学学报18卷图2 川贝母药材供试品HPLC 图谱2.1.2 标准曲线的绘制取西贝母碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，即得西贝母碱对照品溶液。
精密量取上述对照品溶液各0.1、0.2、0.4、0.6、1.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。
按“2.1.1”项下色谱条件进样，以西贝母碱进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，求得回归方程：Y =23785X-0.3918（r=0.9993），线性范围1.90~3.01μg。
2.2药材粉碎粒度的考察由于川贝母粉性较强，故粒度对西贝母碱的浸出及得膏率有较大影响。
本研究以西贝母碱的提取率、得膏率为指标，比较粉碎粒度对西贝母碱提取效果的影响。
取川贝母，分别直接投料、粉碎至20、50、100、150目投料，以6倍量pH为1的盐酸水溶液为提取溶剂，50 ℃温浸提取1 h，测定西贝母碱的提取率及得膏率，结果见表1，图3。
表1 不同粉碎程度西贝母碱提取率及得膏率粒度（目）西贝母碱提取率（%）得膏率（%）未粉碎20.88 6.332046.12 8.955048.2918.9610058.2628.3515060.5131.64图3 不同粉碎程度西贝母碱提取率及得膏率由图3可知，随粉碎粒度增加，西贝母碱提取率及得膏率均增加。
药材粉碎至过20目时，提取率与粉碎至50目以上时相差不大，但得膏率远小于粉碎至50、100、150目的得膏率，因此确定将川贝母粉碎至过20目即可。
2.3药材温浸温度的考察采用酸水提取时温度过高易导致川贝母中所含淀粉水解成支链淀粉[5]。
因此，温度对生物碱的浸出及得膏率有较大影响。
本研究以西贝母碱的提取率及得膏率为指标，比较温度对西贝母碱提取效果的影响。
取川贝母过20目粗粉20 g，以7倍量pH 为1的盐酸水溶液为提取溶剂，分别在40、60、80 ℃条件下温浸提取1 h，测定西贝母碱的提取率及得膏率，结果见表2。
表2 不同温浸温度对西贝母碱提取效果的影响温度（℃）西贝母碱提取率（%）得膏率（%）提取液状态4046.28 8.17透明，稳定6056.15 9.04透明，稳定8061.9935.14黏度大，放冷后浑浊由表2结果可知，温浸温度对西贝母碱的提取率及得膏率影响较大，随温度升高，西贝母碱提取率及得膏率均增加。
但温度高于80 ℃时，淀粉大量溶出，得膏率偏大，且提取液黏稠，放冷后浑浊不稳定。
因此，在保证西贝母碱提取率前提下，确定温浸温度为得膏率较小的60 ℃。
2.4正交优选川贝母酸水温浸提取工艺在前期试验基础上，以西贝母碱提取率为指标，采用L9（34）正交试验对川贝母提取工艺进行优选。
2.4.1 因素水平表的设计以溶剂倍量、药液pH、提取时间、提取次数为因素，每个因素设定3个水平，因素水平表见表3。
表3 川贝母提取工艺正交设计因素水平水平因素A B C（h）D11411226 1.5233823注：A：pH；B：溶剂倍量；C：提取时间；D：提取次数。
2.4.2 正交试验取川贝母20 g，粉碎过20目筛，按照L9（34）正交试验进行试验，并测定西贝母碱的提取率，结果见表4~表5。
表4 川贝母提取工艺正交试验结果试验号因素西贝母碱提取率（%）A B C D1111155.132122267.923133392.184212378.065223160.126231250.627313253.988321365.499332153.06K1215.23187.17171.24168.31K2188.80193.53199.04172.52K3172.53195.86206.28235.73R42.7 8.69 35.04 67.42表5 正交试验方差分析结果因素离差平方和均值自由度F值显著性A309.6164222154.80821122.95*B 13.4882892 6.744144 1.00C228.1176892114.05884416.91D950.9649562475.48247870.50*直观分析：R D>R A>R C>R B，因此A、D为主要因素，B、C为次要因素；A1>A2>A3，A1为最优水平；D3>D2>D1，D3为最优水平；B3>B2>B1，B3为最优水平；C3>C2>C1，C3为最优水平。