术前化疗对进展期胃癌细胞凋亡的影响梁辉1,陈国玉1,俞学明1,冯振卿2(1.南京医科大学第一附属医院,江苏南京210029;2.南京医科大学病理教研室,江苏南京210029)摘要:[目的]研究术前化疗对进展期胃癌细胞凋亡的影响。
[方法]21例胃癌患者术前静脉滴注52氟尿嘧啶150m g /k g ・d ,术中取胃癌组织标本,应用3′2OH 末端标记法(T UNE L )检测细胞的凋亡率(AI ),与非化疗组比较。
[结果]术前应用52Fu 组总的T UNE L 指数为(8.6±3.8)%,对照组总的标记指数为(5.4±2.6)%,差异有显著性(P <0.05);52Fu 诱导作用与细胞分化有关。
52Fu 诱导胃癌细胞凋亡有剂量依赖性。
[结论]术前应用52Fu 辅助化疗可明显诱导进展期胃癌细胞凋亡,具有一定的临床应用价值。
关键词:胃肿瘤;细胞凋亡;药物疗法;氟尿嘧啶中图分类号:R735.2文献标识码:A 文章编号:1671-170X (2001)04-0231-02T he E ffect of Preo p erative Chem othera py on Cell A p o p tosis in Advanced G astric CarcinomaLIANG Hui ,CHEN G uo 2y u ,Y U Xue 2m in g ,et al.(The Fir st A ff iliated H os p ital o f Nan j in g M edical Univ er sit y ,Nan j in g 210029,China )收稿日期:2001-03-27目前临床胃癌仍以中晚期为主,为提高胃癌的切除率,改善预后,临床上倡导以手术为基础的综合治疗,其中术前化疗受到广泛关注,术前化疗主要用于中晚期胃癌,而化疗药物对于肿瘤细胞的作用主要是通过诱导癌细胞凋亡的途径。
体外细胞培养验证了多种药物和理化因素可诱导胃癌细胞凋亡,术前应用52氟尿嘧啶(52Fu )诱导进展期胃癌细胞凋亡国内未见报道。
本研究探讨其诱导凋亡的规律,报道如下。
1材料与方法1.1一般资料2000年1月～2000年12月收治的胃癌患者,随机进入术前化疗组(术前化疗+根治术)21例。
化疗组中男性15例,女性6例,平均年龄54.6岁。
对于肝肾功能异常,恶液质,未能根治以及重度贫血,年龄>70岁的患者不入组。
所有病人术前均经病理确诊,术后有病理诊断,临床资料完整,均为腺癌。
52Fu 应用方法:按150m g /k g ・d 计算用量,以0.25g 为最小剂量单位,静脉滴注至术前一天,病人最长滴注5天。
1.2DNA 原位末端标记法(T UNE L )[1]术中标本切下后即取癌组织,以10%中性甲醛固定,石蜡包埋,切片厚度4μm 。
试剂盒购自博士德公司,严格按说明操作。
1.3凋亡指数计算(AI )随机记数5个高倍镜的肿瘤细胞共500个,计算每100个细胞中阳性细胞数即凋亡指数(AI )。
1.4统计学方法各组数值以均数±标准差(x ±s )表示,显著性检验采用t 检验。
2结果2.1胃癌组织细胞凋亡的观察HE 染色下,凋亡细胞散在分布于胃腺上皮内,表现核固缩、碎裂。
末端标记后,凋亡细胞核呈棕色或棕褐色,多位于核膜上,或形成凋亡小体,部分胞Abstract :[Pur p ose ]T o stud y the effect of p reo p erative chem othera py on cell a p o p tosis in advanced g astric carcinom a.[M ethods]52Fu 150m g /k g ・d w as adm inistered intravenoul y p reo p eration 21p atients.T he a p o p tosis index of g astric carcinom a cells w as evaluated b y in situ T UNE L and com p ared betw een p re -and non 2chem othera py g rou p .