感染性疾病实验室诊断课件
第一节 概 述
• 感染性疾病：病原体 宿主 疾病 • 病原体（细菌、真菌、病毒、寄生虫 ）
一、当今感染病的特点 1 感染性病原体的种类不断发生变迁
2 宿主的免疫防御能力下降 3 内源性感染与条件致病菌的感染增加
二、 感染类型
（一）按病原体分类
1. 传统病原体感染 细菌： 病毒： 真菌：
（一）直接显微镜检查（形态与结构检查）
•
1. 染色标本检查法
染色标本：了解病原体的形态、染色性或观察宿主细胞内包涵体
• 临床意义：
1.镜检可以了解有无病原体及大致的量
2.根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原体的初步识别和分类
3.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊断和治疗疾病有
一定的参考意义
HAV particles found in fecal extracts by immunoelectron microscopy
（二）分离培养和鉴定
分离培养是微生物学诊断的金标准，是最 可靠的传统诊断技术
临床意义： 1.明确感染病原体 2.为临床提供体外抗微生物药物敏
感试验结果
1. 细菌的分离培养和鉴定
1.尽快送检
对环境敏感的细菌应保温立即送检,其他所有采集后最好在2小时内送 检,不能及时送检,应注意保存
2. 必须注意安全防护,切勿污染环境 3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接
用抽取标本的注射器运送
二、 检验方法
• 查病原体：形态与结构检查
分离培养和鉴定
• 检测病原体成分（抗原和核酸） • 检测患者血清中特异性抗体 •代谢产物 （生化试验） • 毒素：外毒素、内毒素
一 、临床标本的采集与处理
（一）标本采集的一般原则
1.早期 病程早期、急性期或症状典型时
使用抗生素前 2.无菌采集 应无污染，严格进行无菌操作
采集的标本均应盛于无菌容器内
3.根据目的菌的特性用不同的方法采集
4.适量标本,不同病程采集不同部位标本
5.安全采集
做好标记
（二）标本的处理
原则：保持病原体活力，保持标本不被污染，也不污染环境
➢ 常用鉴定试验：
中和实验 血凝抑制实验
病毒学诊断
virus
红细胞凝集抑制（HI）试验
原理： 病毒 +
红细胞
凝集
血凝现象
病毒（特异性抗体） +
红细胞
不凝集
血凝抑制现象
Confocal image showing a macrophage in the lung of a mouse infected with SARS-corona virus. Double immunofluorescence labels the macrophage in red with antibodies against Mac-2 and viral protein in green with antibodies against spike.
2.不染色标本
1) 检查生活状态下细菌的动力及运动状况 2） 螺旋体由于不易着色并有形态特征
对某些病原菌作出初步鉴定，如霍乱弧菌
常用方法 压片法(压滴法)或悬滴法 暗视野显微镜或相差显微镜检查
体癣皮屑可见关节孢子
3. 直接电镜检测EM 免疫电镜技术IEM
HAV形态电镜图 粪便标本负染 X200000
敏感动物合适部位
卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种 尿囊接种及羊膜腔接种
3．组织细胞培养： 目前培养病毒应用最广的方法
（1）原代和次代细胞培养 （2）二倍体细胞培养 （3）传代细胞培养
二）病毒鉴定
识别病毒在培养细胞中增殖
病毒在培养细胞中增殖的指标 1）细胞病变: 细胞病变效应（CPE）、包涵体 2）红细胞吸附（hemadsorption）
如CSF找到抗酸杆菌，应初步考虑结核分枝杆菌感染
革兰阳性
革兰阴性
抗酸染色
培养在McCoy细胞的沙眼衣原体 吉姆萨染 色的McCoy细胞，含大衣原体包涵体，使 部分细胞核不清楚。（吉姆萨染色,放大
1000倍）
狂犬病毒可于细胞浆中 可形成嗜酸性包涵体
新生隐球菌 墨汁负染
假丝酵母菌（白色念珠菌）
革兰染色
(三）按病原体来源 外源性感染 内源性感染
三、感染性疾病的实验诊断
（一）一般实验检测 WBC常规检查 C-反应蛋白（CRP） 血清降钙素原（PCT） 器官功能改变的检测
（二）病原学实验诊断
临床病原体检查目的
明确感染病原体 指导治疗，预防，判断预后
第二节 感染性疾病的常用病原学检测
病原学检测基本程序 ①正确、规范采集和运送标本 ②显微镜对标本或组织中的病原体的形态学检查 ③病原体的分离培养和鉴定 ④用免疫学技术对病原体抗原或相应抗体的检测 ⑤用分子生物学方法对病原体特异性基因的检测
（三）真菌的分离培养
－常用培养基 沙保（Sabourud）培养基
真菌的菌落有两种：酵母型菌落和丝状菌落
酵母型菌落
丝状菌落
新生隐球菌
假丝酵母菌（白色念珠菌）
（三）鉴定
1.糖(醇)类发酵试验 37℃孵育，观察糖发酵情况。 2.同化碳源试验 含菌生理盐水与已融化的固体同化碳
培养特征 形态特征 生化试验 血清学试验 毒力试验 药物敏感试验
培 养 特 征Biblioteka 形态特征细菌学诊断
血清学鉴定
吲哚试验
甲基红试验
枸椽酸盐利用试验
VP试验
大肠埃希菌 对照-
大肠埃希菌 对照- 大肠埃希菌 对照+ 大肠埃希菌 对照+
生化试验
（二） 病毒的分离与鉴定
一）病毒分离培养
1．动物接种
2．鸡胚培养
寄生虫 2. 新发病原体：
SARS冠状病毒 新甲型H1N1流感病毒 高致病性禽流感病毒
(二）按疾病特征分类 1. 病原体被清除 2. 隐性感染(covert infection)，亦称亚临床感染
一般占人群的90％或以上 3. 显性感染(overt infection)又称为临床感染
发病快慢和病程长短：急性感染和慢性感染 感染部位及性质：局部感染和全身感染 全身感染： ①菌血症 ②败血症 ③毒血症 ④脓毒血症
细胞病变效应（CPE）：
病毒感染细胞后引起的细胞病变，可出现细胞圆缩、裂解或细胞 肿大、数个细胞融合成多核巨细胞等。
N
36h
48h
72h
Cytopathic effect (CPE) of primary severe acute respiratory syndrome–associated coronavirus strain