Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ ： Ａ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｉ ｂ ｌ ｅ ａ ｎ ｄ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｉ ｆ ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｉ ｓ ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｄ ｅ ｄ ｏｒ ｆ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｄ ｅ ｘ ｔ ｒ ｏ ｉ ｓ ｏ ｍｅ ｒ ｉ ｎ Ｃ ａ ｌ ｃ ｉ ｕ ｍ ｌ ｅ ｖ ｏ ｆ ｏ ｌ ｉ ｎ ａ ｔ ｅ．
ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗ ａ ｓ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｍｅ ｒ ｄ ｏ ｎ ａ ｈ ｕ ｍ ａ ｎ ａ ｌ ｂ ｕ ｍ ｉ ｎ ｃ ｏ ａ ｔ ｅ ｄ ｓ ｉ ｌ ｉ ｃ ａ ｇ ｅ ｌ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍ ｎ （ １ ５ ０ ｍｉ ｎｘ ４ ． ０ ｍ ｍ， ５ １ ｘ ｍ） ． ｈｅ Ｔ ｍ ｏ ｂ ｉ ｌ ｅ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｗ ａ ｓ ０ ． １ ｍ ｏ ｌ ・ Ｌ ０
ｓ ｏ ｄ ｉ ｕ ｍ ｄ ｉ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｇ ｅ ｎ Ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ｅ ｂ ｕ ｆ ｅ ｒ（ ａ ｄ ｊ ｕ ｓ ｔ ｔ ｏ ｐ Ｈ ５ ． ０ ｗ ｉ ｔ ｈ ｓ ｏ ｄ ｉ ｕ ｍ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ ｉ ｄ ｅ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ） 一 ２ － ｐ ｏｐ ｒ ａ ｎ ｏ ｌ — ａ ｃ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ （ ８ ９ ０ ： ９ ５ ： １ ５ ） ． Ｔ ｈ ｅ ｌ ｆ ｏ ｗ
Ｄｅ ￣ｒ ｍｉ ｎ ａ ｉ ｆ ｏ ｎ ｏ ｆ ｄ ｅ ｘ ｔ ｒ ｏ ｉ ｓ ｏ ｍｅ ｒ ｉ ｎ Ｃａ ｌ ｃ ｉ ｕ ｍ ｌ ｅ ｖ ｏ ｆ ｏ ｌ ｉ ｎ ａ ｔ ｅ ｂ ｙ ＨＰＬＣ
Ｌ ｉ ｕ Ｆ ｅ ｎ ｇ ｌ ｊ Ｓ ｈ ｅ ｎ Ｙ ｕ ａ ｎ ｙ ｕ ａ ｎ （ Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆ ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｙ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ｊ ｉ ａ ｏ Ｔ ｏ ｎ ｇ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ ２ ４ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ ： ＨＰ Ｌ Ｃ Ｃ ａ ｌ ｃ ｉ ｕ ｍ ｌ ｅ ｖ ｏ ｏｌ ｆ ｉ ｎ ａ ｔ ｅ Ｄｅ ｘ ｔ ｏｉ ｒ ｓ ｏ ｍｅ ｒ
