二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（二） 2.空气、皮肤细菌检查结果测定。 3.讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。 4.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法(基本技能)
液体培养基 平板培养基 斜面培养基 双糖含铁半固体斜面培养基 5.显微镜下观察 细菌的基本形态: 球菌、枯草杆菌、霍乱弧菌。
（2）将亚碲酸钠增菌液培养物，无菌接种在卵黄高 盐琼脂平板培养基上面。
方法：分区划线接种。 37℃恒温孵育箱 24小时培养后，观察结果。
细菌基本形态 球菌
螺形菌
杆菌
葡萄球菌
链球菌
大肠埃希菌
枯草杆菌
霍乱弧菌
细菌特殊结构 鞭毛
荚膜
芽孢
spore
破伤风梭菌
实验三 药品的微生物限度检查（三） 微生物的形态学检查及药物的敏感性试验
培养基分类
根据物理性状分类： 液体培养基
半固体培养基
固体培养基
根据用途分类：
基础培养基
营养培养基
选择培养基
鉴别培养基
厌氧培养基
主要用于增菌 用于检测动力及保存菌种 用于分离鉴定细菌 普通琼脂培养基 血液琼脂培养基 SS培养基 双糖铁培养基 庖肉培养基
※ 培养基的制备程序
※ 调配→矫正pH （7.0-7.6 ）→分装→ 灭菌（121.3 ℃， 20-30 分钟）→放入冰箱冷藏备用。
一、目的要求: 1、了解细菌的生长现象及代谢产物的观察 2、掌握药品的微生物学检验程序和方法
二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（三） 2.细菌的生长现象及代谢产物的观察
1）液体培养基---沉淀、浑浊、表面生长现象。 2）三葡、三链、大肠与副伤乙培养基的菌落特征、溶血环观察。 3）双糖含铁培养基--- 动力、气体、硫化氢、分解乳糖观察。 4）结核杆菌菌落的观察。 3.中草药、抗生素抑菌试验 1）中草药---大蒜汁、黄连、黄芩、黄柏。 2）抗生素---青霉素、庆大、氨苄、新诺明、生理盐水。
2. 琼脂斜面的接种方法 3. 液体培养基接种法 4. 半固体接种法
分区划线法
菌落
斜面移种技术
菌苔
液体移种技术
穿刺技术
药物的微生物限度检查方法（二）
取出前次实验培养物观察： 1.口服药物 1)细菌鉴定：
在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长： 增菌液变混浊―――――有 ----- 接种在伊红美兰琼脂平板培养基
上面。 方法：分区划线接种。 2)细菌总数测定：
选择 30-300 个菌落平板， 细菌总数＝菌落数×稀释倍数
2.外用药 1)判定胆盐乳糖增菌液培养物及亚碲酸钠增菌液培
养物有无细菌生长： 增菌液变混浊―――有
2)细菌鉴定： （1）将胆盐乳糖增菌液培养物无菌接种在 16烷三甲
基溴化殊结构： 肺炎荚膜、变形鞭毛、破伤风芽胞。 6.培养基的种类和用途
普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基
※ 一、空气、皮肤细菌培养现象观察
（一）记录空气微生物培养结果 ? 菌落数目、大小、边缘、颜色、粗糙（光滑）
（二）记录皮肤微生物培养结果 比较消毒前后细菌菌落数，菌落特点。
※ 培养基的制备
二、实验内容 1.药品的微生物限度检查（一）
1）口服药物的检查: ①药品的预处理： ②大肠杆菌的检查： ③细菌总数的检查：
2）外用药物的检查: ①药品的预处理： ②绿脓杆菌的检查： ③金黄色葡萄球菌的检查：
2.空气、皮肤细菌检查方法(验证) 3.微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备：
高压蒸汽灭菌锅、消毒煮沸器、G6玻璃滤菌器装置、洁净工作台、 移动式 紫外光灯、鼓风式干烤箱、紫外线杀菌标本。
药品的微生物限度检查实验目的
通过实验了解药品微生物限定检查法的 意义、设计方法、细菌检查常用的基本技术 和程序，结果分析方法。
药品的微生物限度检查实验程序
一、药品的预处理 二、药品的增菌培养、结果分析 三、细菌分离鉴定、结果分析
药品的微生物限度检查实验方法（一）
1.药品的预处理
口服药 外用药
2克药品加20毫升生理盐水， 研磨制成悬液
9ml生理盐水
从剩余10ml悬液中取1ml 1ml 加入上述四个稀释管中
1ml
10-1 10-2 10-3 10-4
从上述四个稀释管中各取1ml混入溶化的琼脂培养基中， 混匀，冷却后置37℃恒温培养箱培养24小时 。
实验二 药品的微生物限度检查（二） 细菌的形态学检查及培养接种技术
一、目的要求: 1、了解细菌培养接种技术 2、掌握细菌基本形态 3、掌握药品的微生物学检验程序和方法
药物的微生物限度检查（三）
1）从伊红美兰琼脂平板培养基上----挑取黑色带有金属光泽的湿润菌落，接种在普通琼脂斜
面培养基上面，进行细菌的纯培养。 2）观察外用药物在16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上生 长状况。
的实验材料要用0.1%的新洁尔灭泡手1-2分钟 七.值日生要作好值日工作,关好水,电,门窗,作好
实验记录本的登记方可离开实验室。
实验一 药品的微生物限度检查（一） 实验室常用消毒灭菌设备 空气和皮肤细菌检查方法（综合实验+基础实验）
一、目的要求 1、了解微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备 2、了解空气、皮肤细菌检查方法 3、掌握药品的微生物学检验程序和方法
2.细菌培养
外用药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 药品混悬液10毫升加入亚碲酸钠增菌液中
37℃,24小时
口服药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 37℃,24小时
3.细菌总数测定
将剩余口服药以10-1 10-2 10-3 10-4 进行稀释 (以生理盐水稀释)
取四个中试管 各加9ml生理盐水
医学微生物学实验室规则
一.进入实验室必须穿白大衣,不必需的物品不要 携带入室。
二.保持实验室的安静和秩序,实验要严肃认真。 三.如有传染性材料的污染污染,及时报告老师。 四.实验过程中有仪器和器材的损坏要报告老师
并登记。 五.实验后的材料要放到指定的位置。 六.离开实验室前,要用肥皂洗手,接触过传染性强
? 因高压之后pH 值会下降0.1 左右，所以矫正pH 时应比 所需的pH 高。
? 鉴定是否有菌可将培养基置于37 ℃培养24 小时，然 后观察。
二、细菌的接种技术
材料
? 普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体斜面培养基 大肠埃希菌培养物（１套／台）
※方 法
1. 平板划线接种法
（1 ）平行划线法 （2 ）分区划线法