TTC检测法操作步骤
菌液制备:将菌种移种脱脂乳,经36±1℃培养15h后,以灭 菌脱脂乳1:1稀释待用。
检验：取检样9mL,置15mm×150mm试管内,80℃水浴加热 5min冷却37℃以下,加菌液1mL,36±1℃水浴培养2h,加 TTC0.3mL,36±1℃水浴培养30min,观察如为阳性,再于水 浴中培养30min作第二次观察,每份检样作二份,另外再作 阴性和阳性对照各一份,阳性对照管用无抗生素的乳8mL 加抗生素及菌液和TTC。阴性对照管用无抗生素乳9mL加 菌液和TTC。
牛奶中抗生素残留的来源
一般认为，对泌乳牛用药不当或不注 意安全时间是牛乳中抗生素残留的重 要因素，尤其是使用乳房灌注法治疗 乳腺炎时，易造成牛乳中抗生素残留。 在牛饲料中添加饲料添加剂已十分普 遍，其中含有一定比例的抗生素，主 要作用是预防疾病，这是牛奶抗生素 残留的重要原因。
鲜乳中抗生素残留量检验程序
表1 显色状态判断标准
显色状态 未显色者 徽红色者 桃红色至红色者
判断 阳性 可疑 阴性
表2 检测各种抗生素的灵敏度
抗生素名称
最低检出量
青霉素 链雹素
0.004单位 0.5单位
庆大霉素
0.4单位
卡那霉素
5单位
注意事项
• 1、配制培养基应注意的问题 • 2、嗜热链球菌的保存
TTC检测法
TTC法，即氯化三苯基四氮唑法( tripheye tetrazolium chloride)，是目前我国食品卫 生标准中规定的检查牛乳中抗生素残留的 检测方法(GB5409—85)。该法简便、快 速，无需特殊设备，3～4h可见报告，很 适合牧场、乳品厂及食品卫生检菌种:嗜热乳酸链球菌。 脱脂乳:经113℃灭菌20min。 4%2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)水溶液:称取 1gTTC,溶于5mL灭菌蒸馏水中,装褐色瓶内于7℃ 冰箱保存,临用时用灭菌蒸馏水稀释至5倍。如 遇溶液变为玉色或淡褐色,则不能再用。
• 仪器
水浴锅、培养箱、不锈钢锅、温度计、蜡笔、 试管架、1ml和10ml的灭菌吸管、灭菌试管
判断方法：准确培养30min观察结果,如为阳性,再继续培 养30min作第二次观察。观察时要迅速,避免光照过久发 生干扰。乳中有抗生素存在,则检样中虽加菌液培养物, 但因细菌的繁殖受到抑制,因此指示剂TTC不还原,不显色。 与此相反,如果没有抗生素存在,则加入菌液即行增 殖,TTC被还原而显红色,也就是说检样呈乳的原色时为阳 性,呈红色为阴性，见表1，检测各种抗生素的灵敏度见 表2 。