碱破坏 、 氧化破坏 、 光照破 亚叶酸钙相关制剂很早就 应用于临床 ，在 ２ ０世 纪 ５ ０ 年 定容。左 亚叶酸钙原料药在酸破坏 、 代， 就被用作 甲氨喋呤 的解救剂与 ５ 一 氟尿 嘧啶的增 效剂ｌ １ １ 。然 坏和高温破坏 的条件下产生 的降解产 物 ， 在选 定色谱条件下 ， 而后 期研究表 明 ， 只有左旋体 （ 左 亚叶酸钙 ， Ｃ ａ ｌ ｃ ｉ ｕ ｍ Ｌ ｅ ｖ ｏ ｏｌ ｆ ｉ — 均可与右旋异构体色谱峰 、 左亚 叶酸钙色谱峰达到 良好分离。 ｈ ａ ｔ ｅ ） 才具有 药理活性 ， 使 用左旋体 的治疗剂 量仅 为亚叶酸钙 ２ ３． ２标准曲线 和范围试验 ：精密称取亚 叶酸钙 消旋 体对照品 消旋 体的 ５ ０ ％。本文建立 了测定左亚 叶酸钙原料 药 中右旋异 适 量 ， 用水 溶解制成 ０ 。 ５ ｍ ｇ ・ ｍ Ｌ 的溶液 ， 分别 精密量取适 量 ， 构体 的 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ方法 。经过一系列 的方法验证试验证明 ， 该方法 用水稀释制成质量浓度分别为 １ ． ５ 、 ２ ． ５ 、 ５ ． ０ 、 ７ ． ５和 １ ０ ． ０ １ ｘ ｇ ・ ｍＬ － 操作简便 、 灵敏度高 、 重复性好闭 。 的溶液 ， 进样分析。以质量浓度 ｘ为横坐标 ， 峰面积 Ｙ为纵 坐 标， 进行 线性 回归 ， 右旋异构体 线性 回归 方程为 ： Ｙ ＝ ２ ９ ． １ ２ ５ Ｘ一 １ 仪器与试药 １ ． １ 仪器 ： Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ １ １ ０ ０高效液 相色谱仪 （ 安捷 伦公 司 ） ：四元 １ ． ０ ０ ２ ５ （ ｒ ＝ １ ． ０ ０ ０ ０ ） ， 由ｒ 值可知， 右旋 异构体 质量 浓 度在 １ ． ５ ～ 泵、 自动进样 器 、 紫外检测 器 、 二极管 阵列检测 器 、 柱温箱 、 工 １ ０ ． ０ ｇ ・ ｍＬ － 范围内 ， 峰面积与质量浓度线性关 系 良好 。 ． ３ － ３ 定量 限和检测 限试验 ：精密量取亚叶酸钙消旋体对 照品 作站 ， Ｂ Ｔ １ ２ ５ Ｄ电子天平 （ 赛多利斯公 司 ） ， Ｐ Ｂ — ｌ ０ 酸度计 （ 赛多 ２ 溶 液适量 ， 用水稀 释进样 ， 测 得本法最低 定量质量 浓度 为 １ ． ５ 利斯公 司） 。 １ ． ２ 试药 ：样品 ：左 亚叶酸 钙原料 （ 由相关 药厂 提供 ，批 号 Ｉ ｘ ｇ ・ ｍＬ （ Ｓ ／ Ｎ—ｌ Ｏ ） ， 进样 量 为 １ ５ ｎ ｇ （ １ ． ５ ｇ ・ ｍ Ｌ ￣ １ ０ ￣ Ｌ ｘ ｌ ０ 。 ） ， １ １ １ ０ ０ １ ， １ １ １ ０ ０ ２ ， １ １ １ ０ ０ ３ ） ； 对照 品 ： 亚 叶酸钙消旋体对 照品（ 欧 所 以本方法的定量限为 １ ５ ｎ ｇ 。 继续用水稀释该溶液 ， 测得检测 洲药 典 委员会 ， 批号 ５ ． ０ ） ； 试剂 ： 水 为重 蒸馏 水 （ 自制 ） ， 异 丙 限为 ５ ｎ ｇ 。 醇、 乙腈为 色谱纯 ， 磷酸二氢钠 、 氢氧化钠为分析纯。 ２ ． ３ ． ４精密度试验 ： 精密量取亚叶酸钙消旋体对照 品溶液 ， 连续 ２ 方法 与结果 进样 ６次 ，记 录峰 面积 。计算右旋 异构 体峰 面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ为 ９ ％。 ２ ． １色谱条件 与系统适用性试验 ：色谱柱 ： Ｃ ＨＩ Ｒ Ａ Ｌ — Ｈ Ｓ Ａ（ １ ５ ０ ０． ｍ ｍｘ ４ ． ０ ｍｍ， ５ １ ｘ ｍ） ； 流动相 ： ０ ． １ ｍｏ ｌ ・ Ｌ 磷酸 二氢 钠缓 冲液 （ 用 ２ ３． ５重复性试验 ： 同“ ２ ． ２ ” 项下方法 配制 左亚叶酸钙供试 品溶 氢氧化钠溶 液调节 ｐ Ｈ至 ５ ． ０ ） 一 异丙 醇一 乙腈 （ ８ ９ ０ ： ９ ５ ： １ ５ ） ； 流 液 ６份 ， 在上述 色谱 条件下进样 ， 记 录峰面积 。计算 右旋 异构 速： １ ． ０ ｍＬ ・ ａ ｒ ｉ ｎ 。 ； 检测波 长 ： ２ ８ ６ ｎ ｍ； 柱温： ４ Ｏ ℃； 进样 量 ： ｌ ０ 。 体 峰面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ６ ％。 ２ ． ３ ． ６稳定性试验 ： 取“ ２ ． ２ ” 项下方法 配制的左亚 叶酸钙供 试品 左亚叶酸钙和右旋异构体色谱 峰的分离度应不小于 ２ ． ０ 。 ２ ． ２溶 液 的制 备 溶液 ， 保存 于室温条件下 ， 于 ０ 、 １ 、 ２ 、 ４ 、 ６ 、 ８ 、 １ ０和 １ ２小 时分别 ０ ｔ ｘ Ｌ注入液相 色谱仪 ， 记录色谱 图。计算右旋异 构体 峰面 ２ ． ２ ． １ 对照品溶液的制备 ：精密称取 亚叶酸钙消旋体对照 品适 取 １ 量 ，用水溶解制