[Results]T he AI w as (8.6±3.8)%in p re 2chem othera py g rou p and (5.4±2.6)%in controlg rou p .T here w as si g nificant difference betw een two g rou p s (P <0.05).T he induction of a p o p tosis b y 52Fu w as associated w ith dosa g e and g rade.[C onclusions]T his stud y su gg ests that the a p o p tosis m a y be induced b y p reo p erative adm inistration 52Fu in advanced g astric carcinom a which has the value of clinical a pp lication.K e y w ords :g astric neo p lasms ;a p o p tosis ;dru g thera py ;fluorouracil[1][2][3][4][5]浆散在阳性。
胃癌术前化疗组总标记指数为(8.6±3.8)%。
细胞分化程度与诱导凋亡的关系,52Fu 用量与凋亡率的关系以及肿瘤浸润与诱导的关系见表1、2、3。
3讨论52Fu 具有抑制肿瘤细胞胸腺嘧啶,破坏DNA 稳定性的作用,52Fu 抗肿瘤作用主要通过改变凋亡相关基因表达,诱导程序性死亡而实现,探索52Fu 诱导在胃癌凋亡的规律,有助于指导术前化疗。
本研究显示52Fu 术前应用可明显提高进展期胃癌细胞凋亡率,而且52Fu 对分化较好的细胞诱导作用较强,对于分化差的低分化腺癌及粘液腺癌的诱导与非化疗组比较无明显增强(P >0.05),体外细胞培养证实[2]52Fu 诱导作用与凋亡基因bax 激活有关,在胃癌组织中,癌细胞分化越差bax 表达越弱,bax 表达阴性则化疗耐药明显[3],本组标本仍较少,但也表现出明显的趋势,与临床实际情况相符,即恶性度越高化疗效果越差。
本组有淋巴结转移与无淋巴结转移之间的诱导作用不同,但两者无显著性差异(P >0.05),是否与化疗持续的时间有关,尚需进一步研究。
52Fu 诱导凋亡具有剂量依赖性,本组当52Fu 总量>3.0g 时与低剂量组有显著性差异(P <0.05),低剂量组与非化疗组之间无显著性差异,Inadan [4]就裸鼠内移植胃癌细胞株进行52Fu 诱导,发现时间延长,凋亡细胞数增加,至48小时达38%凋亡率,不仅有总剂量依赖性也有时间依赖性。
提示临床应用52Fu 诱导凋亡应持续给药,而且达到一定的剂量才能达到目的。
52Fu 半衰期10～20分钟,持续24小时滴注可能获事半功倍效果,是否有总量的上限有待进一步研究。
众所周知肿瘤负荷与化疗效果负相关,即肿瘤越小,效果越好。
本组化疗显示肿瘤侵犯越深广,52Fu 诱导作用越弱,肿瘤细胞群是由敏感的和耐药的克隆混合组成,晚期肿瘤凋亡率低,考虑是否与耐药克隆增强有关;同时也说明肿瘤细胞自然凋亡可能是肿瘤发生的早期事件,晚期由于肿瘤细胞自身凋亡基因的改变,外在表现为耐药基因表达改变,而早期化疗介入可能更有利于诱导凋亡,术前化疗可能阻断耐药克隆的发展,增加化疗敏感性。
也证实术前化疗对于残存的微小病灶诱导作用更强,有助于减少胃癌的腹腔转移与复发。
化疗中联合用药可获得相加或协同作用[5],不同药物在基因的不同表达阶段发挥作用,或者由蛋白至基因的反馈途径而相互影响,但多种药物术前化疗可能副反应增加,而对如期安全进行手术造成影响。
本组病人均能耐受化疗,胃肠道反应和白细胞降低是主要的副反应,短期即可控制和恢复,手术并发症无明显增加。
因此术前应用52Fu 是安全有效的。
术前化疗与术后化疗的作用和机理可能不相同,术前诱导癌细胞凋亡过程中,如何提高术前化疗的诱导作用,以及凋亡基因在凋亡过程中的改变,尚有待进一步深入研究。
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