实验五白细胞分类计数（DC）
教学目的：掌握血涂片制备的操作要领、瑞氏染色方法、正常外周血五种白细胞形态特点、白细胞分类技术
教学重点：血涂片制备的操作要领、瑞氏染色方法、正常外周血五种白细胞形态特点
教学内容
【原理】将血液制成血涂片，用瑞氏染液染色，根据各种白细胞形态特征分类计数100个白细胞，即可求出各种白细胞的相对比值（百分率）。

【器材】
1．显微镜
2．采血用具
3．载玻片、推片、蜡笔
4．分类计数器
【试剂】
1．瑞氏染液或瑞氏-姬姆萨染液
2．PH6.4 - 6.8磷酸盐缓冲液
【操作】
1．血片制作：（示教）
（1）良好涂片标准：
１) 呈头、体、尾舌形
２) 血膜厚薄适宜
３) 两边留有空隙
（2）涂片好坏与下列因素有关：
1）血滴大小
2）推片与玻片之间角度
3）推片速度
2．染色
（1）染色方法：
用蜡笔在血膜两头划线，将血片平放在染色架，上瑞氏染液3～5滴染１分钟，加等量缓冲液混匀染５～１０分钟，流水冲去染液，干燥后油镜检查。

（2）染色结果判断：
1）正常：外观呈粉红色；镜下红细胞染粉红色，可见有碟状感白细胞浆中的颗粒能显示各种细胞的特有色彩；核染紫红色，染色质清楚，粗细松紧可辨。

2）偏酸：红细胞和嗜酸性颗粒偏红，白细胞核呈浅兰色或不着色。

太酸则只见一片红染，白细胞除嗜酸性颗粒外，均不着色。

3）偏碱：细胞呈灰兰色，白细胞颗粒深暗，嗜酸性颗粒变成暗褐色，甚至黑色。

中性颗粒也偏粗偏碱（紫黑色），血片过厚的地方呈绿色。

3．分类方法：
（1）低倍镜观察：选择细胞分布均匀、染色好的部位转油镜下计数100～200个白细胞,求出各种白细胞所占百分比。

（2）细胞分布:
头体部以淋巴细胞较多
尾部和两侧以中性粒、单核细胞较多,片尾部,异常、大的细胞较多.
一般选择片头至片尾的2/3区域计数较好,即体尾交界处,按一定方式,有规律的移动视野。

4．外周血正常白细胞形态：（图略）
【注意事项】：
（1）未干透血膜，染色时易脱落，故血膜应干透再染色。

（2）冲洗前，先在低倍镜下观察有核细胞是否着色，否则适当延长染色时间。

（3）染液不能过少，以防蒸发，染料沉着在血膜上不易冲掉，影响观察。

（4）以流水冲去染液，防染料沉着。

（5）染色应注意保存血片尾部，不能用蜡笔划去，因体积大的细胞常在此出现。

（6）有时病人白细胞极少（一张片<100个WBC），可数50个细胞，再算出百分数，同时应注明，或数2张片子，并注明。

（7）发现幼稚或异常白细胞，应分类报告，包括在分类百分率中。

（8）如遇到不能确认的细胞，应另列入分类不明一项，如实报告，并保留血片。

（9）发现有核红细胞，应报告分类100个白细胞所见有核红细胞数。

（10）按一定顺序移动视野。

（11）白细胞总数×各种白细胞的百分率，即得各种白细胞的绝对值。

【方法学评价】
显微镜法白细胞分类是经典、传统的血细胞分类方法目前还无任何仪器可以取代。

【参考值】
DC： Nst 1％～5％
Nsg 50％～70％
E 0.5％～5％
B 0％～1％
L 20％～40％
M 3％～8％
【思考题】
1．嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞形态区别是什么？
2．白细胞核不着色可能是因为操作中那种误差引起的？。