北方药学 ２ ０ １ ３ 年第 １ Ｏ 卷第 ８ 期
・
药品 质 量 及 检 验 ・
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法测定左 亚 叶酸钙 中的右 旋异构体 △
刘凤丽 沈 园园（ 上海交 通大学药学院 上海 ２ ０ ０ ２ ４ ０ ）
摘要 ： 目的 ： 建立测定左 亚叶酸钙原料 药中右旋异构体含 量的 高效液相 色谱方 法。方法 ： 采用 Ｃ ＨＩ Ｒ Ａ Ｌ — ＨＳ Ａ 色谱柱 （ １ ５ ０ ｍｍ ｘ ４ ． ０ ａｍ， ｒ ５ ｍ） ，流动相 为 ０ ． １ ｍｏ ｌ ・ Ｌ － 磷 酸二 氢钠缓 冲液 （ 用氢氧化钠溶液调 节 ｐ Ｈ至 ５ ． ０ ） 一 异 丙醇一 乙腈 （ ８ ９ ０ ： ９ ５ ： １ ５ ） ；流速 为 １ ． ０ ｍＬ ・ Ｂｉ ｎ － ・ ： 检测波长为 ２ ８ ６ ｎ ｍ； 柱温为 ４ ０ 。结果： 在１ ． ５ — １ ０ ． Ｏ ｌ ｘ ｇ ・ ｍＬ － 范围内线性回归方程 为 Ｙ ＝ ２ ９ ． １ ２ ５ Ｘ 一 １ ． ０ ０ ２ ５ （ ｒ － ＝ １ ． ０ ０ ０ ０ ） ， 平均 回收率 为 １ ０ ９ ） 。结论： 该 方法操作 简便 、 灵敏度 高、 重复性好。 关键词 ： 高效液相 色谱法 左亚叶酸钙 右旋异构体 中图分类号 ： Ｒ ９ ２ ７ ． ２ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ － ８ ３ ５ １ （ ２ ０ １ ３ Ｊ ０ ８ — ０ ０ ０ １ － ０ ２
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：０ｂ ｉ ｉ ｅ ｔ ｉ ｖ ｅ ： Ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ａ ＨＰ Ｌ Ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｆ ｏ ｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｄ ｅ ｘ ｔ ｒ ｏ ｉ ｓ ｏ ｍｅ ｒ ｉ ｎ Ｃａ ｌ ｃ ｉ ｕ ｍ ｌ ｅ ｖ ｏ ｆ ｏ ｌ ｉ ｎ ａ ｔ ｅ ．Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ： Ｔ ｈ ｅ
ｒ ａ ｔ ｅ ｗ ａ ｓ １ ． ０ ｍＬ・ ｍｉ ｎ～ ．Ｕｌ ｔ ｒ ａ ｖ ｉ ｏ ｌ ｅ ｔ ａ ｂ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ｗａ ｓ ｓ ｅ ｔ ａ ｔ ２ ８ ６ ｎ ｍ ａ ｎ ｄ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ｔ ｅ ｍｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｗａ ｓ ａ ｔ ４ ０ ℃ ．Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ： ｈ ｅ Ｔ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ
ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ ｄ ｅ ｘ ｔ ｒ ｏ ｉ ｓ ｏ ｍｅ ｒ ｗ ａ ｓ ｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎ １ ． ５ ａ ｎ ｄ １ ０ ． ０ ｇ ・ ｍＬ （ ｒ ＝ １ ． ｏ ０ ０ ０ ） ． ｈｅ Ｔ ａ ｖ ｅ ｒ ａ ｇ ｅ ｅ ｒ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙ ｗ ａ ｓ １ ０ ０ ． １％ ｗ ｉ ｔ ｈ Ｒ Ｓ Ｄ ｗ ａ ｓ ０ ． ８ ％．